Nghiên cứu sản xuất phôi invivo bò hmông tỉnh bắc kạn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THU THẢO N GHIÊN CỨU SẢN XUẤT PHÔI INVIVO BÒ H’MÔNG TỈNH BẮC KẠN LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : THÚ Y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học :1. TS. SỬ THANH LONG 2. ThS. NGUYỄN THỊ THOA HÀ NỘI-2012 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan rằng số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này trung thực và chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam ñoan số liệu và một số hình ảnh sử dụng trong luận văn ñã ñược sự ñồng ý của ThS Nguyễn Thị Thoa - chủ nhiệm ñề tài ”Nghiên cứu một số biện pháp khoa học và công nghệ ñể phục hồi và phát triển ñàn bò của ñồng bào Mông tỉnh Bắc Kạn”. Tôi xin cam ñoan rằng mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thu Thảo Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt hai năm học tập và hoàn thành luận văn, với nỗ lực của bản thân, tôi ñã nhận ñược sự giúp ñỡ, hướng dẫn tận tình của nhiều cá nhân và tập thể, cho phép tôi ñược tỏ lòng biết ơn và cảm ơn chân thành tới: Ban Giám hiệu trường ñại học Nông nghiệp Hà Nội, viện ðào tạo Sau ñại học, các thầy cô trong khoa Thú y và bộ môn Ngoại Sản ñã giúp ñỡ, tạo ñiều kiện thuận lợi ñể tôi học tập, tiếp thu kiến thức của chương trình học. ðặc biệt tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy hướng dẫn khoa học TS. Sử Thanh Long - bộ môn Ngoại Sản khoa Thú y ñã tận tình hướng dẫn tôi trong quá trình nghiên cứu và xây dựng luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể cán bộ, công nhân viên công tác tại bộ môn Sinh sản viện Chăn nuôi, ñặc biệt tôi xin chân thành cảm ơn ThS. Nguyễn Thị Thoa ñã giúp ñỡ và ñịnh hướng cho tôi từng bước ñi trong khoa học. Xin chân thành cảm ơn Ban giám ñốc, tập thể cán bộ công nhân viên trung tâm Moncada - viện Chăn nuôi, trung tâm ứng dụng Khoa học và Công nghệ tỉnh Bắc Kạn - sở Khoa học và Công nghệ Bắc Kạn, Bộ Khoa học và Công nghệ, các hộ nông dân tại 3 huyện Chợ ðồn, Ba Bể, Pác Nặm - tỉnh Bắc Kạn ñã hướng dẫn, giúp ñỡ và tạo ñiều kiện tốt nhất cho chúng tôi thực hiện ñề tài. Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi ñược gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia ñình, người thân cùng bạn bè ñã ñộng viên giúp ñỡ tôi vượt qua mọi khó khăn trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu, thực hiện ñề tài. Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thu Thảo Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii PHẦN I: MỞ ðẦU 1 1.1. ðặt vấn ñề 1 1.2. Mục ñích nghiên cứu của ñề tài 2 1.3. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn 2 PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2 2.1. Nghiên cứu trên thế giới 3 2.2. Nghiên cứu trong nước 5 2.3. Cơ sở khoa học của công nghệ sản xuất phôi invivo 6 2.3.1. Cơ chế hoạt ñộng của hormone sinh sản 6 2.3.2. Chu kỳ sóng nang trứng 7 2.3.3. Kích thích nang trứng phát triển ñồng loạt bằng sự tác ñộng hormone 9 2.3.4. Cơ chế thụ tinh 13 2.3.5. Quá trình phát triển của hợp tử ñến giai ñoạn phôi nang 15 2.3.6. Cấu tạo phôi bò 16 2.3.7. Cơ chế ñông lạnh phôi 21 2.3.8. Giải ñông phôi 25 2.3.9. Giới thiệu về bò H’Mông 26 PHẦN III: ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 3.1. ðối tượng, ñịa ñiểm và thời gian 29 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 3.2. Nội dung 29 3.3. Phương pháp 29 3.3.1. Phương pháp gây rụng trứng nhiều 29 3.3.2.Thu hoạch phôi 35 3.3.3. Phân loại phôi 37 3.3.4. ðánh giá phân loại phôi theo chất lượng 38 3.3.5. Phương pháp ñông lạnh phôi 39 3.3.6. Phương pháp thu thập và xử lý số liệu 40 PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 4.1. Tình hình chăn nuôi bò H’Mông tại 3 huyện Ba Bể, Chợ ðồn và Pác Nặm 41 4.2. Kết quả nghiên cứu sản xuất phôi 44 4.2.1. Kết quả gây rụng trứng nhiều 44 4.2.2. Kết quả thu hoạch phôi 47 4.3. Kết quả ñánh giá phân loại phôi 54 4.3.1. ðánh giá phân loại phôi sau khi thu hoạch 54 4.3.1.1. ðánh giá phân loại phôi theo chất lượng 54 4.3.1.2. ðánh giá phân loại phôi theo giai ñoạn phát triển 59 4.3.2. ðánh giá phân loại phôi sau khi giải ñông 61 4.3.2.1. ðánh giá phân loại phôi theo chất lượng 61 4.3.2.2. ðánh giá phân loại phôi theo giai ñoạn phát triển 63 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 65 5.1 Kết luận 65 5.2 ðề nghị 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 I. Tiếng Việt 66 II. Tiếng nước ngoài 67 PHỤ LỤC 74 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT anti-PMSG anti-Pregnant Mare Serum Gonadotropin BSA Bovine Serum Albumin CIDR Controlled internal drug release Cs Cộng sự EG Ethylene Glycol eCG Equine Chorionic Gonadotropin FBS Fetal Bovine Serum FCS Fetal Calf Serum FRH Folliculin Releasing hormone FSH Follicle Stimulating hormone GðDðP Gây ñộng dục ñồng pha GnRH Gonadotropin Releasing Hormone GRTN Gây rụng trứng nhiều hCG Human Chorionic Gonadotropin HF Holstein Friesian LH Luteinizing hormone LH-RH Lutein Releasing hormone LRH Lutein Releasing hormone LTH Luteo Tropic hormone Ø ðường kính PBS Phosphate-Buffered Saline PG Prostaglandin PGF 2α Prostaglandin F 2 alpha PMSG Pregnant Mare Serum Gonadotropin PRH Prolactin Releasing hormone PRID Progesterone Releasing Intravaginal Device TTNT Thụ tinh nhân tạo UI Urinary Infection Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Trình tự phát triển của phôi bò 18 Bảng 2.2: Phân loại chất lượng phôi bò 20 Bảng 3.1: Quy trình gây rụng trứng nhiều 31 Bảng 4.1: Cơ cấu ñàn bò H’Mông tại các xã ñược ñiều tra 42 Bảng 4.2: Số thể vàng thu ñược khi GRTN 46 Bảng 4.3: Số phôi thu ñược qua các lần gây rụng trứng nhiều 48 Bảng 4.4a: Tỷ lệ số phôi thu ñược so với số thể vàng kiểm tra 51 Bảng 4.4b: Tỷ lệ số phôi thu ñược so với số thể vàng kiểm tra 52 Bảng 4.5a: Kết quả ñánh giá phân loại phôi theo chất lượng 56 Bảng 4.5b: Kết quả ñánh giá phân loại phôi theo chất lượng 57 Bảng 4.6: ðánh giá phân loại phôi sau thu hoạch theo giai ñoạn phát triển 59 Bảng 4.7: ðánh giá phân loại phôi sau giải ñông theo chất lượng 62 Bảng 4.8: ðánh giá phân loại phôi sau giải ñông theo giai ñoạn phát triển 63 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Diễn biến ñộng thái của các hormone trong máu ở các giai ñoạn trong chu kỳ ñộng dục ở bò cái 8 Hình 2.2: Hình sóng nang trong một chu kỳ sinh dục Hình 2.3: Sự di chuyển và phát triển của phôi xuống tử cung Hình 2.4: Cấu tạo phôi bò Hình 2.5a,b: Bò H’Mông Hình 2.5c: Bò H’Mông Hình 3.1: Dụng cụ thu phôi Hình 3.2: Mô hình cọng rạ chứa phôi 10 16 17 26 27 37 40 Hình 4.1: Cơ cấu ñàn bò H’Mông tại các xã ñược ñiều tra 43 Hình 4.2: Số thể vàng thu ñược khi gây rụng trứng nhiều 47 Hình 4.3: Số phôi thu ñược qua các lần gây rụng trứng nhiều 49 Hình 4.4: Số phôi thu ñược so với số thể vàng kiểm tra 53 Hình 4.5: Tỷ lệ số phôi thu ñược so với số thể vàng kiểm tra 53 Hình 4.6: ðánh giá phân loại phôi sau thu hoạch theo chất lượng 58 Hình 4.7: Tỷ lệ phân loại phôi sau thu hoạch theo chất lượng 58 Hình 4.8: Tỷ lệ phôi sau thu hoạch theo giai ñoạn phát triển 60 Hình 4.9: ðánh giá phân loại phôi sau giải ñông theo chất lượng 63 Hình 4.10: ðánh giá phân loại phôi sau giải ñông theo giai ñoạn phát triển 64 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 1 PHẦN I MỞ ðẦU 1.1 ðặt vấn ñề Bò H’Mông là giống bò mới ñược phát hiện ở các tỉnh miền núi phía Bắc từ năm 1997, ñây là giống bò ñược ñồng bào dân tộc H’Mông ở vùng cao nuôi giữ từ lâu theo phương thức chăn thả tự do. Bò H’Mông có chất lượng thịt thơm ngon, thịt bò H’Mông Cao Bằng ñã ñược giới thiệu sản phẩm tại siêu thị BigC Hà Nội vào tháng 4/2009 và ñược người tiêu dùng rất quan tâm ñón nhận. Việc phát triển chăn nuôi bò H’Mông là cần thiết, vừa ñáp ứng công tác bảo tồn ña dạng di truyền vật nuôi vừa ñáp ứng nhu cầu thịt bò chất lượng cao của người tiêu dùng. Giống bò của ñồng bào H’Mông tỉnh Bắc Kạn là một trong những ñộng vật nuôi phổ biến và có nhiều ñặc ñiểm ưu việt như khả năng chống chịu cao và có chất lượng thịt ngon. Mặc dù vậy hiện nay giống bò này ñang có nguy cơ bị thoái hoá về giống do vấn ñề cận huyết kéo dài. Việc khai thác giống bò của ñồng bào H’Mông mang tính tự phát thiếu ñiều tiết ñã mang lại một số bất cập mà chúng ta phải quan tâm như sau: Số bò bán ñi thường là con to, có sản lượng thịt lớn. Số còn lại kém hơn và thường giữ lại làm giống. Việc bán hoặc thịt ñi một số bò tốt sẽ gây thoái hóa ñàn bò còn lại, bò ñực giống chưa ñược chọn lọc và phân bố hẹp vì vậy cần phải phục hồi và phát triển ñàn bò. Phương thức chăn nuôi vẫn mang nặng tính truyền thống “thủ công, sản xuất nhỏ” không ñủ sức ñể cạnh tranh với thương trường. Chưa có hệ thống chọn lọc nhân giống, quản lý giống ñể phát huy tiềm năng di truyền về năng xuất, sản lượng và chất lượng giống. Hiện nay, các nghiên cứu về bò của ñồng bào H’Mông còn rất hạn chế, nội dung nghiên cứu chỉ tập trung chủ yếu vào ñặc ñiểm sinh học của bò. Giống bò H’Mông mới ñược giới khoa học quan tâm từ năm 1998. Tuy nhiên, từ ñó ñến nay cũng chỉ ñược nghiên cứu về ñặc ñiểm sinh học, thiếu Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 2 các nghiên cứu mang tính chuyên nghiệp và tổng thể về ñiều kiện chăn nuôi, nghiên cứu phục hồi và phát triển ñàn bò. Vấn ñề ñặt ra là cần phải có một số giải pháp về khoa học công nghệ sinh sản ñể phục hồi và phát triển giống bò của ñồng bào H’Mông Bắc Kạn nói riêng và của Việt Nam nói chung. ðồng thời kết quả thu ñược sẽ góp phần ñịnh hướng trong công tác nghiên cứu khoa học và chuyển giao công nghệ phục hồi, khai thác và phát triển một cách hợp lý có hiệu quả nguồn gen quý hiếm giống bò H’Mông của Bắc Kạn và các ñịa phương khác trong việc phát triển nền chăn nuôi ña dạng sinh học và bền vững của Việt Nam. Có thể nói, ứng dụng công nghệ cấy truyền phôi và các kỹ thuật liên quan trong ñó kỹ thuật sản xuất phôi invivo là một trong những phương pháp có thể ñem lại hiệu quả cao trong việc sử dụng nguồn gen quý ñể phục hồi và phát triển giống bò H’Mông Bắc Kạn. Xuất phát từ thực tế, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài: “Nghiên cứu sản xuất phôi invivo bò H’Mông tỉnh Bắc Kạn”. 1.2. Mục ñích nghiên cứu của ñề tài Nghiên cứu ứng dụng công nghệ phôi invivo ñể khôi phục và phát triển giống bò của ñồng bào H’Mông Bắc Kạn. Nâng cao năng suất sinh sản và bảo tồn nguồn gen quý hiếm giống bò H’Mông Bắc Kạn. 1.3. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn Chúng tôi hy vọng ñề tài sẽ cung cấp cho bạn ñọc những thông tin và số liệu cụ thể về tình hình chăn nuôi, quy mô ñàn bò H’Mông trên ñịa bàn các huyện Chợ ðồn, Ba Bể, Pác Nặm - tỉnh Bắc Kạn. ðồng thời với những tiến bộ khoa học ñược áp dụng, giúp nâng cao hiệu quả chăn nuôi bò H’Mông và tăng thu nhập cho người chăn nuôi. Các kết quả nghiên cứu thu ñược của ñề tài là cơ sở giúp cán bộ kỹ thuật, người chăn nuôi phát triển ñàn bò ñể giữ nguồn gen quý và tạo ra sản phẩm thịt ñạt cả về số lượng và chất lượng. [...]... ñ t tiêu chu n c y phôi r t th p (Schilling và cs, 1981) Olivera-Angel và cs (1984) nghiên c u v t l thu phôi và ch t lư ng c a phôi sau khi gây r ng tr ng nhi u b ng eCG (2000UI) trên bò th t tơ và bò th t ñang cho bú cho th y bò tơ t l thu phôi ch ñ t 15% và t l phôi phát tri n bình thư ng là 40%, th p hơn nhi u so v i t l thu phôi ñ t 39% và t l phôi phát tri n bình thư ng 67% bò ñang cho bú Ph n... bò có chu kỳ dài 15-27 ngày (Crister và cs, 1988) Tu i bò lúc gây r ng tr ng nhi u cũng nh hư ng ñ n k t qu t o phôi Ph n ng r ng tr ng nhi u bò tơ chưa ñ và bò ñ 1-5 l n thư ng cao hơn so v i bò ñã ñ trên 6 l n (Greve, 1982) Ch t lư ng phôi thu ñư c sau gây r ng tr ng nhi u bò s a 12 tháng tu i kém hơn so v i bò s a ñã ñ 1-2 l a, trong trư ng h p bò tơ, s tr ng r ng có xu hư ng cao hơn nhưng t l phôi. .. phát tri n c a phôi cùng k t qu c a các nghiên c u, ngư i ta thư ng thu phôi vào ngày th 7 sau khi ph i gi ng Phôi th i ñi m này thích h p nh t ñ thu phôi và s d ng cho c y truy n cũng như các nghiên c u khác (Ngu n: Jaana Peippo và cs, 2011) Hình 2.3: S di chuy n và phát tri n c a phôi xu ng t cung 2.3.6 C u t o phôi bò Hình thái chung c a phôi giai ño n 7 ngày tu i sau khi th tinh, phôi thư ng có... truy n phôi ñã ñư c th c hi n t i vi n Chăn nuôi Ngày 03/03/2002, c p bê cái sinh ñôi t m t phôi c t thành 2 phôi ñã ra ñ i ðây là thành công ñ u tiên Vi t Nam v công ngh cloning t t bào phôi Ngày 14/01/2004, con bê ñ u tiên sinh ra t phôi th tinh ng nghi m do cán b nghiên c u vi n Chăn nuôi qu c gia th c hi n Năm 2010, k t qu nghiên c u c a Nguy n Th Thoa cho bi t s phôi thu ñư c ñ t 5,75 phôi/ bò/ l... phôi và 46 phôi/ bò/ năm, t l có ch a Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 5 ñ t 38-41,83% và t l ñ ñ t 28,11-30% Nh ng k t qu trên ch ng t r ng chúng ta ñã nghiên c u ng d ng thành công công ngh c y truy n phôi trên ñ ng v t ñ ng th i kh ng ñ nh công ngh phôi bò ñã ng d ng thành công trong ñi u ki n chăn nuôi Vi t Nam nư c ta, nghiên c u ñông l nh phôi bò. .. 120C/phút) sau khi kh nư c b ph n nhi t ñ hi n trư ng trên phôi bò ñã thành công (Nguyen và cs, 1984) Năm 2003, Lưu Công Khánh và cs nghiên c u t l s ng c a phôi ñông l nh-gi i ñông ñ t 73,24% và ñã thành công trong vi c nghiên c u ng d ng ñông l nh ch m phôi bò b ng glycerol Năm 2006, Nguy n Th Thoa và cs ñã nghiên c u thành công ñông l nh phôi bò b ng phương pháp t o th th y tinh (Vitrification method,... khi ph i gi ng nh ng t bào phôi s ti t ra m t ít d ch và hình thành nên m t xoang g i là xoang phôi, phôi khi ñã hình thành xoang g i là phôi nang (blastocyst) Xoang phôi l n d n lên ñ y kh i t bào v m t c c, kh i t bào này g i là ñĩa phôi hay m m phôi, m m phôi sau này bi t hóa hình thành nên các cơ quan b ph n cơ th Kh i t bào bao b c m m phôi và thành vách c a xoang phôi g i là l p màng nuôi hay... i t bào bên trong Phôi nang: xoang phôi lúc này ñó l n >50% di n tích kh i t bào và ñ y m m phôi v m t c c, xoang v m t c c Phôi nang trương n : ñư ng kính c a phôi tăng 1,2-1,5 l n, ñ ng th i màng trong su t m ng ñi 1/3 so v i ban ñ u Phôi thoát màng: màng trong su t v ra, phôi ñang ho c ñã chui ra kh i màng, hình dáng c a phôi lúc này không c ñ nh Nó bao g m kh i t bào phôi (m m phôi) và màng nuôi... p …………………… 15 xoang g i là xoang phôi, xoang này d n l n lên và có th nh n bi t qua kính hi n vi, phôi khi ñó hình thành xoang g i là phôi nang (blastocyst) Xoang phôi l n d n lên ñ y kh i t bào v m t c c, kh i t bào này g i là ñĩa phôi hay m m phôi M m phôi sau này bi t hóa hình thành nên các cơ quan b ph n cơ th Kh i t bào bao b c m m phôi và thành vách c a xoang phôi g i là l p màng nuôi hay dư... khác nhau C y truy n phôi và nh ng k thu t liên quan là công ngh sinh h c sinh s n hi n ñ i ñư c r t nhi u nhà khoa h c trên th gi i quan tâm nghiên c u và ng d ng trong chăn nuôi Nghiên c u ng d ng công ngh C y truy n phôi (CTP), ñã nhân nhanh nh ng gi ng bò thu n ñ a phương n i ti ng trên th gi i như bò Red Sind (Pakistan), bò Sahiwal ( n ð ), gi ng bò ðen (Nh t B n) Các gi ng bò ôn ñ i c a châu Âu . giống bò H’Mông Bắc Kạn. Xuất phát từ thực tế, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài: Nghiên cứu sản xuất phôi invivo bò H’Mông tỉnh Bắc Kạn . 1.2. Mục ñích nghiên cứu của ñề tài Nghiên cứu. năng xuất, sản lượng và chất lượng giống. Hiện nay, các nghiên cứu về bò của ñồng bào H’Mông còn rất hạn chế, nội dung nghiên cứu chỉ tập trung chủ yếu vào ñặc ñiểm sinh học của bò. Giống bò. TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THU THẢO N GHIÊN CỨU SẢN XUẤT PHÔI INVIVO BÒ H’MÔNG TỈNH BẮC KẠN LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : THÚ Y Mã số