Tình hình bệnh cúm gia cầm và giám sát sự lưu hành của virus trên vịt tại một số chợ đầu mối thuộc địa bàn tỉnh hải dương

Cho ñến nay, cúm gia cầm A/H5N1 vẫn xảy ra ở nhiều tỉnh thành trong cả nước khiến một số lượng lớn gia cầm chết phải tiêu hủy; không những thế thể virus ñộc lực cao còn gây bệnh và làm t

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM

LỜI CAM ðOAN

Tôi xin cam ñoan rằng:

- ðây là công trình nghiên cứu của riêng tôi

- Các kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào

- Mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc

Hà Nội, ngày tháng năm 2014

Tác giả luận văn

ðồng Văn Khánh

LỜI CẢM ƠN

Trong suốt 2 năm học tập và hoàn thành luận văn, với nỗ lực của bản thân, tôi ñã nhận ñược sự giúp ñỡ, hướng dẫn tận tình của nhiều cá nhân và tập thể, cho phép tôi ñược tỏ lòng biết ơn và cảm ơn chân thành tới:

Ban Giám hiệu Học Viện Nông nghiệp Việt Nam, Khoa Thú y, Cơ quan Thú y vùng II, các thầy cô giáo ñã giúp ñỡ, tạo ñiều kiện ñể tôi học tập, tiếp thu kiến thức của chương trình học ñặc biệt thầy hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Bá Hiên

Ban Lãnh ñạo và tập thể cán bộ Chi cục Thú y tỉnh Hải Dương

Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi ñược gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia ñình, người thân cùng bạn bè ñã ñộng viên giúp ñỡ tôi vượt qua mọi khó khăn trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu, thực hiện ñề tài

Một lần nữa tôi xin bày tỏ lòng biết ơn, cảm ơn chân thành tới những tập thể, cá nhân ñã tạo ñiều kiện giúp ñỡ tôi hoàn thành chương trình học tập

Hà Nội, ngày tháng năm 2014

Tác giả luận văn

ðồng Văn Khánh

MỤC LỤC

LỜI CAM ðOAN i

LỜI CẢM ƠN ii

MỤC LỤC iii

DANH MỤC CÁC BẢNG vi

DANH MỤC CÁC HÌNH vii

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii

MỞ ðẦU 1

1 ðặt vấn ñề 1

2 Mục tiêu của ñề tài 2

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài 3

CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

1.1 Khái niệm bệnh cúm gia cầm 4

1.2 Tình hình dịch cúm gia cầm trên thế giới và Việt Nam 4

1.2.1 Tình hình bệnh cúm gia cầm trên thế giới 4

1.2.2 Tình hình bệnh cúm gia cầm tại Việt Nam 9

1.3 Dịch tễ học bệnh cúm gia cầm 11

1.3.1 Loài nhiễm bệnh 11

1.3.2 Mùa phát bệnh 11

1.3.3 Sự truyền lây 12

1.4 Virus học bệnh cúm gia cầm 12

1.4.1 ðặc ñiểm hình thái, cấu trúc của Virus cúm type A 12

1.4.2 ðặc tính kháng nguyên của Virus cúm type A 14

1.4.3 ðộc lực của virus 17

1.4.4 Sức ñề kháng của Virus cúm 18

1.5 Miễn dịch chống bệnh của gia cầm 19

1.5.1 Miễn dịch không ñặc hiệu 20

1.5.2 Miễn dịch ñặc hiệu 21

1.5.3 Miễn dịch chủ ñộng 23

1.5.4 Miễn dịch thụ ñộng 23

1.5.5 Những yếu tố ảnh hưởng ñến sự hình thành kháng thể 24

1.6 Phòng chống bệnh cúm gia cầm 25

1.6.1 Phòng bệnh 25

1.6.2 Chống dịch 28

CHƯƠNG II ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30

2.1 ðối tượng nghiên cứu 30

2.2 Nội dung nghiên cứu 30

2.3 Nguyên liệu dụng cụ 30

2.3.1 Nguyên liệu 30

2.3.2 Dụng cụ 31

2.4 Phương pháp nghiên cứu 31

2.5 Phương pháp lấy mẫu bảo quản bệnh phẩm, bố trí thí nghiệm 31

2.5.1 Bố trí thí nghiệm 31

2.5.2 Phương pháp ñiều tra lấy mẫu ngẫu nhiên 32

2.5.3 Phương pháp lấy mẫu và xử lý mẫu 33

2.5.4 Phương pháp RT-PCR phát hiện virus cúm gia cầm 33

2.5.5 Phương pháp phân tích số liệu 36

CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37

3.1 Tình hình chăn nuôi gia cầm tại tỉnh Hải Dương trong 4 năm (2010 – 2013) 37

3.2 Diễn biến dịch cúm gia cầm trên ñịa bàn tỉnh Hải Dương từ 2010 – 2014 40

3.2.1 Tỷ lệ gia cầm mắc bệnh cúm theo loài: 41

3.2.2 Tỷ lệ gia cầm mắc bệnh cúm theo quy mô chăn nuôi: 47

4.2.3 Tỷ lệ gia cầm mắc bệnh cúm theo mùa vụ 50

3.3 Tình hình chăn nuôi gia cầm, diễn biến dịch cúm gia cầm của các huyện Tứ kỳ, Bình Giang, Thanh Miện trong một số năm gần ñây 50

3.4 Kết quả giám sát sự lưu hành của virus cúm trên vịt buôn bán tại một số chợ ñầu mối thuộc ñịa bàn tỉnh Hải Dương bằng phương pháp RT – PCR trong 12 tháng từ tháng 6/2013 – tháng 5/2014 53

3.5 Kết quả nghiên cứu một số yếu tố nguy cơ làm phát sinh dịch cúm gia cầm trên ñịa bàn tỉnh Hải Dương 58

3.5.1 Tiêm phòng vắc xin cúm cho ñàn gia cầm 58

3.5.2 Chăn nuôi gia cầm thả rông 60

3.5.3 Vệ sinh phòng bệnh và sử dụng hóa chất tiêu ñộc khử trùng 60

3.5.4 Nuôi gia cầm trong khu dân cư 61

KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 63

1 Kết luận 63

2 ðề nghị 63

TÀI LIỆU THAM KHẢO 65

DANH MỤC CÁC BẢNG STT TÊN BẢNG TRANG

Bảng 1.1 Số lượng ca nhiễm cúm gia cầm trên người 7

Bảng 2.1 Primer và probe ñặc hiệu cho virus cúm A/H5N1 35

Bảng 2.2 Thành phần phản ứng 36

Bảng 3.1 Kết quả ñiều tra tổng ñàn gia cầm của tỉnh Hải Dương từ 2010 - 2013 38

Bảng 3.2 Tình hình dịch cúm gia cầm trên ñịa bàn tỉnh Hải Dương từ 2004 – 2006 43

Bảng 3.3 Tình hình dịch cúm gia cầm trên ñịa bàn tỉnh Hải Dương Từ 2007 – 2014 45

Bảng 3.4 Tỷ lệ gia cầm mắc bệnh theo quy mô chăn nuôi giai ñoạn 2004 – 2014 48

Bảng 3.5 Tỷ lệ mắc bệnh cúm theo mùa 50

Bảng 3.6 Tổng ñàn gia cầm của ba huyện từ năm 2010 – 2013 51

Bảng 3.7 Thiệt hại do bệnh cúm gia cầm gây ra ở các huyện Bình Giang, Thanh Miện, Tứ Kỳ từ 2010 – tháng 5/2014 52

Bảng 3.8 Tên các chợ ñầu mối ñược lấy mẫu giám sát của các huyện thuộc tỉnh Hải Dương 54

Bảng 3.10 Tỷ lệ mẫu swab vịt dương tính với virus cúm type A/H5Nx theo mùa vụ ñiều tra ở một số chợ trong 12 tháng 57

Bảng 3.11: Tỷ suất chênh của yếu tố nguy cơ tiêm phòng 60

Bảng 3.12: Tỷ suất chênh của yếu tố nguy cơ chăn nuôi thả rông 60

Bảng 3.13: Tỷ suất chênh của yếu tố nguy cơ tiêu ñộc khử trùng 61

Bảng 3.14: Tỷ suất chênh của yếu tố nguy cơ nuôi gia cầm trong khu dân cư 62

Bảng 3.15: Tổng hợp các yếu tố nguy cơ 62

chợ thuộc 3 huyện trên ñịa bàn tỉnh Hải Dương 32 Hình 3.1 Biểu ñồ biểu diễn tổng ñàn gia cầm trên ñịa bàn tỉnh Hải

Dương từ 2010 – 2013 39 Hình 3.2 Biểu ñồ biểu diễn cơ cấu ñàn các loài gia cầm từ 2010 -

2013 39 Hình 3.3 Biểu ñồ biểu diễn tỷ lệ gia cầm mắc bệnh cúm theo loài 44 Hình 3.4 Biểu ñồ biểu diễn tỷ lệ mắc cúm gia cầm qua các năm 46 Hình 3.5 Biểu ñồ biểu diễn tỷ lệ gia cầm mắc cúm theo quy mô chăn

nuôi 49 Hình 3.6 Biểu ñồ biểu diễn tổng ñàn gia cầm ñiểu tra ở 3 huyện từ

2010 - 2013 51 Hình 3.7 Biểu ñồ thể hiện tỷ lệ lưu hành virus trên vịt ñiều tra tại

một số chợ của tỉnh Hải Dương trong 12 tháng 56

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

HPAI Highly pathogenic avian influenza

ñó có bệnh cúm gia cầm ñang là mối nguy cơ ñe dọa sinh mạng con người

Bệnh cúm gia cầm ñã ñược biết ñến từ lâu sau những vụ ñại dịch gây ra cho các ñàn gia cầm ở nhiều nước Hiện nay, bệnh cúm gia cầm thể ñộc lực cao (HPAI) ñang là mối quan tâm hàng ñầu của tất cả các nước trên thế giới Dịch bệnh xảy ra ñã giết chết hàng chục triệu gia cầm, ñồng thời kéo theo ñó

là hàng triệu gia cầm khác bị tiêu hủy bắt buộc ñể tránh lây lan, gây thiệt hại nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi và kinh tế của các nước có dịch

Khi mới xuất hiện ở nước ta vào năm 2003, bệnh ñã thể hiện tính chất lây lan nhanh và gây hậu quả ñặc biệt nghiêm trọng Thời gian ñầu của dịch bệnh từ ngày 27/12/2003 ñến 30/04/2004, chỉ trong vòng hơn 4 tháng dịch ñã làm cho gia cầm nuôi của 2.574 xã/phường thuộc 381 huyện/thị xã của 57 tỉnh/thành trên cả nước mắc bệnh Tổng số gia cầm bị chết do bệnh và tiêu hủy lên tới 43,9 triệu con

Cho ñến nay, cúm gia cầm A/H5N1 vẫn xảy ra ở nhiều tỉnh thành trong

cả nước khiến một số lượng lớn gia cầm chết phải tiêu hủy; không những thế thể virus ñộc lực cao còn gây bệnh và làm tình hình dịch cúm gia cầm trên người diễn biến ngày càng phức tạp Với nhiều phương thức lây lan khác nhau như: hoạt ñộng buôn bán, giết mổ, lưu thông gia cầm không rõ nguồn gốc, chưa qua kiểm dịch, kiểm soát giết mổ, kiểm tra vệ sinh thú y là rất phổ biến Mặc dù ngành thú y và chính quyền ñã quy hoạch và xây dựng lò mổ tập

trung từ vài năm nay nhưng hoạt ñộng này kém hiệu quả do tập quán buôn bán, giết mổ nhỏ lẻ, tự phát của người dân nên việc kiểm soát dịch bệnh rất khó khăn Chính vì vậy khi có dịch bệnh xảy ra vì lợi ích kinh tế những người chăn nuôi thường bán chạy ra cầm ra các khu vực xung quanh dẫn ñến việc phát tán lây lan virus cúm A/H5N1 là ñiều không tránh khỏi

Trước diễn biến phức tạp của dịch cúm gia cầm, các nhà quản lý và các

tổ chức thú y ñã tập trung nghiên cứu ñể tìm ra các giải pháp phòng chống dịch bệnh hiệu quả, xử lý kịp thời các ổ dịch, ngăn chăn sự lây lan trong ñó việc khảo sát sự lưu hành của virus cúm A/H5N1 là một trong những biện pháp ñể giám sát và dự báo sớm dịch bệnh xảy ra

Theo các nhà khoa học nghiên cứu về bệnh virus cúm gia cầm thường ñược tàng chữ ở các loài thủy cầm và khi có ñiều kiện tiếp súc gia cầm cạn thì bùng phát thành dịch

Hải Dương là một ñịa bàn có chăn nuôi vịt phát triển, với số lượng ñầu vịt khá lớn, ñó là nguy cơ tiềm ẩn quan trọng ñối với dịch cúm gia cầm

Xuất phát từ nhu cầu thực tế trên, chúng tôi tiến hành thực hiện ñề tài:

"Tình hình bệnh cúm gia cầm và giám sát sự lưu hành của virus trên vịt tại một số chợ ñầu mối thuộc ñịa bàn tỉnh Hải Dương"

2 Mục tiêu của ñề tài

- ðiều tra tình hình chăn nuôi gia cầm nói chung và dịch cúm gia cầm tại tỉnh Hải Dương từ năm 2010 dến 2013

- Xác ñịnh ñược tỷ lệ lưu hành của virus cúm A/H5N1 trên vịt tại một số chợ ñầu mối của tỉnh Hải Dương

- Nghiên cứu các yếu tố dẫn ñến sự lưu hành, lây lan phát sinh dịch cúm gia cầm trên ñịa bàn tỉnh Hải Dương Trên cơ sở ñó ñưa ra các cảnh báo sớm

về dịch, các biện pháp phòng và chống dịch hiệu quả

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài

Cung cấp, hoàn thiện thêm các thông tin dịch tễ học về bệnh Cúm gia cầm ở Hải Dương

Xác ñịnh các yếu tố nguy cơ làm lây lan dịch bệnh trên ñịa bàn

Từ kết quả nghiên cứu sẽ giúp cho các nhà quản lý ñưa ra các biện pháp phòng, chống bệnh có hiệu quả, góp phần khống chế bệnh Cúm gia cầm trên ñịa bàn tỉnh

CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Khái niệm bệnh cúm gia cầm

Bệnh cúm gia cầm là một bệnh truyền nhiễm gây ra bởi virus cúm type

A thuộc họ Orthomyxoviridae đây là một tác nhân gây bệnh dịch rất lớn, có

tắnh chất khốc liệt trên gia cầm nói chung

Bệnh cúm gia cầm trước ựây có tên gọi là bệnh dịch tả gà (Fowl plague) nhưng từ Hội nghị Quốc tế lần thứ nhất về bệnh cúm gia cầm tại

Beltsville, Mỹ (1981) ựã thay thế tên này bằng tên bệnh cúm gia cầm thể ựộc

lực cao (Highly pathogenic avian influenza-HPAI), ựể chỉ các virus cúm type

A có ựộc lực mạnh, lây lan nhanh, gây tỷ lệ tử vong cao

1.2 Tình hình dịch cúm gia cầm trên thế giới và Việt Nam

1.2.1 Tình hình bệnh cúm gia cầm trên thế giới

Bệnh cúm gia cầm ựã xuất hiện từ cách ựây rất lâu và có mặt khắp nơi trên thế giới và ựược Hippocrates mô tả từ năm 412 trước công nguyên Trong hơn 100 năm qua, có 4 vụ ựại dịch cúm xảy ra vào các năm 1889,

1918, 1957,1968

Năm 1918 dại dịch cúm ựã xảy ra ở Châu Âu do cúm type A H1N1 gây ra, ựược gọi là dịch cúm Tây Ban Nha, khiến cho 20- 40 triệu người bị chết Năm 1878, tại Italia ựã xảy ra một bệnh gây tử vong rất cao ựàn gia cầm

và ựược gọi là bệnh dịch tả gia cầm

Năm 1901, Centanni và Savunozzi ựã ựề cập ựến ổ dịch này và xác

ựịnh ựược căn nguyên siêu nhỏ qua lọc là yếu tố gây bệnh (filterable agent)

Sau ựó phải ựến năm 1955, Schaffer mới xác ựịnh ựược căn nguyên gây bệnh thuộc nhóm virus cúm type A (H7N7 và H7N1) gây chết nhiều ở gà, gà tây,

chim hoang ở Bắc Mỹ, Nam Mỹ, Châu Phi, Cận Trung đông

Năm 1963, virus cúm type A ựược phân lập ở Bắc Mỹ do loài thủy cầm

di trú dẫn nhập vào ựàn gà Cuối thập kỷ 60, kết quả phân lập type H1N1 thấy

ở lợn có liên quan ựến những ổ dịch ở gà tây với những triệu chứng ựặc trưng ở ựường hô hấp và giảm ựẻ Năm 1971 Bear ựã mô tả rất kỹ về vius gây bệnh và ựăc ựiểm bệnh lý lâm sàng của gà trong các ổ dịch cúm gà, gà tây khá lớn ở Bắc Mỹ mà chủng gây bênh là H7N1

Từ năm 1960 - 1979, bệnh ựược phát hiện ở Canada, Mêhicô, Achentina, Braxin, Nam Phi, Ý, Pháp, Anh, Hà Lan, Australia, Hồng Kông, Nhật Bản, các nước vùng Trung Cận đông, các nước thuộc liên hiệp Anh và Liên Xô cũ Các công trình nghiên cứu có hệ thống về bệnh cúm gia cầm lần lượt ựược công bố ở Australia năm 1975, ở Anh năm 1979, ở Mỹ năm 1983 -

1984, ở Ailen năm 1983 - 1984 về ựặc ựiểm sinh học, bệnh học và dịch tễ học, các phương pháp chẩn ựoán miễn dịch và biện pháp phòng chống bệnh đến nay, dịch cúm gia cầm ựã xảy ra ở khắp các châu lục với mức ựộ ngày càng nguy hiểm hơn ựối với các loại gia cầm và sức khỏe của cộng ựồng, ựã thôi thúc Hiệp hội các nhà chăn nuôi gia cầm tổ chức hội thảo chuyên ựề về bệnh cúm gà Hội thảo lần ựầu tiên tổ chức vào năm 1981, lần thứ hai tại Ailen năm 1987, lần thứ ba cũng tại Ailen năm 1992 Từ ựó ựến nay trong các hội nghị về dịch tễ trên thế giới, bệnh cúm gia cầm luôn là một trong những nội dung ựược coi trọng

Năm 1997, ở Hồng Kông dịch cúm gà xảy ra do virus cúm type A subtype H5N1 Và ựây là lần ựầu tiên virus gia cầm ựã vượt "rào cản về loài",

ựể lây cho người ở Hồng Kông làm cho 18 người thiệt mạng, trong ựó có 6 người chết

Năm 2003 ở Hà Lan dịch cúm gia cầm ựã xảy ra với quy mô lớn do chủng H7N7, 30 triệu gia cầm bị tiêu hủy, 83 người lây nhiễm và 1 người chết, gây thiệt hại về kinh tế hết sức nghiêm trọng

Cuối năm 2003 ựầu năm 2004 ựã có 11 quốc gia ở Châu Á là: Nhật

Bản, Hàn Quốc, Thái Lan, Lào, Campuchia, Indonesia, Trung Quốc, Hồng Kông, đài Loan, Việt Nam và Pakistan ựã thông báo bùng phát dịch cúm gia cầm thể ựộc lực cao ở gà và vịt Sự lây lan nhanh chóng dịch cúm gia cầm xảy ra ựồng thời ở một số nước ựã trở thành mối quan tâm lớn trên toàn cầu

đến giữa năm 2005 dịch cúm H5N1 ựã lan rộng ra Kazakhstan, Nga ựến khu vực Châu Âu như: Rumani, Hylap, Thổ Nhĩ kỳ, khu vực Châu Phi và

cả khu vực Châu Á như Trung Quốc, Irap

Theo thống kê của Tổ chức Dịch tễ Thế giới - OIE (2006) tắnh ựến ngày 2/8/2006 chủng virus ựộc lực cao H5N1 ựã có mặt tại 51 quốc gia và vùng lãnh thổ trên hầu hết các Châu lục, tập trung chủ yếu ở Châu Á và Châu Âu

Năm 2008 dịch cúm ựã có mặt ở 22 quốc gia và vùng lãnh thổ như: Ixraen, Ả rập Xê út, Thụy Sĩ, Ucraina, Thổ Nhĩ Kỳ, Nga, Ấn độ, Nhật Bản, Hàn Quốc, Anh, Trung Quốc, Pakistan, Nigiêria, Băngladet, Quata, Hồng Kông, Ai Cập, đức, Inựônêxia, Lào, Thái Lan, Việt Nam

Từ 1/2009 nhiều quốc gia ựã công bố bùng phát dịch như BaLan, đức, Canada, Nêpan, Ấn độ, Trung Quốc

Hàng loạt các nước xảy ra dịch cúm gia cầm như Hàn Quốc, ngày 31/12/2010 dịch bùng phát sau một thời gian khống chế dịch, tiêu hủy 8,46 triệu con, thiệt hại kinh tế tới 264 tỷ won (219 triệu USD) 1/2011 dịch cúm gia cầm ựã xảy ra tại tỉnh Miyazauki của Nhật Bản và ựã tiêu hủy 10.000 con

Bảng 1.1 Số lượng ca nhiễm cúm gia cầm trên người

1.2.2 Tình hình bệnh cúm gia cầm tại Việt Nam

Dịch cúm gia cầm ở nước ta xuất hiện lần ñầu tiên vào cuối tháng 12/2003 Tại trại gà giống ở xã Thủy Xuân Tiên, huyện Chương Mỹ, Hà Tây(cũ) gây ốm chết 8000 gà trong 4 ngày Theo Cục Thú y có thể chia làm 6 ñợt dịch lớn tính ñến năm 2008 như sau:

ðợt 1: từ tháng 12/2003 ñến tháng 3/2004: dịch bệnh ñã xảy ra ở

2.574 xã, phường, 381 huyện, thị thuộc 57 tỉnh, thành phố ðiển hình là các tỉnh: Long An 185 xã, Tiền Giang 135 xã, An Giang 145 xã, ðồng Tháp 116 xã, Hà Tây 134 xã, Hải Dương 144 xã Tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu huỷ là 43,9 triệu con (gà: 30.4 triệu; thuỷ cầm: 13.5 triệu)

ðợt 2: từ tháng 4 ñến tháng 11/2004: dịch phát ra rải rác với quy mô

nhỏ ở các hộ gia ñình chăn nuôi gia cầm, bệnh xuất hiện ở 46 xã, phường tại 32 huyện, quận, thị xã thuộc 17 tỉnh Thời gian cao ñiểm nhất là tháng

7, sau ñó giảm dần, ñến tháng 11 cả nước chỉ có1 ñiểm phát dịch Tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu huỷ là 84.078 con (gà: 55.999; vịt: 8.132)

ðợt 3: từ tháng 12/2004 ñến tháng 5/2005: khoảng thời gian này

dịch ñã xuất hiện ở 670 xã tại 182 huyện thuộc 36 tỉnh, thành phố Số gia cầm tiêu huỷ là 470.495 gà, 825.689 vịt, ngan

ðợt 4 : từ tháng 10/2005 ñến 01/2006: Dịch xảy ra ở cả 3 miền với

24 tỉnh, thành tái phát Trong ñó miền Nam có 3 tỉnh (Bạc Liêu, ðồng Tháp, Long An), miền Trung có 3 tỉnh (Thanh Hóa, Nghệ An, Quảng Trị)

và 18 tỉnh thuộc miền Bắc (Hà Nội, Bắc Giang, Hòa Bình, Thái Bình, Hưng Yên, Hải Dương, Phú Thọ, Bắc Ninh, Bắc Kạn, Vĩnh Phúc, Hải Phòng, Sơn La, Quảng Ninh, Yên Bái, Thái Nguyên, Ninh Bình, Cao Bằng

và Hà Giang) Tổng số gia cầm tiêu hủy là 3.972.763 con, trong ñó 1.338.378 gà, 2.135.081 thuỷ cầm và loài khác

ðợt 5: bắt ñầu và kéo dài trong suốt năm 2007 nhiều ñợt:

+ Từ 12/2006 ñến 3/2007 dịch xảy ra trên 83 xã, phường của 33 quận, huyện thuộc 11 tỉnh Tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu huỷ là 103.092 con, trong ñó có 13.622 gà; 89.472 ngan, vịt

+Từ 5/2007 ñến 8/2007, dịch xảy ra ở 167 xã, phường của 10 huyện, thị thuộc 23 tỉnh, thành Tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu huỷ là 294.894 con (21.525 gà, 264.549 vịt và 8.775 ngan) Sau khi bị khống chế trong vòng 1 tháng, ñến tháng 10/2007, dịch lại tái ở 15 xã, phường của 9 huyện, quận, thị trấn thuộc 6 tỉnh, thành phố

Sau khi bị khống chế trong vòng 1 tháng , ñến tháng 10/2007 dịch lại tái phát trên ñịa bàn các tỉnh Trà Vinh, Quảng Trị, Nam ðịnh, Cao Bằng,

Hà Nam Và Bến Tre

ðợt 6: từ ñầu năm 2008: xảy ra rải rác với 74 phát dịch Tổng số gia

cầm tiêu huỷ là 60.090 con, trong ñó có 23.498 gà, 36.592 thuỷ cầm

Năm 2009, dịch cúm gia cầm ñã xảy ra ở 68 xã, phường, thị trấn của 34 huyện, thị xã thuộc 17 tỉnh, thành với tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu hủy trên 127.000 con

Năm 2010, tính ñến giữa tháng 4, dịch cúm gia cầm ñã xảy ở 31 huyện, thị xã thuộc 15 tỉnh, thành với tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu huỷ trên 60.000 con Ngày 24/11/2010, sau thời gian khống chế ñược dịch toàn quốc thì dịch lại bùng phát tại Nam ðịnh với các ổ dịch ñược phát hiện tại huyện Ý Yên, làm tổng cộng 300 con vịt bị ốm chết

Mở màn cho dịch cúm gia cầm năm 2011 là tỉnh Lạng Sơn, ñược công bố vào ngày 14/2 làm chết ñàn gà trên 2.000 con, chỉ 2 ngày sau ñó tỉnh Nam ðịnh và Kon Tum cũng công bố dịch với trên 4.000 con gà nhiễm bệnh phải tiêu hủy Tiếp ñó, dịch xảy ra tại Vĩnh Phúc, Quảng Ninh,

Hà Nam, Thái Nguyên, Hà Nội

Tháng 2/2011 UBND tỉnh Nam ðịnh ký công bố dịch gia cầm xuất hiện trên toàn tỉnh, dịch xuất hiện ñầu tiên tại hộ chăn nuôi của ông Nguyễn Văn Toàn, xã An Thái, huyện Ý Phong trên ñàn vịt thương phẩm gồm 4600 con, trong ñó có 1600 vịt ñẻ và 3000 con vịt ba mươi ngày tuổi Năm 2013, tính ñến hết 6 tháng ñầu năm dịch Cúm gia cầm: xảy ra ở

6 tỉnh: Tây Ninh, Khánh Hòa, Kiên Giang, ðiện Biên và Vĩnh Long, Tiền giang làm gần 14 nghìn gia cầm mắc bệnh

- ðối với dịch cúm A/H5N1 ở người: ñã có 1 trường hợp bệnh nhi tử vong ở huyện Cao Lãnh – tỉnh ðồng Tháp do nhiễm cúm A/H5N1

Nhìn chung, dịch cúm gia cầm gây ra hậu quả rất lớn về kinh tế và xã hội Việt Nam

1.3 Dịch tễ học bệnh cúm gia cầm

1.3.1 Loài nhiễm bệnh

Vi rút gây nhiễm tự nhiên cho gia cầm nuôi và hoang dã (bao gồm

gà, gà tây, vịt, ngỗng, chim cút, chim trĩ, ñà ñiểu, gà nhật, mòng biển, chim biển,…), ñặc biệt chim sống tự do dưới nước, một số chủng virus cúm gia cầm gây nhiễm ở chim hoang dã sống trên cạn, nhưng ñây không phải là nguồn chứa virus chính Phần lớn các loài gia cầm non ñều mẫn cảm với virus cúm type A

Trong nghiên cứu thí nghiệm, virus cúm có thể nhiễm cho lợn, chuột cống, thỏ, chuột lang, chuột nhắt, chồn sương, mèo ñồng, linh trưởng và người

1.3.2 Mùa phát bệnh

Bệnh cúm gia cầm xảy ra quanh năm nhưng thường tập trung vào vụ ñông xuân từ tháng 10 năm trước ñến tháng 02 năm sau, khi có những biến ñổi bất lợi về ñiều kiện thời tiết như nhiệt ñộ lạnh, ñộ ẩm cao, thời tiết biến ñổi ñột ngột, làm giảm sức ñề kháng tự nhiên của con vật Mặt khác thời

ñiểm này có mật ñộ chăn nuôi cao nhất trong năm, các hoạt ñộng buôn bán vận chuyển, giết mổ gia cầm diễn ra cao nhất trong năm cũng là ñiều kiện thuận lợi ñể dịch bệnh phát sinh và lây lan

1.3.3 Sự truyền lây

Virus ñược bài thải ra môi trường từ mũi, miệng, kết mạc mắt, lỗ huyệt Trong cơ thể gia cầm bị bệnh virus nhân lên trong cơ quan hô hấp, ruột, thận, ñường sinh dục Virus lây lan do tiếp xúc trực tiếp giữa gia cầm mẫn cảm với gia cầm bị bệnh hay tiếp xúc gián tiếp thông qua các hạt khí dung ñược bài xuất từ ñường hô hấp hoặc qua phân, thức ăn và nước uống

bị nhiễm hay do con người (quần áo, giầy dép,…), trang thiết bị (dụng cụ chăn nuôi, phương tiện vận chuyển,…) nhiễm virus

Theo các tổ chức WHO và FAO thì con người có nguy cơ lây nhiễm virus cúm gia cầm cao nhất là do tiếp xúc trực tiếp với gia cầm bị bệnh trong quá trình bắt và giết mổ

ðường lây bệnh thành công thí nghiệm bao gồm: Khí dung ñường mũi, khí quản, miệng, kết mạc mắt, xoang bụng, túi khí, mạch máu và lỗ huyệt

1.4 Virus học bệnh cúm gia cầm

1.4.1 ðặc ñiểm hình thái, cấu trúc của Virus cúm type A

Virus cúm gia cầm có tên khoa học là influenza Virus, thuộc họ Orthomyxovirus, là họ Virus ña hình thái, có vỏ ngoài, genom là ARN ñơn, (-), phân ñoạn

Virus cúm gia cầm có kích thước trung bình, ñường kính 80 - 120

nm, trọng lượng phân tử 4,6 – 6,4 dalton, trên kính hiển vi ñiện tử tương phản âm có dạng gần như hình cầu hoặc các hạt mỏng, một số ít Virus có dạng hình sợi có thể dài một vài nm, có vỏ bọc là lớp lipid có gắn các glycoprotein gây ngưng kết hồng cầu (kháng nguyên bề mặt) -

Haemagglutinin (viết tắt là H) và protein enzim có thụ thể - Neuraminidae (viết tắt N) ñây là những kháng nguyên có vai trò quan trọng trong miễn dịch bảo hộ và có tính ña dạng cao (Alexander D.J, 1996; Capua I.& Marrangon S, 2000)

Hình thái vi cấu trúc của căn nguyên bệnh ñược mô tả chi tiết và nhấn mạnh rằng ARN của Virus là một sợi ñơn, âm chia 8 ñoạn kế tiếp nhau mang 10 ORF (open reading frames) cho 10 loại virion protein khác nhau: HA, NA, NP, M1, M2, PB1, PB2 ,PA, NS1 và NS2 tất cả 8 ñoạn của sợi ARN có thể tách và phân biệt rõ ràng thông qua phương pháp ñiện di, các protein có vỏ bọc nhân nối 8 ñoạn này với nhau, ñược bọc bên ngoài bằng các protein và có màng lipip ở ngoài cùng

Protein hemagglutinine hay HA là một glycoprotein dưới dạng trimer Mỗi monomer gồm có 2 phần HA1 và HA2 Hai phần của protein này ñược nối với nhau bằng một chuỗi các acid amin trong ñó có arginin Tại vị trí này các men cắt protein có sẵn trong cơ thể (trên các màng niêm mạc) của ký chủ sẽ cắt HA ra làm ñôi, tạo ñiều kiện cho Virus bám vào thụ thể của tế bào ký chủ Do vậy ñoạn này ñược gọi là cleavage site của HA

Do các enzym protease chỉ cắt protein tại các acid amin basic nên nếu vị trí này càng nhiều acid amin basic thì khả năng bị cắt ñôi của HA lại càng cao dẫn ñến khả năng ñể Virus bám vào thụ thể tế bào và bắt ñầu quá trình xâm nhập vào tế bào càng lớn Dựa trên cơ sở này người ta ñã phân loại Virus

có ñộc lực cao là loại Virus cúm có nhiều acid amin basic tại vị trí cleavage site và ngược lại

Protein NA chính là một loại enzym có tên là neuraminidase Khi Virus xâm nhập vào cơ thể, các mạch ñường của protein HA và thụ thể của

tế bào sẽ liên kết với nhau, gắn Virus vào bề mặt tế bào Sau ñó nhờ neuraminidase cắt mối liên kết này ñi làm cho Virus có thể vào bên trong,

sau khi HA ñược cắt ñôi, hoặc nếu không như vậy, Virus sẽ bị rời ra khỏi

tế bào

( A ) ( B )

Hình 1.1 Hình thái và cấu trúc vi rút cúm gia cầm

(A: Mô hình cấu tạo Virus cúm A Hemagglutinine: phân tử kháng nguyên HA, Neuraminidase: phân tử kháng nguyên NA, Capsid: vỏ Virus, Lipid enverlope: lớp màng bao lipid, RNA: Hệ gene Virus B: ảnh chụp các tiểu phần Virus cúm A dưới kính hiển vi ñiện tử truyền quang)

1.4.2 ðặc tính kháng nguyên của Virus cúm type A

Các loại kháng nguyên ñược nghiên cứu nhiều nhất là protein nhân (Nucleoprotein, NP), protein ñệm (matrix protein, M1), protein gây ngưng kết hồng cầu (Hemagglutinin, HA) và protein enzim cắt thụ thể (Neuraminidase, NA) NP và M1 là protein thuộc loại hình kháng nguyên ñặc hiệu nhóm (genus - specific antigen), ký hiệu là gs kháng nguyên; HA và NA là protein thuộc loại hình kháng nguyên ñặc hiệu typ và dưới typ (typ - specific antigen), ký hiệu là ts kháng nguyên

(A) (B)

HA1

HA2

Hình 1.2 Mô hình cấu trúc kháng nguyên HA của Virus cúm A

(A: Cấu trúc không gian một ñơn phân của phân tử HA, hai dưới ñơn

vị HA1 và HA2 B: Cấu trúc phân tử kháng nguyên HA gắn trên bề mặt vỏ Virus Lipid bilayer of envelope: lớp lipid kép của vỏ Virus, Receptor site: Vị trí gắn kháng nguyên HA với thụ thể bề mặt tế bào nhiễm, 4 major antigenic variable regions: 4 vùng biến ñổi kháng nguyên chính của một ñơn phân HA)

Virus cúm type A có ñặc ñiểm ñặc trưng là chúng thường có ñột biến gen dẫn ñến sự biến ñổi liên tục về tính kháng nguyên

Sự phức tạp trong diễn biến kháng nguyên của Virus cúm là sự biến ñổi và trao ñổi trong nội bộ gen dẫn ñến sự biến ñổi liên tục về tính kháng Có

2 cách biến ñổi kháng nguyên của Virus cúm:

+ ðột biến ñiểm (ñột biến ngẫu nhiên hay hiện tượng trôi trượt, lệch lạc

về kháng nguyên - Antigenic drift) Trong nhiều trường hợp, các phân tử kháng nguyên này vẫn có chức năng của kháng nguyên, nhưng chúng có thể thay ñổi ñến mức hệ thống miễn dịch của cơ thể không nhận ra chúng trong một thời gian nhất ñịnh Virus lợi dụng thời gian này ñể lây nhiễm ðây là kiểu ñột biến xảy ra liên tục thường xuyên trong quá trình tồn tại của Virus

mà bản chất là do có sự thay ñổi nhỏ về trình tự nucleotit của gen mã hóa, ñặc biệt ñối với kháng nguyên H và kháng nguyên N Kết quả là tạo ra các phân typ cúm hoàn toàn mới có tính thích ứng loài vật chủ khác nhau và mức ñộ ñộc lực gây bệnh khác nhau Chính nhờ sự biến ñổi này mà Virus cúm A tạo nên 16 biến thể gen HA (H1- H16) và 9 kháng nguyên N (N1 - N9) Chu kỳ của bệnh cúm hàng năm phụ thuộc vào sự kết hợp của tốc ñộ biến ñổi, thời gian ủ bệnh và sự biến ñổi theo mùa của khí hậu

+ ðột biến tái tổ hợp di truyền (hiện tượng thay ca- antigenic Shift)

Hiện tượng tái tổ hợp gen ít xảy ra hơn so với hiện tượng ñột biến ñiểm Một

số chủng Virus chỉ gây bệnh cho gia cầm mà không gây bệnh cho người Một

số chủng khác lại chỉ gây bệnh cho người mà không gây bệnh cho gia cầm Trong một số trường hợp, cả Virus cúm người và Virus cúm gia cầm có thể cùng nhiễm vào ñộng vật thứ 3, như lợn chẳng hạn Hiện tượng tượng tái tổ hợp gen chỉ xảy ra khi 2 hoặc nhiều loại Virus cúm khác nhau cùng nhiễm vào một tế bào chủ do sự trộn lẫn 2 bộ gen của Virus ðột biến này là sự tổ hợp di truyền xảy ra ñịnh kỳ trong ñó có sự sắp xếp lại các nucleotit do sự trộn lẫn 2 bộ gen của Virus cúm khác nhau ðiều ñó ñã tạo nên những sai khác cơ bản về bộ gen của Virus ñời con so với Virus bố mẹ Khi nhiều Virus khác nhau cùng xâm nhiễm vào một tế bào chủ, các thế hệ Virus ñược sinh ra sau ñó có thể ñược sinh ra từ sự tái tổ hợp của các gen bố mẹ xuất phát từ nhiều Virus khác nhau Do hạt Virus cúm A có cấu trúc là 8 ñoạn gen nên về

lý thuyết từ 2 Virus có thể xuất hiện 256 kiểu tổ hợp của Virus thế hệ sau

Khi phân tích 156 chủng Virus cúm A lưu hành trong thời kỳ 1999 -

2004 tại New York, các nhà khoa học ñã phát hiện một số chủng thay ñổi ít nhất 4 lần trong một thời gian ngắn ðiều ñó cho thấy các chủng Virus cúm có thể biến ñổi lớn trong mỗi mùa, gây khó khăn lớn cho công tác phòng chống Khi nghiên cứu di truyền học của Virus H5N1 các nhà khoa học của Việt Nam cũng nhận thấy chúng có nhiều thay ñổi Trong các ñàn vịt nuôi của Việt

Kháng thể đặc hiệu của kháng nguyên HA cĩ khả năng trung hịa các loại Virus tương ứng, chúng là kháng thể trung hịa cĩ khả năng triệt tiêu Virus gây bệnh Nĩ cĩ thể phong tỏa sự ngưng kết bằng cách kết hợp với kháng nguyên HA Do vậy thụ thể của hồng cầu khơng bám vào được để liên kết tạo thành mạng ngưng kết Người ta gọi phản ứng đặc hiệu KN - KT cĩ hồng cầu tham gia là phản ứng ngăn cản ngưng kết hồng cầu HI (Hemagglutination inhibition test)

Phản ứng ngưng kết hồng cầu (HA) và phản ứng huyết thanh ngăn cản ngưng kết hồng cầu (HI) được sử dụng trong chẩn đốn cúm gia cầm

1.4.3 ðộc lực của virus

ðộc lực của các chủng Virus cúm gia cầm cĩ sự dao động lớn, phụ thuộc vào nhiều yếu tố, trước hết là protein HA Các nghiên cứu ở mức độ phân tử cho thấy khả năng lây nhiễm của Virus phụ thuộc vào tác động của men proteaza vật chủ đến sự phá vỡ của liên kết hĩa học sau khi dịch mã của phân tử ngưng kết, thực chất là sự cắt rời protein HA thành 2 tiểu phần HA1 và HA2 Tính thụ cảm của ngưng kết tố và sự phá vỡ liên kết của men proteaza lại phụ thuộc vào số lượng các amino axit cơ bản tại điểm bắt đầu phá vỡ các liên kết Các enzym giống trypsin cĩ khả năng phá vỡ liên kết khi chỉ cĩ một phân

tử arginin, trong khi đĩ các enzym proteaza khác lại cần nhiều amino axit cơ bản, vì thế đánh giá độc lực của Virus trên cơ sở gây nhiễm cho gia cầm và sau

ñó phân tích sự sắp xếp các amino axit của các Virus

ðể ñánh giá ñộc lực của Virus cúm một cách khoa học, các nhà nghiên cứu sử dụng phương pháp gây bệnh cho gà 3 - 6 tuần tuổi bằng cách tiêm tĩnh mạch 0,2 ml nước trứng ñã ñược gây nhiễm Virus với tỷ lệ pha loãng 1/10, sau ñó ñánh giá mức ñộ nhiễm bệnh của gà ñể cho ñiểm (chỉ số IVPI) ðiểm tối ña là 3 ñiểm và ñó là Virus có ñộc lực cao nhất Theo quy ñịnh của Tổ chức Thú y Thế giới (OIE), Virus nào có chỉ số IVPI từ 1,2 trở lên thuộc loại

có ñộc lực cao

- Virus có ñộc lực cao: Nếu sau khi tiêm tĩnh mạch 10 ngày phải làm chết 75 - 100% số gà thực nghiệm Virus gây bệnh cúm gà (có thể là type phụ) phải làm chết 20% số gà mẫn cảm thực nghiệm và phát triển tốt trên tế bào xơ phôi gà trong môi trường nuôi cấy không có Trypsin

- Virus có ñộc lực trung bình: Là những chủng Virus gây dịch cúm gà với triệu chứng lâm sàng rõ rệt nhưng gây chết không quá 15% số gà bị nhiễm bệnh tự nhiên hoặc không gây quá 20% số gà mẫn cảm thực nghiệm

- Virus có ñộc lực thấp (nhược ñộc): Là những Virus phát triển tốt trong cơ thể gà, có thể gây ra dịch nhưng không có triệu chứng lâm sàng rõ rệt, không tạo ra bệnh tích ñại thể và không làm chết gà

Trong thực tế người ta chia vi rút cúm gà ra làm 2 loại: Loại Virus có ñộc lực thấp - LPAI (Light Pathogenic Avian Influenza) Loại Virus có ñộc lực cao- HPAI (Highly Pathgenic Avian Influenza) Các vụ dịch lớn ñều do Virus HPAI gây ra thường là Virus có kháng nguyên H5, H7 và H9 Riêng H5

và H7 thông thường bắt nguồn từ Virus ñộc lực thấp, sau quá trình lây truyền trên gà và chim cút ñộc lực tăng lên rất nhanh và gây ra các vụ dịch lớn

1.4.4 Sức ñề kháng của Virus cúm

Virus không bền vững với nhiệt ñộ, ở 56 - 600C chỉ vài phút Virus mất ñộc lực Tuy nhiên Virus tồn tại khá lâu trong các vật chất hữu cơ như trong phân gia cầm ít nhất 3 tháng, 30 - 35 ngày ở nhiệt ñộ 40C, 7 ngày ở nhiệt ñộ

200C Trong thức ăn, nước uống bị ô nhiễm Virus có khả năng tồn tại hàng tuần ðây chính là nguồn mang mầm bệnh nguy hiểm và tiềm tàng ñể làm lây lan dịch bệnh

Do cấu trúc vỏ ngoài của Virus là lipit nên chúng mẫn cảm với các chất dung môi và chất tẩy rửa như formalin, axit, ete, β – propiolacton Sau khi tẩy

vỏ, các hóa chất như phenolic, NH4+, axit loãng, natrihypochlorit và hydroxylanine có thể phá hủy Virus cúm gia cầm Người ta thường dùng các hóa chất này như các chất sát trùng hữu hiệu ñể tẩy uế chuồng trại, dụng cụ và các thiết bị chăn nuôi

1.5 Miễn dịch chống bệnh của gia cầm

Miễn dịch là trạng thái ñặc biệt của cơ thể không mắc phải tác ñộng có hại của yếu tố gây bệnh, trong khi ñó các cơ thể khác cùng loài hoặc khác loài lại bị tác ñộng trong ñiều kiện sống như nhau

Những tế bào miễn dịch hiện diện ở các cơ quan lympho sơ cấp hoặc các cơ quan lympho thứ cấp Tuyến ức và túi Fabricius là cơ quan sơ cấp, tại

ñó tiền tế bào T và tiền tế bào B biệt hóa và trải qua quá trình chín Giống như trong tuyến ức, các lympho bào ñược tập trung ở vùng vỏ ngoại vi và ở phần tủy trung tâm

Những tế bào lympho chức năng rời cơ quan lympho sơ cấp và cư trú ở

cơ quan lympho thứ cấp, những khu vực diễn ra các phản ứng miễn dịch do kích thích của kháng nguyên Cơ quan lympho thứ cấp, ñược xác ñịnh bởi sự

tụ hợp của các lympho bào và các tế bào trình diện kháng nguyên, phân tán rải rác khắp cơ thể Cơ quan lympho thứ cấp bao gồm lách, tuyến harder, hạch phổi, mô lympho ruột (hạch ruột) Túi Fabricius cũng hoạt ñộng như một cơ quan lympho thứ cấp Gia cầm thiếu một số hạch bạch huyết tương ñương của ñộng vật có vú nhưng có một số hạch nhỏ dạng bạch huyết dọc theo mạch bạch huyết

Miễn dịch chống bệnh cúm bao gồm 2 loại là miễn dịch không ñặc hiệu

và miễn dịch ñặc hiệu

1.5.1 Miễn dịch không ñặc hiệu

Khi mầm bệnh xâm nhập vào cơ thể, gia cầm bảo vệ trước hết bằng miễn dịch không ñặc hiệu nhằm ngăn cản hoặc giảm số lượng và khả năng gây bệnh của chúng Miễn dịch không ñặc hiệu có vai trò quan trọng khi miễn dịch ñặc hiệu chưa phát huy tác dụng Hệ thống miễn dịch không ñặc hiệu của gia cầm rất phát triển bao gồm:

- Hàng rào vật lý như da, niêm mạc và các dịch tiết có tác dụng bảo vệ

cơ thể ngăn cản tác nhân gây bệnh xâm nhập vào cơ thể

- Khi mầm bệnh qua hàng rào da và niêm mạc nó gặp phải hàng rào hóa học là kháng thể dịch thể tự nhiên không ñặc hiệu

+ Bổ thể: Các bổ thể là phần quan trọng và nhạy cảm của hệ thống phòng thủ chống lại mầm bệnh hiện diện trong huyết tương của gia cầm Bổ thể có tác dụng làm tan màng vi khuẩn, làm tăng khả năng thực bào của ñại thực bào, (opsonin hóa), ngoài ra bổ thể cũng có vai trò nhất ñịnh trong cơ chế ñáp ứng miễn dịch ñặc hiệu (nhiều trường hợp sự tương tác giữa kháng nguyên và kháng thể cần sự có mặt của bổ thể)

+ Interferon (IFN): Do nhiều loại tế bào tiết ra nhưng nhiều nhất là tế bào diệt tự nhiên (NK) Khi Interferol ñược sản sinh ra, nó gắn vào tế bào bên cạnh và cảm ứng tế bào ñó sản sinh ra protein AVP (antivirus protein), do ñó khi vi rút xâm nhập vào tế bào nhưng không nhân lên ñược

- Hàng rào tế bào, gồm:

+ Tiểu thực bào, quan trọng nhất là bạch cầu ña nhân trung tính chiếm

60 – 70% tổng số bạch cầu ở máu ngoại vi, nó thực bào những phân tử nhỏ và

vi khuẩn ngoài tế bào

+ ðại thực bào là các tế bào lớn có khả năng thực bào, khi ñược hoạt hóa nó sẽ nhận biết và loại bỏ các vật lạ, ngoài ra nó còn giữ vai trò quan trọng trong sự trình diện kháng nguyên tới tế bào T và kích thích tế bào T sản sinh ra IL - 1 ðại thực bào còn tiết ra Interferon có hoạt tính kháng Virus,

Lysozyme và các yếu tố khác có tác dụng kích thích phản ứng viêm

+ Các tế bào diệt tự nhiên (NK) là một quần thể tế bào lâm ba cầu có nhiều hạt với kích thước lớn Các tế bào này có khả năng tiêu diệt các tế bào

ñã bị nhiễm Virus và các tế bào ñích ñã biến ñổi, nó còn tiết ra Interferol làm tăng khả năng thực bào của ñại thực bào

1.5.2 Miễn dịch ñặc hiệu

Mầm bệnh vượt qua hàng rào vật lý hoặc cơ chế phòng vệ miễn dịch tự nhiên sẽ kích thích một ñáp ứng miễn dịch ñặc hiệu Miễn dịch ñặc hiệu có tính ñặc hiệu cao ñối với tác nhân kích thích ñặc hiệu Những tế bào ñặc hiệu trung gian giữ một hồi ức với những lần gặp gỡ sau với mầm bệnh, thậm chí

cả khi mầm bệnh không còn trong cơ thể và ñáp ứng miễn dịch tương ứng ñã tạm thời lắng xuống

Người ta chia miễn dịch ñặc hiệu ra làm 2 loại: Miễn dịch dịch thể và miễn dịch qua trung gian tế bào

+ Miễn dịch dịch thể

Do các tế bào lympho B ñảm nhiệm Các lympho bào bắt nguồn từ tế bào nguồn ở tủy xương ñi tới túi Fabricius Ở ñây chúng ñược biệt hóa ñể trở thành các lympho B, sau ñó di tản tới các cơ quan lympho ngoại biên Các tế bào lympho B khu trú ở các tâm ñiểm mầm và vùng tủy của lách, hạch lâm

ba Trong hạch lâm ba các tế bào lympho B có thể gặp một kháng nguyên và nhận biết kháng nguyên ñó bởi các kháng thể có trên bề mặt của chúng Tế bào B có thể nhận biết ñược khi nó tương tác với globulin miễn dịch nhô ra trên bề mặt tế bào

Sau khi ñã nhận biết kháng nguyên và ñược kích thích bởi các cytokines do tế bào T tiết ra, các tế bào lympho B ñược biệt hóa thành tương bào (plasmosis) ñể sản sinh kháng thể Chúng tiết ra các loại globulin miễn dịch (Ig) gồm 3 lớp chính là IgM, IgG, IgA trong ñó IgG của gia cầm lớn hơn ñộng vật có vú nên thường gọi là IgY

đáp ứng của cơ thể khi gặp kháng nguyên ựầu tiên ựược gọi là ựáp ứng tiên phát Sau khi xuất hiện vài ngày hàm lượng kháng thể trong máu tăng và các kháng thể ựầu tiên chủ yếu là IgM đáp ứng tiên phát cũng có thể có IgG nhưng với hàm lượng thấp

Kháng thể dịch thể chỉ có tác dụng với Virus khi nó còn ở ngoài tế bào Lớp IgM và IgG kết hợp với virus với sự tham gia của bổ thể làm tiêu diệt Virus Hai lớp kháng thể này còn ngăn Virus không cho kết hợp với thụ thể trên bề mặt

tế bào vật chủ, ngăn cản sự hòa màng giữa vỏ Virus và màng tế bào

Kháng thể dịch thể có thể hiện diện trong các loại dịch trong cơ thể nhưng thường ựược xác ựịnh trong huyết thanh Gia cầm có 3 lớp Ig chắnh ựó

là IgA, IgG và IgM

Một ựáp ứng miễn dịch ựiển hình của gia cầm bắt ựầu bằng việc sản xuất ra IgM, sau vài lần ựáp ứng miễn dịch chuyển sang sản xuất IgY IgG là kháng thể chắnh sinh ra trong miễn dịch thứ phát và chiếm ưu thế trong máu gia cầm Kháng thể IgM có thể phát hiện ở gia cầm chỉ sau khi bị nhiễm 5 ngày trong khi kháng thể IgG chỉ ựược phát hiện ở 7 ựến 9 ngày sau khi bị nhiễm Kháng thể IgA dường như rất yếu

+ Miễn dịch qua trung gian tế bào

Quá trình ựáp ứng miễn dịch ựặc hiệu qua trung gian tế bào do các tế bào lympho T ựảm nhiệm Các lympho bào bắt nguồn từ tủy xương di chuyển ựến tuyến ức, tại ựó chúng ựược huấn luyện, biệt hóa thành tiền lympho T, rồi thành lympho T chưa chắn, rồi thành lympho T chắn Từ tuyến ức chúng di chuyển ựến các cơ quan lympho ngoại vi Khi ựại thực bào ựưa các thông tin ựến các lympho T, chúng tiếp nhận và biệt hóa trở thành nguyên bào lympho

T rồi thành tế bào mẫn cảm với kháng nguyên có chức năng như một kháng thể ựặc hiệu gọi là kháng thể tế bào

1.5.3 Miễn dịch chủ ựộng

+ Khái niệm

Là ựáp ứng miễn dịch của cơ thể vật chủ sau khi tiếp xúc với mầm bệnh

và các kháng nguyên của chúng Miễn dịch chủ ựộng có ựặc ựiểm là cơ thể phục hồi nhanh hơn và sức ựề kháng (miễn dịch) mạnh hơn sau khi tiếp xúc với chắnh mầm bệnh ựó vào những lần sau (trắ nhớ miễn dịch) Miễn dịch chủ ựộng ựược chia thành:

- Miễn dịch chủ ựộng tự nhiên: Là các ựáp ứng miễn dịch ựược hình thành sau khi cơ thể bị nhiễm mầm bệnh, chủ yếu là Virus hoặc vi khuẩn

- Miễn dịch chủ ựộng nhân tạo: Là các ựáp ứng của cơ thể ựộng vật và người ựược hình thành sau khi dùng vacxin

+ Các ựặc ựiểm của ựáp ứng miễn dịch chủ ựộng

Khi các tế bào có thẩm quyền miễn dịch lần ựầu tiên tiếp xúc với một kháng nguyên, giữa tế bào và kháng nguyên sẽ diễn ra một chuỗi các sự kiện rất phức tạp, trong ựó có kháng nguyên sẽ bị Ộbắt giữỢ, ựược Ộchế biếnỢ và ựược trình diện tới các tế bào lympho bào có các thụ cảm quan nhận biết kháng nguyên tương ứng ở con vật chưa bao giờ tiếp xúc với một kháng nguyên nào Số lượng tế bào có phản ứng với kháng nguyên là rất nhỏ và ựáp ứng lần ựầu tiên với kháng nguyên diễn ra từ từ với cường ựộ thấp đáp ứng

ựó ựược gọi là ựáp ứng miễn dịch tiên phát

Khi tiếp xúc với kháng nguyên tương tự lần thứ hai và những lần sau

ựó, các tế bào này nhận biết nhanh hơn và quần thể tế bào này củng trở lên lớn hơn đáp ứng miễn dịch với kháng nguyên sẽ diễn ra với thời gian nhanh

hơn và cường ựộ lớn hơn và ựược gọi là ựáp ứng miễn dịch thứ phát

1.5.4 Miễn dịch thụ ựộng

Là trạng thái miễn dịch của một cơ thể nhờ các kháng nguyên chuyển

từ ngoài vào, không phải do cơ thể tự sản xuất ựược Miễn dịch thụ ựộng cúng gồm có 2 loại:

+ Miễn dịch thụ ñộng tự nhiên

Khi kháng thể ñược truyền một cách tự nhiên từ cơ thể này sang cho

cơ thể khác Ví dụ như mẹ truyền kháng thể sang cho con qua nhau thai (ñối với gia súc) hoặc qua lòng ñỏ trứng (ñối với gia cầm)

+ Miễn dịch thụ ñộng nhân tạo

Khi kháng thể ñược con người ñưa vào cơ thể gia súc, gia cầm, ví dụ khi dùng liệu pháp huyết thanh (serotherapy), tức là tiêm kháng huyết thanh hoặc kháng thể triết xuất từ kháng huyết thanh hoặc lòng ñỏ trứng vào cơ thể

ñể tạo kháng thể thụ ñộng nhằm mục ñích phòng và chữa bệnh cho con vật

1.5.5 Những yếu tố ảnh hưởng ñến sự hình thành kháng thể

Các yếu tố chính ảnh hưởng ñến sự hình thành kháng thể là:

- Bản chất kháng nguyên: Kháng nguyên có bản chất là protein và có

tính kháng nguyên cao sẽ kích thích sinh kháng thể tốt

- ðường xâm nhập của kháng nguyên: Tốt nhất là dưới da và bắp thịt

- Liều lượng kháng nguyên: Lượng kháng nguyên ñưa vào vừa ñủ sẽ

kích thích cơ thể sản sinh miễn dịch ở mức tối ña mà không gây ức chế và tê liệt miễn dịch

- Số lần ñưa kháng nguyên vào cơ thể: Tiêm nhắc lại vacxin có tác dụng

tốt, kháng thể sinh ra nhiều hơn và ñược duy trì trong thời gian nhiều hơn

- Chất bổ trợ: Chất bổ trợ cho vào khi chế vacxin với mục ñích giữ và

duy trì lượng kháng nguyên lâu trong cơ thể nhờ ñó tạo kích thích liên tục, ñều ñặn các cơ quan có thẩm quyền miễn dịch tạo ra kháng thể ở mức cao và duy trì ñược lâu hơn Những chất bổ trợ thường dùng là keo phèn, nhũ tương, dầu khoáng, dầu thực vật, saponin

- Trạng thái sức khỏe, dinh dưỡng, cân ñối axit amin trong khẩu phần, yếu tố strees có hại

1.6 Phòng chống bệnh cúm gia cầm

1.6.1 Phòng bệnh

* An toàn sinh học trong chăn nuôi

An toàn sinh học là việc áp dụng tổng hợp và ñồng bộ các biện pháp kỹ thuật và quản lý nhằm ngăn ngừa sự tiếp xúc giữa vật nuôi và mầm bệnh nhằm bảo ñảm cho ñàn vật nuôi ñược hoàn toàn khỏe mạnh và không bị dịch bệnh Một số biện pháp an toàn sinh học cụ thể như sau:

- Thực hiện chăn nuôi khép kín

- Thực hiện chăn nuôi cách ly

- Sử dụng con giống an toàn dịch bệnh

- Kiểm soát sự ra, vào trại chăn nuôi

- Kiểm soát ñộng vật khác

- Vệ sinh trong chăn nuôi

- ðịnh kỳ lấy mẫu giám sát ñánh giá sự lưu hành của virus và dự báo sớm tình hình dịch bệnh

- Phòng bệnh chủ ñộng bằng cách tiêm phòng vaccine ñầy ñủ

- Có hệ thống sổ sách theo dõi

- Tập huấn cho nhân viên trong trại

* Vaccine phòng bệnh

Tình hình nghiên cứu và sử dụng các loại Vaccine phòng bệnh cúm gia

cầm trên thế giới và trong nước

+ Các loại Vaccine phòng bệnh hiện nay:

- Vacxin truyền thống:

Virus cúm gia cầm ñược nuôi cấy trong phôi gà 9 - 11 ngày tuổi, sau ñấy ñược vô hoạt bằng hóa chất β - propiolacton hoặc formaldehyt Kháng nguyên Virus sau khi vô hoạt ñược bổ sung chất bổ trợ nhũ dầu ñể tăng khả năng ñáp ứng miễn dịch Sự tương ñồng giữa kháng nguyên trong vaccine và kháng nguyên của Virus môi trường có cùng subtype H (heamaglutinin tương ñồng) sẽ quyết ñịnh hiệu lực của vaccine

Việc sử dụng các vaccine vô hoạt ñã ñạt ñược những hiệu quả về phương diện sinh học và kinh tế ở một số nước

- Vaccine vô hoạt ñồng chủng (homologous):

Là vaccine chứa cùng những Virus cúm gà giống như chủng gây bệnh trên thực ñịa Các loại vaccine này ñược sử dụng rộng rãi ở Mêxicô và Pakistan trong những trận dịch cúm gà

Hiệu lực của những vaccine này trong việc ngăn ngừa bệnh và giảm lượng Virus thải ra môi trường ñã ñược chứng minh thông qua các nghiên cứu trên thực ñịa và các thử nghiệm

Nhược ñiểm của loại vaccine này là không thể phân biệt gia cầm ñược tiêm chủng với gia cầm tiếp xúc với mầm bệnh trên thực ñịa trừ khi có những con chưa ñược tiêm chủng ñược nhốt trong chuồng

- Vaccine vô hoạt dị chủng (heterologous):

Ví dụ như vaccine vô hoạt H5N2 của Intervet (Hà Lan) và của Weiker (Trung Quốc)

Những Vaccine này ñược sản xuất tương tự như Vaccine vô hoạt ñồng chủng ðiểm khác biệt là các chủng virus sử dụng trong Vaccine có kháng nguyên H giống chủng virus trên thực ñịa, nhưng có Neuraminidase (kháng nguyên N) dị chủng

ðối với 2 loại Vaccine ñồng chủng và dị chủng khi so sánh sẽ thấy mức

ñộ bảo hộ lâm sàng và việc giảm thải virus ra môi trường bên ngoài của vaccine ñồng chủng ñược cải thiện hơn do khối lượng kháng nguyên trong vaccine cao hơn ðối với Vaccine dị chủng, mức ñộ bảo hộ không tỷ lệ chặt chẽ với mức ñộ ñồng chủng giữa gen ngưng kết tố hồng cầu trong Vaccine và chủng trên thực ñịa Nhiều nghiên cứu thực nghiệm ñã chứng minh rằng Vaccine vô hoạt ñơn giá hoặc ña giá có chất hỗ trợ ñã tạo ra kháng thể cho gia cầm, có tác dụng phòng vệ và làm giảm số nhiễm, số chết, không giảm ñẻ trứng Tuy vậy, gia cầm ñược tiêm Vaccine này trở nên mắc bệnh mà không

* Vaccine tái tổ hợp (Recombinant vaccine):

Ví dụ như Vaccine sống virus tái tổ hợp TrovacAIV - H5 của Merial ( Liên doanh Pháp – Mỹ ) lấy nguồn gen H5 từ chủng A/Turkey/Iraland/83 (H5N2), sử dụng cho gia cầm lúc 1 ngày tuổi và đã được sư dụng tại Việt Nam

Một ưu điểm của Vaccine tái tổ hợp hoặc của Vaccine chứa kháng nguyên H là sẽ khơng xảy ra phản ứng đối với phản ứng miễn dịch ngưng kết kép trên thạch Chính vì vậy các điều tra huyết thanh học khĩ cĩ thể thực hiện được đối với loại Vaccine này

Vaccine tái tổ hợp cho phép phân biệt giữa động vật nhiễm bệnh và động vật tiêm chủng Vaccine bởi vì chúng khơng sản sinh kháng thể chống lại kháng nguyên Nucleoprotein phổ biến ở tất cả các virus cúm gia cầm Chỉ những động vật nhiễm bệnh trên thực địa mới tạo ra kháng thể nhĩm A (Nucleoprotein) và phát hiện ra kháng thể này qua phản ứng ngưng kết trên thạch hoặc phản ứng ELISA

Theo quan điểm của OIE, FAO, thì Vaccine nên được sử dụng thành một chiến lược tồn diện phịng chống dịch cúm gia cầm, bao gồm 5 cơng đoạn là: An tồn sinh học, nâng cao nhận thức người dân, giám sát và chẩn đốn, loại bỏ gia cầm bệnh và sử dụng Vaccine

* Yêu cầu cần đạt được đối với Vaccine phịng bệnh cúm gia cầm

+ An tồn

Trong chế tạo Vaccine, chỉ tiêu an tồn là chỉ tiêu cần được coi trọng hàng đầu cần được quan tâm An tồn Vaccine là khi dùng cho vật chủ khơng gây bệnh và bệnh tích cho các cơ quan trong cơ thể gia cầm Tuy nhiên những

Tỷ lệ hiệu giá kháng thể ñạt mức bảo hộ trong ñàn ≥ 70% thì mới ñược coi là ñàn ñạt bảo hộ

* Tình hình sử dụng Vaccine cúm gia cầm trên thế giới

+ Vaccine vô hoạt virus cúm gia cầm tái tổ hợp (sub-type H5N1 chủng Re-1) Bộ Nông nghiệp Trung Quốc ñã phê chuẩn Vaccine này là sản phẩm mới dùng cho gia cầm từ tháng 1 năm 2005 Vaccine rất có hiệu quả ñối với bệnh cúm gia cầm, kích thích gia cầm sản xuất kháng thể với hiệu giá cao hơn

và thời gian bảo hộ dài hơn Các thực nghiệm ñã chứng minh rằng thủy cầm ñược tiêm chủng Vaccine này không bị nhiễm và không bài thải virus cúm gia cầm Hiện nay, nhiều nước trên thế giới ñã sử dụng kỹ thuật này ñể chế tạo chủng virus Vaccine nhưng chỉ có Trung Quốc là thành công và ñã thương mại hóa ñược Vaccine

* Khuyến cáo của OIE việc sử dụng Vaccine phòng chống cúm gia cầm

ðối với bệnh cúm gia cầm, việc sử dụng, tiêm chủng Vaccine như một giải pháp, một công cụ hỗ trợ tích cực ñể ngăn chặn, khống chế và tiến ñến thanh toán bệnh cúm gia cầm ở vùng nhiễm bệnh

1.6.2 Chống dịch

Việt Nam khi phát hiện dịch cúm gia cầm, ðảng và Nhà nước ñã thấy

rõ ñược tầm quan trọng trong công tác phòng chống dịch, ñã chỉ ñạo quyết liệt với nhiều văn bản, chính sách, huy ñộng cả hệ thống chính trị coi công tác

phòng chống dịch cúm gia cầm là nhiệm vụ trọng tâm của cấp ủy ðảng và Chính quyền ñịa phương, tuyên truyền vận ñộng quần chúng nhân dân tích cực tham gia Chính phủ, Bộ Nông nghiệp và PTNT, Bộ Y tế và các Bộ, ngành liên quan có Chỉ thị, Quyết ñịnh, Công ñiện và các Công văn hướng dẫn chỉ ñạo công tác phòng, chống dịch Trong công tác thú y, giám sát ổ dịch tập trung vào các biện pháp sau:

- Về chăn nuôi: Tập trung thực hiện quy hoạch về chăn nuôi, quản lý con giống, quản lý ñàn thuỷ cầm, lập số ñăng ký theo dõi; thực hiện An toàn sinh học trong chăn nuôi

- Về thú y: Thực hiện công tác giám sát từ người chăn nuôi- trưởng thôn (xóm) - Thú y xã, phường và Ban chỉ ñạo cấp xã - Trạm thú y và Ban chỉ ñạo cấp huyện - Chi cục thú y và Ban chỉ ñạo cấp tỉnh

- Quản lý ñàn gia cầm: Trong từng thời ñiểm, Bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn có văn bản quy ñịnh cụ thể trong việc quản lý ñàn gia cầm:

+ ðối với ñàn gà bị tiêu huỷ do mắc bệnh cúm gia cầm, chỉ ñược nuôi trở lại sau 60 ngày tính từ khi tiêu huỷ con gà cuối cùng;

+ Tạm thời dừng ấp trứng sản xuất con giống, nuôi mới vịt, ngan, ngỗng và chim cút theo hướng dẫn số 321/BNN - CN ngày 4/02/2005

- Phân công quản lý: Quản lý ñàn gia cầm giống do Cục Chăn nuôi; Cục Thú y thẩm ñịnh các cơ sở chăn nuôi gia cầm thuộc Bộ quản lý, cơ sở chăn nuôi có vốn ñầu tư nước ngoài

- Thẩm ñịnh ñiều kiện vệ sinh thú y tái lập ñàn: Chi cục Thú y thẩm ñịnh cơ sở chăn nuôi giống thuộc cấp tỉnh quản lý, cơ sở chăn nuôi tư nhân có trên 3.000 con Trạm thú y cấp huyện thẩm ñịnh các cơ sở chăn nuôi có số lượng từ 500 ñến 3.000 con

- Theo dõi dịch bệnh: Thú y các cấp chịu trách nhiệm theo dõi dịch bệnh trên ñịa bàn phụ trách; trưởng thôn, bản chịu trách nhiệm theo dõi tình hình chăn nuôi gia cầm và dịch bệnh của ñàn gia cầm nuôi trên ñịa bàn Trách nhiệm của người chăn nuôi khi tái lập ñàn, nuôi mới, nhập giống gia cầm phải ñăng ký với cấp quản lý chăn nuôi gia cầm

CHƯƠNG II ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 ðối tượng nghiên cứu

- Mẫu swab thu thập từ:

+ Vịt bán tại một số chợ ñầu mối buôn bán gia cầm sống ở tỉnh Hải Dương

+ Virus cúm gia cầm phân lập từ vịt buôn bán tại một số chợ ở tỉnh Hải Dương

2.2 Nội dung nghiên cứu

1 ðiều tra tình hình chăn nuôi gia cầm tại tỉnh Hải Dương từ 2010 ñến

4 Phân tích một số yếu tố nguy cơ tại các ổ dịch cúm

2.3 Nguyên liệu dụng cụ

2.3.1 Nguyên liệu

- Mẫu dịch hầu họng của vịt lấy tại một số chợ ñầu mối buôn bán gia cầm ở tỉnh Hải Dương

- Kháng nguyên H5 chuẩn: Inactivated antigen

- Số liệu dịch tễ học về bệnh cúm gia cầm ñược lưu trữ ở Chi cục thú y tỉnh Hải Dương

- Các nguyên liệu khác