c. Tác dụng sinh học
2.2.3.2. Định lƣợng flavonoid toàn phần
* Định lượng flavonoid toàn phần bằng phương pháp đo mật độ quang kết hợp với phương pháp đường chuẩn:
- Dung dịch chuẩn: Cân 0,2 g rutin cho vào bình định mức 100 ml, thêm methanol vừa đủ 100 ml, lắc kĩ. Lấy chính xác 10 ml dung dịch này vào bình định mức 100 ml khác. Thêm nước tới vạch, lắc kĩ.
Xây dựng đường chuẩn: Lấy chính xác 1,0 - 2,0 - 3,0 - 4,0 - 5,0 - 6,0 ml dung dịch chuẩn cho vào bình định mức 25 ml, thêm nước cho tới 6 ml ở mỗi bình rồi cho thêm 1ml dung dịch NaNO2 5% (TT) ở mỗi bình, lắc kĩ, để yên 6 phút. Thêm 1ml dung dịch nhôm nitrat 10% (TT), trộn kĩ, để yên 6 phút. Thêm 10 ml dung dịch NaOH 10% (TT). Thêm nước tới vạch, lắc kĩ, để yên 15 phút. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 500 nm. Dựng đường chuẩn, lấy độ hấp thụ là trục tung (Y), nồng độ là trục hoành (X).
- Dung dịch thử: Cân 5 g cao thuốc, hòa tan trong 50 ml nước, lọc. Lắc loại tạp với ether dầu hỏa (30 ml × 3). Lớp nước đun nóng nhẹ để đuổi hết ether dư. Lắc nhiều lần với ethyl acetat đến khi kiệt flavonoid. Gộp các dịch chiết lại, cô cách thủy tới cắn. Hòa tan cắn bằng methanol, thêm methanol vừa đủ 100 ml. Lấy chính xác 2,0 ml dung dịch này hòa tan vào bình định mức 10 ml, thêm nước vừa đủ, lắc kĩ. Lấy chính xác 3,0 ml dung dịch thử cho vào
bình định mức 25 ml, thêm 3,0 ml nước rồi cho thêm 1 ml dung dịch NaNO2
5% (TT) ở mỗi bình, lắc kĩ, để yên 6 phút. Thêm 1 ml dung dịch nhôm nitrat 10% (TT), trộn kĩ, để yêu 6 phút. Thêm 10 ml dung dịch NaOH 10% (TT). Thêm nước tới vạch, lắc kĩ, để yên 15 phút. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 500 nm[5], [21], [29].