c. Tác dụng sinh học
2.2.2.1. Định tính bằng phản ứng hoá học
Định tính một số nhóm hợp chất hữu cơ bằng phản ứng hoá học [7], [12], [16], [20].
* Alkaloid
Cân 5 g dược liệu, thêm 2 ml amoniac, sau 10 phút, cho vào 20 ml
23
với dung dịch acid sulphuric 1N (3 lần x 10 ml). Gạn lấy lớp acid, chia 3 phần vào 3 ống nghiệm.
Cân khoảng 2 g cao thuốc, hòa tan vào 20 ml nước, lọc vào bình gạn, kiềm hóa bằng NH4OH đặc đến pH = 8-9, lắc với CHCl3 3 lần, mỗi lần 10 ml. Gộp các dịch chiết CHCl3. Lắc, chiết với dung dịch H2SO4 1N (3 lần x 10ml). Gạn lấy lớp acid, chia 3 phần vào 3 ống nghiệm.
- Phần 1, thêm 2-3 giọt thuốc thử Mayer, tạo tủa trắng (+)
- Phần 2, thêm 2-3 giọt thuốc thử Dragendorff, tạo tủa da cam (+)
- Phần 3: thêm 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat, xuất hiện kết tủa nâu đỏ (+)
* Flavonoid
Cân 5 g dược liệu, thêm 50 ml cồn 90%, đun sôi cách thủy 15 phút, lọc. Dịch lọc bốc hơi trên cách thuỷ đến cắn, hoà tan cắn với 30 ml nước. Dịch chiết nước lắc với ethylacetat 3 lần x 15 ml. Gộp các dịch chiết ethylacetat, bốc hơi dung môi, cắn thu được hòa tan trong 10 ml cồn 90 % để làm phản ứng.
Cân khoảng 2 g cao thuốc, hoà tan với 50 ml nước, lọc. Dịch lọc lắc với ethylacetat 3 lần x 15 ml. Gộp các dịch chiết ethylacetat, bốc hơi dung môi, cắn thu được hòa tan trong 10 ml cồn 90 % để làm phản ứng.
- Phản ứng Cyanidin: cho vào ống nghiệm 2 ml dịch chiết, 10 giọt HCl loãng, 1 mẩu nhỏ Mg. Lắc, đun cách thủy. Màu đỏ (+).
- Phản ứng với dung dịch kiềm loãng NaOH 10%: Lấy 2 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm dung dịch NaOH 10%, xuất hiện màu vàng, thêm HCl loãng, dung dịch chuyển thành không màu (+).
- Phản ứng với NH3: nhỏ 2 giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, sấy nhẹ đến khô, hơ lên miệng lọ amoniac đặc. Phản ứng dương tính khi thấy màu vàng đậm lên.
* Saponin
- Hiện tượng tạo bọt: 2 g cao thuốc, 5 g dược liệu thêm 50 ml ethanol 90%,
24
Dịch chiết nước lắc với n-butanol (3 15 ml). Gộp dịch chiết n-butanol, cô
cách thủy tới cắn. Hòa tan cắn trong 10 ml ethanol 90%. Lấy 1 ml dịch chiết, thêm nước cất cho đủ 10 ml, bịt ống nghiệm bằng ngón cái, lắc mạnh ống nghiệm theo chiều dọc 5 phút. Quan sát thấy cột bọt bền vững trong vòng 15 phút (+).
* Coumarin
Lấy 5 g dược liệu, 2 g cao thuốc, thêm 30 ml cồn 90o, đun sôi cách
thủy 15 phút, lọc. Dịch lọc làm phản ứng.
- Phát hiện huỳnh quang dưới ánh sáng tử ngoại: Nhỏ lên tờ giấy lọc 2 giọt dịch lọc, để khô, soi dưới ánh sáng tử ngoại, bước sóng 366 nm, thấy vết huỳnh quang xanh lơ. Nhỏ tiếp lên vết 2 giọt dung dịch NaOH 10%, che nửa vết bằng mảnh kim loại, soi dưới ánh sáng tử ngoại khoảng 30 giây, bỏ vật che ra, thấy nửa vết bị che phát quang yếu hơn. Sau đó cả hai nửa của vết chất có huỳnh quang giống nhau.
- Phản ứng mở và đóng vòng lacton: Cho vào 2 ống nghiệm giống nhau, mỗi ống 1 ml dịch lọc, thêm vào ống thứ nhất 0,5 ml dung dịch NaOH 5%, đun cách thủy 2 ống trong vài phút, để nguội. Ống 1 tủa đục vàng nhạt. Thêm vào mỗi ống 1ml nước cất. Ống 1 trở nên trong, ống 2 tủa đục. Thêm vài giọt HCl đặc vào ống 1, xuất hiện tủa.
* Tanin
Cân 2 g cao thuốc, 3 g dược liệu, thêm 20 ml nước, đun sôi vài phút rồi lọc, thu dịch lọc. Dịch lọc chia vào các ống nghiệm để làm phản ứng.
+ Ống 1: lấy 2 ml dịch lọc, thêm 2 giọt FeCl3 5%, xuất hiện màu hoặc tủa
xanh đen hoặc xanh nâu nhạt.
+ Ống 2: lấy 2 ml dịch lọc, thêm 2 giọt chì acetat 10%, xuất hiện kết tủa bông. + Ống 3: lấy 2 ml dịch lọc, thêm 5 giọt gelatin 1%, xuất hiện tủa bông trắng
25
* Acid amin
- Phản ứng với thuốc thử Ninhydrin: Cân 2 g cao thuốc, 5 g dược liệu, thêm 30 ml nước cất, đun sôi vài phút rồi lọc, thu dịch lọc. Lấy 2 ml dịch lọc, thêm vào 3 ml thuốc thử Ninhydrin 3 %, đun cách thủy trong 2 - 3 phút. Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu tím sẫm.
* Đường khử
Cân 2 g cao thuốc hoặc 5 g dược liệu vào ống nghiệm, thêm 15 ml nước cất. Đun sôi trực tiếp trong 10 phút. Để nguội, lọc, lấy dịch lọc làm phản ứng:
- Phản ứng với thuốc thử Fehling: Lấy 1 ml dịch lọc, thêm 3 giọt dung dịch thuốc thử Fehling A và dung dịch thuốc thử Fehling B, đun sôi cách thuỷ 3 phút. Dung dịch có tủa màu đỏ gạch (+).
* Polysaccharid
Lấy 5 g dược liệu, 2 g cao đặc cho vào cốc, thêm 30 ml nước, đun sôi vài phút rồi lọc, thu dịch lọc, để nguội. Chia dịch lọc vào 2 ống nghiệm. Ống 1: 4 ml dịch lọc, thêm 4 ml dung dịch thuốc thử Lugol (0,01 g Iod, 0,075 g KI, hoà tan trong 5 ml nước), màu xanh đen (+). Ống 2: 4 ml dịch lọc, thêm 4 ml nước, không có hiện tượng đổi màu gì.