Luận văn giám sát sự lưu hành của virus cúm ah5n1 ở đàn thuỷ cầm trên địa bàn một số huyện của tỉnh thanh hoá

luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI LÊ XUÂN KIÊN GIÁM SÁT SỰ LƯU HÀNH CỦA VIRUS CÚM A/H5N1 Ở ðÀN THỦY CẦM TRÊN ðỊA BÀN MỘT SỐ HUYỆN CỦA TỈNH THANH HÓA LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS. NGUYỄN BÁ HIÊN HÀ NỘI - 2011 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… i LỜI CAM ðOAN - Tôi xin cam ñoan rằng: công trình khoa học này là của tôi, các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược sử dụng ñể bảo vệ học vị nào. - Tôi xin cam ñoan rằng: các thông tin trích dẫn trong luận văn ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng trân trọng biết ơn tới Ban giám hiệu nhà trường, Viện Sau ñại học, Khoa Thú y và các thầy cô ñã tận tình giảng dạy, giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu luận văn thạc sĩ nông nghiệp tại Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội. Với ñề tài “Giám sát sự lưu hành của virus cúm A/H5N1 ở ñàn thuỷ cầm trên ñịa bàn một số huyện của tỉnh Thanh Hoá”. ðặc biệt, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Thầy hướng dẫn luận văn, TS. Nguyễn Bá Hiên. Trưởng bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm Khoa Thú y. Tôi xin tỏ lòng trân trọng biết ơn tới ñ/c Nguyễn Hữu ðịnh, Chi cục trưởng Chi cục Thú y Thanh Hoá, Giám ñốc Ban quản lý dự án VAHIP tỉnh Thanh Hoá. Tôi xin trân trọng cảm ơn tới Th.s Dương Tất Thắng - Giám ñốc Trung Tâm Thú y Vùng III. BSTY. Lê ðình Huệ - Trưởng phòng Chẩn ñoán xét nghiệm bệnh ñộng vật cơ quan Thú y Vùng III. Lãnh ñạo và cán bộ phòng Chẩn ñoán chống dịch - Chi cục Thú y Thanh Hoá. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn gia ñình, bạn bè, ñồng nghiệp, những người thân yêu nhất ñã ñộng viên, chia sẽ, giúp ñỡ trong suốt quá trình học tập, thực hiện nghiên cứu luận văn của mình. Tôi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 28 tháng 4 năm 2011. Học viên Lê Xuân Kiên Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình ix 1. MỞ ðẦU 1 1.1 Tính cấp thiết của ñề tài. 1 1.2 Mục ñích của ñề tài. 3 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 2.1 Giới thiệu chung về bệnh cúm gia cầm 4 2.2 Lịch sử bệnh cúm gia cầm. 4 2.3 Tình hình dịch cúm gia cầm trên thế giới và trong nước. 6 2.4 ðặc ñiểm sinh học của virus cúm gia cầm 11 2.5 Truyền nhiễm học 17 2.6 Triệu chứng, bệnh tích của bệnh cúm gia cầm. 20 2.7 Chẩn ñoán bệnh cúm gia cầm. 23 2.8 Phòng bệnh cúm gia cầm 24 2.9 Miễn dịch chống bệnh cúm gia cầm. 27 2.10 Nghiên cứu trong nước về bệnh cúm gia cầm. 30 3. ðỐI TƯỢNG - NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 3.1 ðối tượng nghiên cứu 33 3.2 Nội dung nghiên cứu 33 3.3 Nguyên liệu 33 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… iv 3.4 Phương pháp nghiên cứu 36 4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 50 4.1 Tình hình chăn nuôi thuỷ cầm tại huyện Quảng Xương, huyện Triệu Sơn và Thành phố Thanh Hoá tỉnh Thanh Hoá 50 4.1.1 Tình hình chăn nuôi 50 4.1.2 Tình hình dịch cúm gia cầm trên ñàn thuỷ cầm tại ñịa bàn tỉnh Thanh Hoá 55 4.2 ðiều tra về tình hình sử dụng vacxin cúm gia cầm tại huyện Quảng Xương, Triệu Sơn và Thành phố Thanh Hoá, năm 2009 và ñợt II/ 2010. 56 4.2.1 Kế hoạch tiêm phòng vacxin cúm gia cầm cho ñàn thuỷ cầm. 56 4.2.2 Kết quả tiêm phòng. 57 4.3 Giám sát sự lưu hành của virus cúm gia cầm trên ñàn thuỷ cầm tại huyện Quảng Xương, Triệu Sơn và Thành phố Thanh Hoá, tỉnh Thanh Hoá 59 4.3.1 Giám sát virus cúm gia cầm trên ñàn thuỷ cầm ñược tiêm và không ñược tiêm vacxin trên ñịa bàn nghiên cứu 59 4.3.2 Giám sát virus cúm gia cầm trên ñàn thuỷ cầm nuôi lẫn và không nuôi lẫn gia cầm trên cạn tại ñịa bàn nghiên cứu 63 4.4 Giám sát huyết thanh học ñối với ñàn thuỷ cầm ñã tiêm phòng vacxin cúm gia cầm H5N1 ñợt II năm 2010 66 4.4.1 Giám sát huyết thanh học ñối với ñàn thuỷ cầm nuôi tại huyện Quảng Xương, Triệu Sơn và Thành phố Thanh Hoá trước khi tiêm phòng vacxin cúm gia cầm H5N1 ñợt II năm 2010. 66 4.4.2 Giám sát huyết thanh học ñối với ñàn thuỷ cầm ñã tiêm vacxin cúm gia cầm ñợt II/ 2010 tại huyện Quảng Xương, Triệu Sơn và Thành phố Thanh Hoá 69 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… v 4.5 Giám sát lưu hành virus từ các mẫu Swabr lấy từ thuỷ cầm tại các chợ buôn bán giết mổ gia cầm sống (4 tháng cuối năm 2010) trên ñịa bàn nghiên cứu. 72 4.5.1 Tỷ lệ nhiễm các gen virus cúm gia cầm type A/H5N1 trên thuỷ cầm của huyện Triệu Sơn. 75 4.5.2 Tỷ lệ nhiễm các gen của virus cúm gia cầm type A/H5N1 ở Thành phố Thanh Hoá 77 4.5.3 Tỷ lệ nhiễm các gen cúm gia cầm type A/H5N1 trên các mẫu xét nghiệm tại huyện Quảng Xương. 79 4.5.4 So sánh số mẫu dương tính với các gen M, H5, N1, 4 tháng cuối năm 2009 và 2010. 81 5. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 83 5.1 Kết luận 83 5.2 ðề nghị 84 TÀI LIỆU THAM KHẢO 85 Phụ lục: 90 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AI Avian Influenza FAO Food and Agriculture Organization HA Hemagglutination Test HI Hemagglutination Inhibition HPAI Hight Pathogenic Avian Influenra ARN Acid Ribonucleic ADN Acid Deoxyribonucleoic LPAI Low Pathogenic Avian Influenza M Matrix H Hemaglutinine N Neuraminidase OIE Office International Epizooties VAHIP Vietnam Avian Human Influenza Prozect RT-PCR Real time RT-PCR WHO World Health Organization CT Cycle of threshold AVP Antivirus protein IFN Interferon IFT Immunofluorescent inhibitiontest PCR Polymerase chain reaction AGP Agar gelprecipitation ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 4.1 Kết quả ñiều tra tình hình chăn nuôi thuỷ cầm tại huyện Quảng Xương tỉnh Thanh Hoá (Tính ñến tháng 8 năm 2010). 51 4.2 Kết quả ñiều tra tình hình chăn nuôi thuỷ cầm tại huyện Triệu Sơn tỉnh Thanh Hoá. 52 4.3 Kết quả ñiều tra tình hình chăn nuôi thuỷ cầm tại Thành phố Thanh Hoá, tỉnh Thanh Hoá. 54 4.4 Các huyện, thị trên ñịa bàn tỉnh Thanh Hóa xảy ra dịch cúm gia cầm từ năm 2007 - 2009 56 4.5 Kết quả ñiều tra về tình hình sử dụng vacxin cúm gia cầm ở ñàn thuỷ cầm trên ñịa bàn nghiên cứu năm 2009 và ñợt II/ 2010 58 4.6 Kết quả giám sát virus cúm gia cầm trên ñàn thuỷ cầm ñược tiêm và không ñược tiêm vacxin H5N1 trên ñịa bàn nghiên cứu 61 4.7 Kết quả giám sát virus cúm trên ñàn thuỷ cầm nuôi lẫn và thuỷ cầm không nuôi lẫn gia cầm trên cạn tại ñịa bàn nghiên cứu 65 4.8 Kết quả giám sát kháng thể cúm gia cầm trong huyết thanh ñàn thuỷ cầm trước khi tiêm phòng vacxin H5N1 ñợt II năm 2010 trên ñịa bàn nghiên cứu 68 4.9 Kết quả giám sát kháng thể cúm gia cầm trong huyết thanh ñàn thuỷ cầm sau khi tiêm vacxin cúm gia cầm H5N1 ñợt II/ 2010 trên ñịa bàn nghiên cứu 71 4.10 Kết quả xét nghiệm mẫu swabr 4 tháng cuối năm 2010 của huyện Triệu Sơn, Quảng Xương và Thành phố Thanh Hoá. 74 4.11 Kết quả xét nghiệm mẫu swabr lấy từ thuỷ cầm tại các chợ của huyện Triệu Sơn 76 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… viii 4.12 Kết quả xét nghiệm mẫu swabr lấy tại các chợ của Thành phố Thanh Hoá. 77 4.13 Kết quả xét nghiệm mẫu swabr của thuỷ cầm lấy tại các chợ buôn bán, giết mổ gia cầm của huyện Quảng Xương. 79 4.14 Kết quả xét nghiệm mẫu 4 swabr tháng cuối năm 2009 và 2010. 81 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ix DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2.1 Cấu trúc bên ngoài của virus cúm gia cầm 11 2.2 Cấu trúc hệ gen của virus cúm type A 13 2.3 Hình thái virus cúm gia cầm 14 2.4 Quá trình xâm nhập và nhân lên của virus cúm A trong tế bào vật chủ. 16 2.5 Triệu chứng bệnh cúm gia cầm 21 2.6 Bệnh tích cúm gia cầm 22 3.1 Kít chiết tách RNA của Virut (Qiampviral RNA extract Kit) Kít RT-PCR onestepQiagen 34 3.2 Kháng nguyên chuẩn Inactivated antigen H5N1 (Veterinary Laboratories Agency) 34 3.3 Máy Realtime PCR-BioRad (IQ5) 35 - Máy Realtime PCR Smartegcler 35 3.4 Cơ chế hoạt ñộng của Taqman probe. 40 3.5 Sơ ñồ chiết tách ARN 43 4.1 Biểu ñồ thể hiện tỷ lệ lưu hành virus trên thuỷ cầm tại các chợ của huyện Triệu Sơn. 75 4.2 Biểu ñồ thể hiện tỷ lệ lưu hành virus cúm gia cầm trên thuỷ cầm và thịt thuỷ cầm tại các chợ của Thành phố Thanh Hoá. 78 4.3 Biểu ñồ thể hiện tỷ lệ lưu hành virus cúm gia cầm trên thuỷ cầm sống và thịt thuỷ cầm tại các chợ của huyện Quảng Xương 80