bằng HPLC [7], [24], [27], [29].
2.3.1.1. Tính thích hợp của hệ thống sắc ký
- Xác định tính thích hợp của hệ thống bằng cách tiêm lặp lại 6 lần liên tiếp mẫu chuẩn có nồng độ nằm trong khoảng tuyến tính. Ghi lại thời gian lƣu và diện tích pic của các lần sắc ký.
- Yêu cầu: chênh lệch diện tích pic, tR giữa các lần tiêm của cùng một mẫu, biểu thị bằng độ lệch chuẩn tƣơng đối (RSD) không lớn hơn 2%.
2.3.1.2. Tính chọn lọc của phương pháp
- Tạo mẫu trắng với các thành phần tá dƣợc tƣơng tự nhƣ trong chế phẩm nhƣng không có hoạt chất GF.HCl (mẫu placebo). Xử lý mẫu rồi tiến hành sắc ký với các điều kiện nhƣ mẫu thử.
- Yêu cầu: trên sắc ký đồ của mẫu placebo thu đƣợc, tại thời điểm xuất hiện pic của GF.HCl không đƣợc xuất hiện pic lạ.
2.3.1.3. Tính tuyến tính và khoảng xác định
- Tiến hành xác lập mối tƣơng quan giữa diện tích pic với nồng độ GF.HCl. Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn GF.HCl có nồng độ tăng dần. Tiến hành sắc ký, xây dựng phƣơng trình hồi quy và xác định hệ số tƣơng quan r.
- Yêu cầu: đƣờng hồi quy thu đƣợc phải có dạng đƣờng thẳng và giá trị r ≥ 0,995.
2.3.1.4. Độ chính xác
Độ chính xác của một quy trình phân tích diễn tả sự thống nhất (mức độ phân tán) kết quả giữa một loạt phép đo từ nhiều lần lấy mẫu trên cùng một mẫu thử đồng nhất dƣới những điều kiện mô tả.
- Độ lặp lại (Độ chính xác trong cùng điều kiện định lƣợng): xác định độ lặp lại của phƣơng pháp bằng cách tiến hành 6 phép thử song song trên một
mẫu chế phẩm. Ghi sắc ký đồ, diện tích pic của hoạt chất. Tính hàm lƣợng của GF trong mẫu thử. Đánh giá sự phân tán số liệu dựa vào giá trị RSD.
Yêu cầu: chênh lệch kết quả giữa các lần thử, biểu thị bằng độ lệch chuẩn tƣơng đối RSD phải không lớn hơn 2%.
- Độ chính xác khác ngày: Diễn tả mức dao động của kết quả trong cùng một phòng thí nghiệm đƣợc thực hiện ở các ngày khác nhau. Yêu cầu: chênh lệch kết quả giữa các lần thử, biểu thị bằng độ lệch chuẩn tƣơng đối RSD trong ngày phải không lớn hơn 2% và trong 2 ngày phải không lớn hơn 3%.
2.3.1.5. Độ đúng của phương pháp
- Xác định độ đúng của phƣơng pháp bằng phƣơng pháp thêm chuẩn vào mẫu placebo. Lƣợng chất chuẩn thêm vào tƣơng ứng với khoảng 80%, 100%, 120% lƣợng hoạt chất có trong mẫu thử (đảm bảo nồng độ ở trong khoảng tuyến tính của phƣơng pháp định lƣợng). Ở mỗi nồng độ, tiến hành với 3 lần thử nghiệm riêng biệt.
- Tính tỷ lệ thu hồi của GF.HCl chuẩn thêm vào mẫu thử. - Yêu cầu: tỷ lệ thu hồi đạt 98,0% – 102,0%.