Khảo sát hiệu giá khàng thể và giám sát virus cúm a h5n1 sau tiêm phòng ở đàn gà nuôi tại một số huyện ngoại thành hà nội

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  CẤN THANH BẰNG KHẢO SÁT HIỆU GIÁ KHÁNG THỂ VÀ GIÁM SÁT VIRUS CÚM A/H 5 N 1 SAU TIÊM PHÒNG Ở ðÀN GÀ NUÔI TẠI MỘT SỐ HUYỆN NGOẠI THÀNH HÀ NỘI CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà SỐ : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. NGUYỄN BÁ HIÊN HÀ NỘI – 2013 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan rằng: - ðây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. - Các kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. - Mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày 12 tháng 10 năm 2013 Tác giả luận văn Cấn Thanh Bằng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii LỜI CẢM ƠN Trong suốt 2 năm học tập và hoàn thành luận văn, với nỗ lực của bản thân, tôi ñã nhận ñược sự giúp ñỡ, hướng dẫn tận tình của nhiều cá nhân và tập thể, cho phép tôi ñược tỏ lòng biết ơn và cảm ơn chân thành tới: Ban Giám hiệu Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, Ban ñào tạo, Ban chủ nhiệm Khoa Thú y,, Cơ quan Thú y vùng I, các thầy cô giáo ñã giúp ñỡ, tạo ñiều kiện ñể tôi học tập, tiếp thu kiến thức của chương trình học. Thầy hướng dẫn khoa học PGS.TS. Nguyễn Bá Hiên. Ban Lãnh ñạo và tập thể cán bộ Chi cục Thú y Hà Nội. Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi ñược gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia ñình, người thân cùng bạn bè ñã ñộng viên giúp ñỡ tôi vượt qua mọi khó khăn trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu, thực hiện ñề tài. Một lần nữa tôi xin bày tỏ lòng biết ơn, cảm ơn chân thành tới những tập thể, cá nhân ñã tạo ñiều kiện giúp ñỡ tôi hoàn thành chương trình học tập. Hà Nội, ngày 12 tháng 10 năm 2013 Tác giả luận văn Cấn Thanh Bằng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv MỤC LỤC Lời cam ñoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh mục các bảng vii Danh mục các hình viii Danh mục các từ viết tắt ix MỞ ðẦU 1 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1 Khái niệm bệnh cúm gia cầm. 3 1.2 Tình hình dịch cúm gia cầm trên thế giới và Việt Nam. 3 1.2.1 Tình hình bệnh cúm gia cầm trên thế giới. 3 1.2.2 Tình hình bệnh cúm gia cầm tại Việt Nam. 7 1.3 Dịch tễ học bênh cúm gia cầm. 9 1.3.1 Loài nhiễm bệnh. 9 1.3.2 Mùa phát bệnh 9 1.3.3 Sự truyền lây 9 1.4 Virus học bệnh cúm gia cầm 10 1.4.1 ðặc ñiểm hình thái, cấu trúc của virus cúm type A 10 1.4.2 ðặc tính kháng nguyên của virus cúm type A 12 1.4.3 ðộc lực của virus. 14 1.4.4 Sức ñề kháng của virus cúm 15 1.5 Miễn dịch chống bệnh của gia cầm 16 1.5.1 Miễn dịch không ñặc hiệu 16 1.5.2 Miễn dịch ñặc hiệu 18 1.5.3 Miễn dịch chủ ñộng 19 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v 1.5.4 Miễn dịch thụ ñộng 20 1.5.5 Những yếu tố ảnh hưởng ñến sự hình thành kháng thể. 21 1.6 Phòng chống bệnh cúm gia cầm 21 1.6.1 Phòng bệnh 21 1.6.2 Chống dịch 25 Chương 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Nội dung nghiên cứu 27 2.2 ðịa ñiểm nghiên cứu 27 2.3 Vật liệu nghiên cứu 27 2.4 Phương pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Phương pháp ñiều tra hồi cứu 27 2.4.2 Phương pháp phân tích dịch tễ học 28 2.4.3 Phương pháp lấy mẫu và bảo quản mẫu 29 2.4.4 Kiểm tra hiệu giá kháng thể và giám sát virus cúm sau tiêm phòng 29 2.4.5 Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) 30 2.4.6 Phương pháp Realtime RT-PCR phát hiện virus cúm gia cầm 33 2.4.7 Phương pháp xử lý số liệu. 36 Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Tình hình chăn nuôi và diễn biến dịch cúm gia cầm ở Hà Nội. 38 3.1.1 Ttình hình nhiễm cúm gia cầm trên ñịa bàn thành phố Hà Nội 40 3.1.2 ðặc ñiểm về dịch tễ học bệnh cúm gia cầm theo quy mô chăn nuôi 43 3.2 Tình hình chăn nuôi và diễn biến dịch cúm gia cầm ở một số huyện 45 3.3 Tình hình tiêm phòng vaccine cúm gia cầm tại một số huyện 47 3.3.1 Kết quả tiêm phòng vaccine cúm gia cầm giai ñoạn 2010-2013 47 3.3.2 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể của gia cầm nuôi tại 5 huyện 50 3.4 Kết quả giám sát huyết thanh và virus ở một số trại 51 3.4.1 Kết quả kiểm tra hiệu giá huyết thanh kháng virus cúm A/H5N1 52 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi 3.4.2 Tổng hợp kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể sau khi tiêm vaccine 58 3.4.3 Kết quả giám sát sự lưu hành của virus tại 3 trại gà ñã tiêm vaccine 60 3.4.5 Kết quả ñiều tra, giám sát sự lưu hành của virus cúm A/H5N1 tại các chợ buôn bán gia cầm 61 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 63 1 Kết luận 63 2 ðề nghị 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Số lượng ca nhiễm cúm gia cầm trên người 6 2.1 Primer và probe ñặc hiệu cho virus cúm A/H5N1 35 2.2 Thành phần phản ứng 35 3.1 Tổng ñàn gia cầm trên ñịa bàn Thành phố Hà Nội qua các năm 2010 – 2013 39 3.2 Tình hình dịch cúm gia cầm tại Hà Nội từ 2003 – 2006 41 3.3 Tình hình dịch cúm gia cầm tại Hà Nội từ 2007 – 2013 42 3.4 Tỷ lệ mắc bệnh cúm gia cầm trên ñịa bàn thành phố Hà Nội theo quy mô chăn nuôi giai ñoạn 2003 – 2013 44 3.5 Tổng ñàn gia cầm của năm huyện từ năm 2010 – T6/2013 45 3.6 Thiệt hại do bệnh cúm gia cầm gây ra ở một số huyện 46 3.7 Thống kê kết quả tiêm phòng vacine cúm gia cầm tại 5 huyện ngoại thành Hà Nội từ 2010 – T6/2013. 48 3.8 Kết quả giám sát huyết thanh sau tiêm phòng tại 5 huyện 50 3.9 Hiệu giá kháng thể của lô thí nghiệm (trại 1) 53 3.10 Hiệu giá kháng thể của lô thí nghiệm (Trại 2) 54 3.11 Hiệu giá kháng thể của lô thí nghiệm (Trại 3) 56 3.12 Tỷ lệ bảo hộ và GMT của 3 lô thí nghiệm 57 3.13 Tổng hợp kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể ở 3 trại 59 3.14 Kết quả giám sát sự lưu hành của virus 61 3.15 Kết quả giám sát virus cúm tại các chợ gia cầm sống (2010-2012) 61 3.16 Kết quả giám sát virus cúm tại các chợ gia cầm sống (6 tháng 2013) 62 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Hình thái và cấu trúc virus cúm gia cầm 11 2.2 Mô hình cấu trúc kháng nguyên HA của virus cúm A 12 3.1 Bản ñồ Thành phố Hà Nội 38 3.2 Tổng ñàn gia cầm trên ñịa bàn Thành phố Hà Nội qua các năm 2010 – 2013 39 3.3 Biểu ñồ tỷ lệ mắc cúm theo loại gia cầm (2003 – 2006) 41 3.4 Biểu ñồ tỷ lệ mắc cúm theo loại gia cầm (2007 – 2013) 43 3.5 Biến ñộng tỷ lệ mắc cúm theo quy mô ñàn 44 3.6 Diễn biến tổng ñàn gia cầm của 5 huyện từ 2009 – T6/2013 46 3.7 Biểu ñồ A: Tỷ lệ tiêm phòng vaccine cúm gia cầm của 5 huyện 49 3.7 Biểu ñồ B: Tỷ lệ tiêm phòng vaccine cúm gia cầm của 5 huyện 49 3.8 Tỷ lệ bảo hộ trên ñàn gia cầm sau tiêm phòng vaccine H5N1 51 3.9 Biến ñộng hiệu giá kháng thể trung bình của ñàn gà trại số 1 57 3.10 Biến ñộng hiệu giá kháng thể trung bình của ñàn gà trại số 2 58 3.11 Biến ñộng hiệu giá kháng thể trung bình của ñàn gà trại số 3 58 3.12 ðường biểu diễn hiệu giá kháng thể trung bình của gà ở 3 trại 60 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ix DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BNN&PTNT Bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn. FAO Food and Agricalture Organization. HPAI Highly Pathogenic Avian Influenza. HGKTTB Hiệu giá kháng thể trung bình. KN Kháng nguyên. KT Kháng Thể. LPAI Low Pathogenic Avian Influenza. Phản ứng HA Hemagglutination test. Phản ứng HI Hemagglutination Inhibition test. OIE Office International des Epizooties. ORF Open reading frame. PBS Phosphate Buffered Saline. RT – PCR Real time - Polymerase Chain Reaction TCN Tiêu chuẩn ngành. WHO World Health Organization. XN Xét nghiệm. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 1 MỞ ðẦU ðặt vấn ñề Trong những năm gần ñây ở nước ta, ngành chăn nuôi nói chung và ngành chăn nuôi gia cầm nói riêng luôn gặp phải rất nhiều khó khăn, thách thức: Hiện tượng nhập lậu gia cầm tràn lan, tồn tư kháng sinh, chất ñộc hại trong gia cầm, dịch bệnh làm cho nhiều nhà chăn nuôi thua lỗ, phá sản. ðặc biệt một số bệnh truyền nhiễm nguy hiểm có khả năng lây sang người, trong ñó có bệnh cúm gia cầm. Bệnh cúm gia cầm ñã ñược biết ñến từ lâu sau những vụ ñại dịch gây ra cho các ñàn gia cầm ở nhiều nước. Hiện nay, bệnh cúm gia cầm thể ñộc lực cao (HPAI) ñang là mối quan tâm hàng ñầu của tất cả các nước trên thế giới. Dịch bệnh xảy ra ñã giết chết hàng chục triệu gia cầm, ñồng thời kéo theo ñó là hàng tỷ gia cầm khác bị tiêu hủy bắt buộc ñể tránh lây lan, gây thiệt hại nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi và kinh tế của các nước có dịch. Khi mới xuất hiện ở nước ta vào năm 2003, bệnh ñã thể hiện tính chất lây lan nhanh và gây hậu quả ñặc biệt nghiêm trọng. Thời gian ñầu của dịch bệnh từ ngày 27/12/2003 ñến 30/04/2004, chỉ trong vòng hơn 4 tháng dịch ñã làm cho 2.574 xã/phường thuộc 381 huyện/thị xã của 57 tỉnh/thành trên cả nước mắc bệnh. Tổng số gia cầm bị chết do bệnh và tiêu hủy lên tới 43,9 triệu con. Trong thời gian gần ñây, mặc dầu chúng ta ñã có nhiều biện pháp phòng chống dịch nhưng bệnh vẫn ñang xảy ra trên phạm vi rộng và ngày càng nguy hiểm hơn, ñặc biệt là số người mắc và tử vòng ngày càng tăng. Năm 2003 ở Việt Nam chỉ có 3 người nhiễm và cả 3 người tử vong, trên thế giới có 4 người nhiễm và cả 4 người tử vong. Nhưng ñến tháng 4/2013 theo thống kê của WHO ñã có 631 trường hợp người nhiễm virus A/H5N1, trong ñó tử vong 372 trường hợp tại 15 quốc gia; ở Việt Nam ñã ghi nhận 125 ca mắc bệnh và tử vong 62 trường hợp. Với ñặc ñiểm của bênh là có nhiều subtupe khác nhau và khả năng tổ hợp biến chủng ñã làm cho căn bệnh ngày càng trở nên nguy hiểm hơn gây nhiều thiệt hại cho người chăn nuôi, ñe dọa tính mạng [...]... thay ñ i vaccine ñ ñ i phó v i các trư ng h p này không ð ng trư c tình hình ñó chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: “Kh o sát hi u giá kháng th và giám sát virus cúm A/ H5N1 sau tiêm phòng ñàn gà nuôi t i m t s huy n ngo i thành Hà N i ” M c tiêu nghiên c u c a ñ tài - ðánh giá ñư c tình hình chăn nuôi và di n bi n d ch cúm gia c m trên ñ a bàn Hà N i - ðánh giá tình hình tiêm phòng, t l b o h sau tiêm. .. c a vaccine cúm gia c m trên ñàn gà ñã ñư c tiêm phòng trên ñ a bàn Hà N i - Giám sát ñàn gà sau tiêm phòng t i các tr i thí nghi m ñ ñánh giá ñư c hi u qu c a vi c s d ng vaccine trong vi c phòng b nh cúm gia c m Ý ngh a khoa h c và th c ti n - Các k t qu thu ñư c là cơ s ñ nh hư ng và xây d ng k ho ch cho chương trình tiêm phòng vaccine cúm gia c m trong ph m vi c nư c Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà. .. virus cúm có nhi u acid amin basic t i v trí cleavage site và ngư c l i Protein NA chính là m t lo i enzym có tên là neuraminidase Khi virus xâm nh p vào cơ th , các m ch ñư ng c a protein HA và th th c a t bào s liên k t v i nhau, g n virus vào b m t t bào Sau ñó nh neuraminidase c t m i liên k t này ñi làm cho virus có th vào bên trong, sau khi HA ñư c c t ñôi, ho c n u không như v y, virus s b r i ra... Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 26 Chương 2 N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 N i dung nghiên c u - Tình hình chăn nuôi và di n bi n d ch cúm gia c m Hà N i - Tình hình chăn nuôi và di n bi n d ch cúm gia c m m t s huy n - Tình hình tiêm phòng vaccine cúm gia c m t i m t s huy n - K t qu giám sát huy t thanh và virus m t s tr i - K t qu ñi u tra, giám sát s lưu hành c a. .. axit cơ b n, vì th ñánh giá ñ c l c c a virus trên cơ s gây nhi m cho gia c m và sau ñó phân tích s s p x p các amino axit c a các virus (Tr n H u C n và Bùi Quang Anh, 2004) ð ñánh giá ñ c l c c a virus cúm m t cách khoa h c, các nhà nghiên c u s d ng phương pháp gây b nh cho gà 3 - 6 tu n tu i b ng cách tiêm tĩnh m ch 0,2 ml nư c tr ng ñã ñư c gây nhi m virus v i t l pha loãng 1/10, sau ñó ñánh giá. .. i vaccine n u sau ñó con v t tr l i kh e m nh và có mi n d ch Tính an toàn c a m t vaccine còn ph thu c vào th i ñi m ñ a vaccine vào cơ th con v t + Hi u l c Hi u l c c a vaccine ph thu c vào nhi u y u t , trong ñó tính kháng nguyên c a virus vaccine và tính ñ c hi u gi a kháng th sinh ra và kháng nguyên là quan tr ng nh t Nh ng virus có tính kháng nguyên cao và gi ñư c tính kháng nguyên cao sau khi... phát d ch cúm gia c m th ñ c l c cao gà và v t S lây lan nhanh chóng d ch cúm gia c m x y ra ñ ng th i m t s nư c ñã tr thành m i quan tâm l n trên toàn c u (Tô Long Thành, 2004) Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 4 ð n gi a năm 2005 d ch cúm H5N1 ñã lan r ng ra Kazakhstan, Nga ñ n khu v c Châu Âu như: Rumani, Hy L p, Th Nhĩ Kỳ, khu v c Châu Phi và c khu... a virus cúm A/ H5N1 t i các ch buôn bán gia c m 2.2 ð a ñi m nghiên c u - ð t i ñư c ti n hành trên ñ a bàn 5 huy n và các ch buôn bán gia c m thu c khu v c ngo i thành Hà N i bao g m: Chương M , Thư ng Tín, ng H a, Phú Xuyên, Thanh Oai 2.3 V t li u nghiên c u - Huy t thanh c a gà - D ch nh p ho c h u h ng c a gà (m u swab) - H ng c u gà ñư c l y t gà hoàn toàn kh e m nh v lâm sàng và trong huy t thanh... t c các virus cúm gia c m Ch nh ng ñ ng v t nhi m b nh trên th c ñ a m i t o ra kháng th nhóm A (Nucleoprotein) và phát hi n ra kháng th này qua ph n ng ngưng k t trên th ch ho c ph n ng ELISA Theo quan ñi m c a OIE, FAO, thì vaccine nên ñư c s d ng thành m t chi n lư c toàn di n phòng ch ng d ch cúm gia c m, bao g m 5 công ño n là: An toàn sinh h c, nâng cao nh n th c ngư i dân, giám sát và ch n ñoán,... Tizard, 1982), (Ito, T and Y Kawaoka, 1998) Hình 2.2 Mô hình c u trúc kháng nguyên HA c a virus cúm A (A: C u trúc không gian m t ñơn phân c a phân t HA, hai dư i ñơn v HA1 và HA2 B: C u trúc phân t kháng nguyên HA g n trên b m t v virus Lipid bilayer of envelope: l p lipid kép c a v virus, Receptor site: V trí g n kháng nguyên HA v i th th b m t t bào nhi m, 4 major antigenic variable regions: 4 vùng bi . BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  CẤN THANH BẰNG KHẢO SÁT HIỆU GIÁ KHÁNG THỂ VÀ GIÁM SÁT VIRUS CÚM A/ H 5 N 1 SAU TIÊM PHÒNG Ở ðÀN GÀ NUÔI TẠI MỘT SỐ HUYỆN. tra hiệu giá kháng thể sau khi tiêm vaccine 58 3.4.3 Kết quả giám sát sự lưu hành c a virus tại 3 trại gà ñã tiêm vaccine 60 3.4.5 Kết quả ñiều tra, giám sát sự lưu hành c a virus cúm A/ H5N1. gây ra ở một số huyện 46 3.7 Thống kê kết quả tiêm phòng vacine cúm gia cầm tại 5 huyện ngoại thành Hà Nội từ 2010 – T6/2013. 48 3.8 Kết quả giám sát huyết thanh sau tiêm phòng tại 5 huyện