Mục tiêu của đề tài Tìm hiểu sự lưu hành virus cúm AH5N1 trên đàn thủy cầm tại một số chợ của tỉnh Hà Tĩnh. Phát hiện sớm các ổ dịch nghi cúm trên đàn gia cầm tại tĩnh Hà Tĩnh để kịp thời xử lý, tránh lây lan.
“Giám sát sự lưu hành của virus cúm A/H5N1 trên gia cầm tại một số huyện của tỉnh Hà Tĩnh bằng phương pháp rRT - PCR” PHẦN 1 MỞ ĐẦU Cùng với ngành trồng trọt, chăn nuôi là ngành không thể thiếu trong sản xuất nông nghiệp của nước ta. Trong những năm qua, ngành chăn nuôi đã phát triển rất đa dạng với nhiều đối tượng và phương thức chăn nuôi khác nhau góp phần mang lại những bữa ăn ngon, đáp ứng nhu cầu ngày càng cao của con người, góp phần tăng thu nhập cho người chăn nuôi. Trong đó, phải kể đến ngành chăn nuôi gia cầm, là một ngành đóng vai trò quan trọng và thiết yếu. Hàng năm, ngành chăn nuôi gia cầm cung cấp một khối lượng thực phẩm đứng thứ hai sau chăn nuôi lợn, chiếm 17% tổng thịt hơi các loại. Theo số liệu từ Tổng cục thống kê năm 2010 đàn gia cầm có 300,5 triệu con, tăng 7,3% so với năm 2009. Số lượng thịt gia cầm 621,2 nghìn tấn, tăng 17,5% so với năm 2009. Trứng gia cầm 6371,8 triệu quả, tăng 16,5% so với năm 2009. Cũng theo Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn, năm 2011 lượng thịt gia cầm tăng 16,8%, sản lượng trứng tăng 18,97% so với năm 2010. Như vậy, chăn nuôi gia cầm đang ngày càng phát triển với sự tăng lên về số lượng. Tuy nhiên, trong những năm gần đây, ngành chăn nuôi gia cầm đã và đang gặp không ít khó khăn. Nhiều dịch bệnh đã xảy ra buộc phải tiêu hủy toàn đàn gây thiệt hại lớn cho người chăn nuôi và nền kinh tế đất nước. Đặc biệt, nhiều dịch bệnh không chỉ xảy ra trên vật nuôi mà còn lây sang người gây tử vong. Một trong số đó là bệnh cúm gia cầm. 1 Cúm gia cầm là một bệnh truyền nhiễm nguy hiểm lây sang người. Nhiều nước trên thế giới và ở Việt Nam, cúm gia cầm đã làm nhiều người bị thiệt mạng. Kể từ thời gian đầu có dịch (tháng 12/2003) cho đến nay (12/4/2012) đã có 258 người tử vong do cúm gia cầm trong số 423 ca nhiễm H5N1 tại 15 nước, chủ yếu là ở Châu Á. Ở Việt Nam đã có 123 người nhiễm virus cúm A/H5N1 tại 40 tỉnh/thành phố, trong đó có 61 trường hợp tử vong (theo số liệu của Tổ chức Y tế thế giới – WHO). Trong thời gian gần đây, mặc dù đã có nhiều biện pháp phòng chống dịch nhưng bệnh vẫn đang xảy ra trên phạm vi rộng và ngày càng nguy hiểm hơn. Theo thống kê sơ bộ của Cục Thú y, chỉ tính riêng 6 tháng đầu năm 2011 (tính đến ngày 15/6/2011) cả nước có 17 tỉnh xảy ra cúm gia cầm với tổng số là 50.347 con gia cầm bị nhiễm bệnh. Tổng số gia cầm bị tiêu hủy trên cả nước là 80.762 con. Trong đó, Bắc Trung Bộ và duyên hải miền Trung là vùng có số lượng gia cầm bị nhiễm bệnh lớn nhất 16.578 con, chiếm 33% số lượng gia cầm bị nhiễm trên cả nước. Với đặc điểm của căn bệnh là có nhiều biến chủng khác nhau và khả năng tổ hợp biến chủng đã làm cho căn bệnh ngày càng trở nên nguy hiểm hơn, việc kiểm soát và khống chế bệnh gặp khó khăn hơn. Chưa kể, virus này còn tồn tại cả trên các đàn thủy cầm nhưng lại không biểu hiện bệnh. Để góp phần hạn chế thiệt hại do cúm gia cầm thì việc điều tra, khảo sát tình hình lưu hành virus cúm là vấn đề cấp bách rất cần thiết hiện nay. Đồng thời vấn đề đặt ra là yêu cầu sự chính xác cao trong quá trình chẩn đoán bệnh. Phương pháp realtime RT - PCR (rRT - PCR) không chỉ đáp ứng được đòi hỏi này mà còn thể hiện được điểm ưu việt hơn so với các phương pháp chẩn đoán trước đây. Xuất phát từ tính thực tế đó, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “Giám sát sự lưu hành của virus cúm A/H5N1 trên gia cầm tại một số huyện của tỉnh Hà Tĩnh bằng phương pháp rRT - PCR” Mục tiêu của đề tài − Tìm hiểu sự lưu hành virus cúm A/H5N1 trên đàn thủy cầm tại một số chợ của tỉnh Hà Tĩnh. − Phát hiện sớm các ổ dịch nghi cúm trên đàn gia cầm tại tĩnh Hà Tĩnh để kịp thời xử lý, tránh lây lan. 2 PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 2.1. KHÁI NIỆM VỀ BỆNH CÚM GIA CẦM Bệnh cúm gia cầm (trước đây còn được gọi là bệnh dịch tả gà - Fowl plague) là một bệnh truyền nhiễm gây ra bởi virus cúm type A thuộc họ Orthomyxoviridae với nhiều type phụ khác nhau. Các virus cúm type A gây nhiễm cho gia cầm được chia làm hai nhóm: Nhóm virus gây bệnh cúm gia cầm thể độc lực cao (Highly Pathogenic Avian - HPAI) có tỉ lệ chết cao (có thể lên đến 100%) chủ yếu ở các phân type H5 và H7. Nhóm virus cúm gia cầm thể độc lực thấp (Lowly Pathogenic Avian - LPAI) gây ra bệnh có triệu chứng nhẹ, chủ yếu ở đường hô hấp. Bệnh cúm gia cầm thể độc lực cao (HPAI) là một trong những bệnh đầu tiên do virus gây ra được mô tả ở gia cầm. Đây là một bệnh truyền nhiễm cấp tính lây lan rất mạnh ở gia cầm. Bệnh được tổ chức Thú y thế giới (OIE) xếp vào bảng A - bảng danh mục các bệnh nguy hiểm nhất ở động vật. Bệnh xảy ra ở nhiều nơi trên thế giới và gây thiệt hại rất lớn về kinh tế cũng như đời sống xã hội. 3 2.2. TÌNH HÌNH BỆNH CÚM GIA CẦM TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 2.2.1. Tình hình bệnh trên thế giới Bệnh cúm gia cầm xảy ra nhanh và mạnh trên đàn gia cầm, làm chết và tiêu hủy với số lượng lớn. Vụ dịch đầu tiên được ghi nhận vào năm 1878 tại Italia với tỉ lệ chết cao ở đàn gia cầm và được gọi tên là “dịch tả gà”. Năm 1959, bệnh xảy ra trên đàn gia cầm tại Scotland do H5N1 gây ra [7]. Năm 1983-1984, virus cúm gia cầm chủng H5N2 gây ra vụ dịch ở Pensylvania, bang New Jersay, Virginia Mỹ làm chết hơn 10 triệu gà, thiệt hại 60 triệu đô la. Chính phủ Mỹ còn phải chi 349 triệu đô la cho công tác chẩn đoán, tiêu độc môi trường và hỗ trợ thiệt hại cho các cơ sở chăn nuôi phải tiêu hủy đàn gà [32]. Năm 1997, ở Hồng Kông dịch cúm gia cầm xảy ra do chủng virus H5N1 gây ra, làm tiêu hủy gần như toàn bộ đàn gia cầm. Điều quan trọng là người có khả năng nhiễm chủng virus cúm Hồng Kông/1997 ở dạng cấp tính và tỉ lệ tử vong cao [30]. Năm 2000, dịch cúm gia cầm lại tái phát ở vườn thú Hồng Kông [17]. Từ cuối năm 2003 bệnh cúm A/H5N1 đã xảy ra với quy mô lớn và tốc độ bùng phát rất nhanh ở các nước châu Á. Đến cuối tháng 2/2004 đã có 11 nước và vùng lãnh thổ công bố dịch cúm gia cầm do virus H5N1 gây ra, bao gồm: Hàn Quốc, Nhật Bản, Thái Lan, Campuchia, Lào, Indonesia, Malaysia, Trung Quốc, Hồng Kông, Mông Cổ và Việt Nam [7], [13], [16], [25]. Ngoài ra, còn có các ổ dịch cúm gia cầm do các chủng khác như H5N2 ở Nhật Bản, Zimbabue (H5N2), Mỹ (H3N2), Canada (H7N3), Pakistan (H7N3 và H9N2), Italia (H5N2), Mêhico (H5N2), Triều Tiên (H7N7) [23]. Người bị phơi nhiễm chủng virus cúm gia cầm H7N7 (A/H7) từ gà, vịt tại các nông trang nhiễm. Từ tháng 2 đến tháng 6/2003 Navani đã đánh giá trên 3410 trường hợp có nguy cơ lây nhiễm bệnh cúm gia cầm, 453 nguyên nhân chết khác nhau, 349 trường hợp viêm kết màng mắt, 90 trường hợp ốm giống bệnh cúm và 67 trường hợp khác. Tại phòng thí nghiệm dịch swab được khẳng định bằng RT - PCR tỉ lệ dương tính lần lượt là 23%, 7,8% và 6,0% [29]. Tính từ năm 2003 - 2005 đã có 55 nước và vùng lãnh thổ bị dịch cúm gia cầm bùng phát làm 250 triệu con gia cầm chết hoặc tiêu hủy bắt buộc, có 258 người nhiễm cúm gia cầm, trong đó 154 người chết [15]. Cho đến nay dịch cúm gia cầm đã bùng phát và diễn ra ở hầu khắp quốc gia trên các châu lục [31]. 4 2.2.2. Tình hình bệnh cúm gia cầm ở Việt Nam Theo báo cáo của Cục Thú y, dịch cúm gia cầm được ghi nhận tại nước ta vào cuối năm 2003, diễn biến tình hình dịch cúm gia cầm ở Việt Nam được chia nhiều giai đoạn [12]. Đợt dịch thứ nhất (từ cuối tháng 12/2003 đến hết tháng 01/2004): Dịch xuất hiện đầu tiên tại trại gà giống của công ty C.P ở xã Thuỷ Xuân Tiên, huyện Chương Mỹ, tỉnh Hà Tây, gây ốm chết 8.000 con gà trong 4 ngày. Ngày 02/01/2004, Công ty tiến hành tiêu huỷ 100.000 gà. Trong thời gian này dịch xảy ra ở hai tỉnh Tiền Giang và Long An, đồng thời lan nhanh sang các tỉnh An Giang, Vĩnh Long, Bến Tre, Đồng Tháp, Cần Thơ, Hậu Giang [2]. Giữa tháng 01/2004, dịch lan rộng khắp cả nước: Thành phố Hồ Chí Minh, các tỉnh miền Đông Nam Bộ (Bình Dương, Tây Ninh, Đồng Nai), các tỉnh miền Bắc (Hà Nội, Bắc Ninh, Nam Định, Sơn La, Hòa Bình, Thanh Hóa, Hà Nam, Phú Thọ), tiếp đó là các tỉnh miền Trung, Tây Nguyên. Đợt dịch thứ hai (đợt cao điểm từ ngày 01/02 đến ngày 10/02/2004): Trong những ngày đầu tháng 2 dịch bùng phát rất nhanh, xảy ra trên quy mô lớn và diễn biến phức tạp. Bình quân mỗi ngày có khoảng 150 – 230 xã, 15 – 20 huyện phát sinh ổ dịch mới trên phạm vi cả nước. Ngày cao điểm nhất có 27 xã, 20 huyện thị mới phát sinh dịch. Số gia cầm phải tiêu hủy hàng ngày từ 2 – 3 triệu con, ngày cao điểm nhất phải tiêu hủy 4 triệu con (ngày 06/02). Đợt dịch thứ ba (từ ngày 11/02 đến ngày 27/02/2004): - Từ ngày 11-20/02 dịch có chiều hướng giảm dần, không có huyện, tỉnh mới phát sinh ổ dịch. Bình quân mỗi ngày có từ 20 – 30 xã phát sinh ổ dịch mới. Số gia cầm phải tiêu hủy hàng ngày giảm chỉ còn từ 0,2 – 0,7 triệu con (cao nhất ngày 11/02 là 0,84 triệu con, thấp nhất ngày 15/02 là 17.864 con). - Từ ngày 21/02 dịch cơ bản đã được khống chế, chỉ phát sinh thêm một vài thôn ấp của một số xã đã phát dịch trước đây, số gia cầm phải tiêu hủy giảm rõ rệt (ngày 25/02 là 1.438 con, ngày 26/02 chỉ còn 45 con). 5 - Tính đến ngày 27/02, dịch bệnh đã xảy ra ở 2.574 xã, phường (24,6% số xã phường), 381 huyện, thị (60% số huyện, thị) thuộc 57 tỉnh, thành phố ở đồng bằng sông Cửu Long, Đông Nam Bộ, đồng bằng sông Hồng. Dịch xảy ra nặng ở các tỉnh: Long An (185 xã), Tiền Giang (135 xã), An Giang (145 xã), Đồng Tháp (116 xã), Hà Tây (134 xã), Hải Dương (144 xã). Một số tỉnh xuất hiện ở diện hẹp như: Cao Bằng, Lai Châu (2 xã), Hà Tĩnh (5 xã), Hòa Bình, Bình Phước (6 xã), Lạng Sơn (8 xã), Kiên Giang (9 xã). Tình hình dịch cúm gia cầm H5N1 trong các năm 2005 – 2012 được tóm tắt như sau: − Năm 2005 tổng số gà, vịt, ngan mắc bệnh, chết, tiêu huỷ hơn 4,78 triệu con (trong đó có 2,38 triệu con tiêu huỷ trong ổ dịch, 2,42 triệu con tiêu huỷ tự nguyện do không tiêu thụ được hoặc thuỷ cầm phải tiêu huỷ bắt buộc do ấp nở trái phép ở đợt dịch thứ 3) chiếm 2,17% tổng đàn, trong đó gà chiếm 1,816 triệu con, thuỷ cầm chiếm 2,968 triệu con. Ngoài ra còn có hơn 1 triệu con chim các loại khác chết và tiêu huỷ [12]. − Năm 2006 ở cả 3 miền không xảy ra dịch, do sự chỉ đạo quyết liệt của Chính phủ, Ban chỉ đạo quốc gia và hiệu quả chiến dịch tiêm phòng đợt 2 năm 2005 và đợt 1 năm 2006 [12]. Dịch xảy ra ở mức độ và địa bàn ít hơn nhiều các năm trước. Các ổ dịch xảy ra chủ yếu trên đàn vịt chăn nuôi nhỏ lẻ, dưới 3 tháng tuổi, ấp nở trái phép và chưa được tiêm phòng vacxin. Trừ Cà Mau, Bạc Liêu, ở các địa phương khác dịch lây lan chậm, quy mô dịch nhỏ, được bao vây và dập tắt ngay (kể cả Hải Dương, Hà Tây) do có sự chủ động phát hiện dịch và tiêm phòng tốt. Tuy nhiên, việc để dịch tái phát do công tác tiêm phòng đợt 2 năm 2006 chưa được triệt để, việc tiêm phòng bổ sung không được thực thi nghiêm túc nên dịch xảy ra trên các đàn chưa tiêm phòng [12]. + Đợt 1: Từ 06/12/2006 đến 07/03/2007 dịch xảy ra trên 83 xã, phường của 33 huyện, quận thuộc 11 tỉnh. Tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu huỷ 103.094 con, trong đó gà 13.622 con, vịt, ngan là 89.472 con. Nặng nhất ở Cà Mau, Bạc Liêu, các tỉnh khác dịch xảy ra lẻ tẻ và dập tắt nhanh chóng. + Đợt 2: Từ 01/05 đến 23/08/2007 dịch xảy ra ở 167 xã, phường của 70 huyện, thị thuộc 23 tỉnh, thành phố. Tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu hủy là 294.849 con (215 gà chiếm 7,31%, 264.549 vịt chiếm 89,71% và 8.775 ngan chiếm 2,98%). Dịch bùng phát nặng ở các tỉnh Nghệ An, Nam Định và Điện Biên. 6 Sau hơn một tháng khống chế thành công dịch cúm gia cầm trong phạm vi cả nước, từ ngày 01/10/2007 dịch đã tái phát ở 15 xã, phường của 9 huyện, thị thuộc 6 tỉnh là Trà Vinh, Quảng Trị, Nam Định, Cao Bằng, Hà Nam và Bến Tre. Tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu hủy là 8.850 con (1.024 gà chiếm 12%, 7.826 vịt chiếm 88%). Dịch dây dưa, kéo dài ở các tỉnh Quảng Trị, Trà Vinh và Cao Bằng, còn các tỉnh khác dịch chỉ xảy ra ở hộ nhỏ lẻ và được dập tắt ngay. − Đầu năm 2008, dịch cúm gia cầm mới chỉ xảy ra trên tỉnh Trà Vinh sau đó dịch đã xảy ra trên các tỉnh khác như Thái nguyên, Tuyên Quang, Quảng Bình, Hải Dương, Nam Định, Nghệ An, Hà Tĩnh và nhiều tỉnh khác. Trong năm 2008 dịch đã xảy ra trên 80 phường/xã thuộc 54 huyện/thị trấn của 27 tỉnh/thành phố. Tổng số gia cầm mắc bệnh là 13.007 con và tổng số gia cầm tiêu hủy là 106.058 con [10]. − Năm 2009, tính từ đầu năm đến ngày 22/12/2009 cả nước đã có 129 ổ dịch tại 17 xã/phường của 35 huyện/thị xã thuộc 17 tỉnh/thành phố phát dịch cúm gia cầm là: Bạc Liêu, Bắc Ninh, Cà Mau, Điện Biên, Đồng Tháp, Hậu Giang, Khánh Hòa, Nghệ An và một số tỉnh khác. Tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu hủy là 105.605 con, trong đó gà 23.733 con (chiếm 22,51%), vịt 79.138 con (chiếm 74,94%) và ngan 2.690 con (chiếm 2,55%). Trong năm 2009, dịch bệnh đã diễn ra trên 72 xã/phường thuộc 36 huyện/thị trấn của 18 tỉnh. Tổng số gia cầm mắc bệnh 68.463 con, tổng số gia cầm chết và tiêu hủy là 105.601 con [10]. Qua những số liệu trên ta thấy năm 2009 dịch bệnh đã giảm về phạm vi (số phường/xã) tuy nhiên số lượng gia cầm chết và tiêu hủy năm 2009 tương đương năm 2008 và bằng 1/3 so với năm 2007. − Trong năm 2010, dịch cúm gia cầm xảy ra trên 68 xã/phường của 41 huyện/quận thuộc 23 tỉnh/thành phố. Tổng số gia cầm mắc bệnh 59.809 con, tổng số gia cầm chết và tiêu hủy là 87.590 con. − Năm 2011, trên cả nước dịch bệnh đã xảy ra ở 82 xã/phường của 43 huyện/quận thuộc 22 tỉnh/thành phố. Tổng số gia cầm mắc bệnh là 110.311 con, số gia cầm chết và tiêu hủy là 151.356 con. − Trong năm 2012 (tính từ ngày 01/01/2012 đến ngày 22/2/2012), dịch cúm gia cầm xảy ra ở 36 xã, phường của 29 huyện, quận thuộc 12 tỉnh, thành phố là: Hải Phòng, Hải Dương, Thái Nguyên, Hà Nam, Bắc Giang, Bắc Ninh, Quảng Trị, Thanh Hóa, Sóc Trăng, Kiên Giang, Hà Tĩnh và Quảng Nam. Tổng 7 số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu hủy là 51.983 con, trong đó gà là 5.058 con (chiếm 9,7%), vịt là 46.399 con (chiếm 89,3%), ngan là 526 con (chiếm 1%). Có thể nói rằng dịch cúm gia cầm ngày càng diễn ra phức tạp trên phạm vi toàn quốc. Do vậy, công tác phòng chống dịch ngày càng phải chặt chẽ hơn, ý thức người dân cũng phải nâng cao hơn. 8 2.3. VIRUS HỌC BỆNH CÚM GIA CẦM TYPE A 2.3.1. Cấu trúc chung của virus cúm Virus cúm có màng lipid bọc bên ngoài, chủ yếu là lipid có gốc phosphor, số còn lại là cholesterol, glucolipid và một ít hydrate carbon gồm các loại galactose, ribose, fructose, glucosamin [18]. Trên màng này có 2 loại protein là Hemagglutinine (HA) và Neuraminidase (NA). Bên trong virus có 2 thành phần gồm ARN và protein (chủ yếu là glycoprotein). ARN của virus cúm là loại sợi đơn có cấu trúc đa hình dễ thay đổi, có vỏ bọc, có kích thước từ 80 – 120 nm. ARN của virus chiếm 0,8 – 1,1%; protein chiếm 70 – 75%; lipid chiếm 20 – 24%; hydrate carbon chiếm 5 – 8% khối lượng hạt virus [18]. Bộ gen ARN của virus cúm type A có 8 phân đoạn mã hoá cho 10 loại protein khác nhau. Các phân đoạn gen ARN của virus cúm được xác định đặc tính bởi các cầu nối phân đoạn ở đầu 5' và đầu 3' [6]. ARN được bao bọc bởi các protein, chủ yếu là NP (nucleoprotein) và protein M (Matrix) tạo ra nucleocapsid. Các protein của virus bao gồm và có chức năng sau: - HA: Là một trimer có bản chất glycoprotein type I có chức năng bám dính vào thụ thể tế bào. - NA: Là một tetramer, có nhiệm vụ cắt acid sialic, giúp HA gắn vào thụ thể và giúp giải phóng ARN từ endosome (thể nội bào) và tạo hạt virus mới. - M2: Là tetramer có chức năng tạo khe H+ nhằm giúp cởi vỏ virus. - M1: Tập hợp (assembly) các thành phần của virus và gây ra hiện tượng nảy chồi (budding) để giải phóng virus mới hình thành. - PB1, PB2, NP và PA: Có nhiệm vụ bảo vệ, sao chép và biên dịch ARN. - NS2: Kết hợp với M1 có nhiệm vụ chuyển ARN từ trong nhân tế bào ra ngoài nguyên sinh chất. - NS1: Là protein không cấu trúc (không là đơn vị tạo thành hạt virus) được tổng hợp trong quá trình nhân lên của virus và có nhiệm vụ cắt ARN và kích thích sự phiên mã trong quá trình nhân lên của virus [1]. 9 Hình 2.1. Virus H5N1 (cytokinestorm.com) 2.3.2. Tính đa dạng và độc lực của virus Các virus cúm type A gây nhiễm cho gia cầm được chia làm hai nhóm: Loại virus có độc lực thấp - LPAI và chủng virus có độc lực cao - HPAI bao gồm các virus thuộc phân type H5 và H7 [22]. Độc lực của các phân type virus cúm A trên gia cầm thay đổi tuỳ theo loài vật chủ (gà, vịt, chim hoang dại ), và có thể biến chuyển mức độ độc lực theo thời gian hoặc khi xảy ra hiện tượng tái tổ hợp gen với các phân type virus cúm khác [28]. Hiện nay, virus cúm A có tất cả 16 kháng nguyên H (H1 – H16), 9 kháng nguyên N (N1 – N9) và hầu hết chúng đều liên quan đến động vật. Chúng có thể tạo ra 144 chủng virus cúm và hơn 256 dạng cúm. Tuy nhiên, trong những năm gần đây, subtype virus cúm A/H5N1 có độc lực đã gây nhiễm chéo giữa các loài và có thể gây nhiễm cho người [15], [18], [21]. Độc lực của virus cúm gia cầm được đánh giá bằng cách gây bệnh cho gà 4-6 tuần tuổi: Tiêm vào tĩnh mạch cánh 0,2 ml nước trứng đã được gây nhiễm virus với tỉ lệ pha loãng 1/10, sau đó đánh giá mức độ bệnh của gà để cho điểm. - Loại virus có độc lực cao: Sau 10 ngày tiêm tĩnh mạch cho gà, virus phải làm chết 75 – 100% số gà thực nghiệm. Sau khi phân lập virus từ gà bệnh thì virus phải phát triển tốt và gây bệnh tích tế bào đặc trưng trong môi trường nuôi cấy tế bào không có Trypsine. 10 [...]... 3.6.4 Thc hin phn ng RT PCR Phn ng rRT - PCR c thc hin trờn mỏy PCR ca hóng Bio - Rad theo chu trỡnh nhit c trỡnh by bng 3.3: Bng 3.3 Chu trỡnh nhit ca phn ng rRT - PCR Giai on 500C 30 phỳt 15 phỳt 950C PCR Thi gian 950C RT (Bc phiờn mó ngc) Nhit 10 giõy 580C 50 giõy 720C Chu k 2 phỳt 1 40 28 3.6.5 c kt qu - Cỏc mu swab s c xột nghim xỏc nh type A (M gen) Nu dng tớnh vi virus cỳm A s tip tc xột... chi ca virus NP sau khi tng hp c vn chuyn tr li nhõn t bo kt hp vi ARN thnh RNP ca virus Sau cựng cỏc RNP ca virus c hp nht vi vựng ny chi, to thnh cỏc chi virus gn cht vo mng t bo ch bi liờn kt gia HA vi th th cha sialic acid Cỏc NA phõn ct cỏc liờn kt ny v gii phúng cỏc ht virus trng thnh tip tc xõm nhim cỏc t bo khỏc 2.3.4 Sc khỏng ca virus iu kin ngoi cnh cú nh hng rừ rt ti sc khỏng ca virus. .. hnh ca c virus cỳm A/H5N1 v virus cỳm A subtype khỏc Trong ú, Thch H cú t l lu hnh virus cỳm A/H5N1 cao nht 62,50%, Cm Xuyờn v Can Lc cú t l lu hnh virus cỳm A/H5N1 bng nhau l 37,50% c Th v Lc H thy khụng cú s lu hnh ca virus cỳm A/H5N1, nhng u cú s lu hnh ca virus cỳm A subtype khỏc Tuy nhiờn, trong thỏng 12 Can Lc v Thch H li khụng cũn s lu hnh ca virus cỳm A/H5N1, Cm Xuyờn tuy vn cũn lu hnh virus cỳm... ngi cú tip xỳc gia cm mc bnh v vụ tỡnh truyn mm bnh i ni khỏc [6] 14 i vi gia cm nuụi, ngun dch u tiờn thng thy l: - T cỏc loi gia cm nuụi khỏc nhau trong cựng mt trang tri hoc trang tri khỏc lin k nh vt lõy sang g hoc t g tõy sang g - T gia cm nhp khu - T chim di trỳ, c bit thy cm c coi l i tng chớnh dn nhp virus vo n gia cm nuụi - T ngi v cỏc ng vt cú vỳ khỏc Phn ln cỏc dch cỳm gia cm gn õy ó cú... lm vector tỏi t hp song gen H5 v N1 phũng chng virus type H5N1 v H7N1 Vacxin di nhúm cha protein khỏng nguyờn NA, HA tỏi t hp v tỏch chit lm vacxin Vacxin tỏi t hp cú vector dn truyn: s dng adenovirus hoc Newcastle virus hoc virus u chim lm vector dn truyn, lp ghộp gen khỏng nguyờn H5 vo h gen ca adenovirus, to nờn virus tỏi t hp lm vacxin phũng chng virus cỳm A/H5N1 Vacxin ADN: sn phm ADN plasmid... cú nh hng rừ rt ti sc khỏng ca virus cỳm H5N1 Virus thng sng lõu hn trong khụng khớ m tng i thp, trong phõn iu kin nhit thp v m cao Virus cú th sng trong chung g ti 35 ngy, trong phõn gia cm bnh ti 3 thỏng Virus cỳm d dng b tiờu dit nhit 60 - 700C trong 5 phỳt Trong t lnh v t ỏ, virus sng c hng thỏng Nhng cht sỏt trựng thụng thng u dit c virus cỳm gia cm nh: Xỳt 2%, Formol 3%, Crezin 5%, Chloramin... chim 9,38% Nh vy t l lu hnh ca virus cỳm A l 21,88%, v t l dng tớnh vi virus cỳm A/H5N1 l 9,38% Nhỡn vo biu hỡnh 4.1, ta cú th thy rừ t l nhim cỏc gen ca virus cỳm gia cm hai huyn Cm xuyờn v Thch H l cao nht trong 5 huyn Hỡnh 4.1 Biu t l lu hnh virus ti cỏc huyn ca tnh H Tnh 33 Qua kt qu trờn ta cú mt s nhn xột sau: + Trờn a bn cỏc huyn u cú s lu hnh ca virus cỳm A/H5N1 v virus cỳm A subtype khỏc vi... khụng cú Quc l 1A chy qua nờn t l lu hnh virus cỳm thp hn Do iu kin giao thụng khụng thun li nờn vic vn chuyn gia cm t ni khỏc n cng b hn ch, buụn bỏn gia cm cng nh l hn Nờn s lu hnh ca virus cỳm l thp hn + Huyn Can Lc tuy cng cú Quc l 1A chy qua nhng t l lu hnh ca virus cỳm cng khụng cao nh hai huyn Cm Xuyờn v Thch H Cú th l do cụng tỏc thỳ y trờn a bn huyn tt hn Gia cm c tiờm phũng y hn, cụng tỏc qun... 60% chim con b nhim virus do tp hp n trc khi di trỳ Trong cỏc loi thu cm di trỳ thỡ vt tri cú t l nhim cao hn cỏc loi khỏc [3] Nhng virus ny khụng gõy c i vi vt ch m c nhõn lờn trong ng hụ hp v tiờu húa, sau ú virus c bi thi ra ngoi, nú tr thnh ngun gieo rc virus cho cỏc loi khỏc, c bit l gia cm [25] Vt bi thi mt s lng ln virus (103.5 105.5/ml) theo ng hụ hp cng nh theo phõn Lng virus H5N1 bi thi t... trờn gia cm v ngi Dch cỳm gia cm cú th bựng phỏt vo nhng thỏng núng nu cú iu kin phự hp [4] 2.5 TRIU CHNG V BNH TCH 2.5.1 Triu chng S lõy nhim virus cỳm gia cm gõy ra nhiu triu chng lõm sng khỏc nhau bao gm nhim khụng biu hin triu chng, bnh ng hụ hp t nh n nng, gim sc sn xut [9] Thi k bnh ngn: Ch vi gi n 3 ngy sau khi virus cỳm xõm nhp vo c th Triu chng bnh ph thuc rt nhiu yu t nh: c lc, khi lng virus, . hành thực hiện đề tài: Giám sát sự lưu hành của virus cúm A/H5N1 trên gia cầm tại một số huyện của tỉnh Hà Tĩnh bằng phương pháp rRT - PCR Mục tiêu của đề tài − Tìm hiểu sự lưu hành virus cúm. Giám sát sự lưu hành của virus cúm A/H5N1 trên gia cầm tại một số huyện của tỉnh Hà Tĩnh bằng phương pháp rRT - PCR PHẦN 1 MỞ ĐẦU Cùng với ngành trồng. Tìm hiểu sự lưu hành virus cúm A/H5N1 trên đàn thủy cầm tại một số chợ của tỉnh Hà Tĩnh. − Phát hiện sớm các ổ dịch nghi cúm trên đàn gia cầm tại tĩnh Hà Tĩnh để kịp thời xử lý, tránh lây lan. 2 PHẦN