- Các bước nghiên cứu, xét nghiệm.
3.4.5 Phương pháp làm phản ứng ngưng kết hồng cầu (phản ứng HA) * Ứng dụng.
* Ứng dụng.
- Phản ứng HA dùng ựể xác ựịnh virus có khả năng gây ngưng kết hồng cầụ
- để chuẩn ựộ virus, xác ựịnh ựơn vị HA dùng trong phản ứng HỊ
* Nguyên liệụ
- Nước trứng nghi chứa virus gây ngưng kết hồng cầụ
- Hồng cầu gà 0,5%: ựược chế từ máu của gà trống trưởng thành, khoẻ mạnh, có phản ứng HI âm tắnh.
Cách lấy:
+ Lấy máu tĩnh mạch cánh của gà, chống ựông máu bằng Xitrat Natri 5%. + Ly tâm 1500 vòng/ phút/ 10 phút. Loại bỏ huyết tương ở trên, cho dung dịch PBS (pH = 7.2) vào trộn ựều, ly tâm 1500 vòng/ phút, loại bỏ nước trong ở trên. Làm như vậy 3 lần khi thấy nước bên trên trong là ựược.
+ Lấy 0,5ml hồng cầu ựặc cho vào 99,5ml PBS, lắc nhẹ ựược hồng cầu 0,5%.
* Tiến hành phản ứng.
- Phản ứng ựược thực hiện trên tấm nhựa vi ngưng kết (Microtest Plastes) 96 lỗ, ựáy hình chữ U, chữ V, dung tắch mỗi lỗ 0,1ml.
Phản ứng HA gồm các bước sau:
+ Cho 100 ộl nước trứng chứa virus vào lỗ 1.
+ Pha loãng kháng nguyên (virus) theo bậc 2. Chuyển 50ộl từ lỗ 1 sang lỗ 2, trộn ựều hỗn dịch ở lỗ 2. Hút 50ộl từ lỗ 2 sang lỗ 3. Tiếp tục làm như vậy, pha loãng kháng nguyên ựến lỗ 11 rồi hút bỏ ựi 50ộl.
+ Lỗ 12 làm ựối chứng chỉ chứa 50ộl PBS. + Cho 50ộl hồng gà 0,5% vào tất cả các lỗ.
+ Lắc nhẹ tấm nhựa, ựể ở nhiệt ựộ phòng thắ nghiệm 20 phút sau ựó ựọc kết quả.
* đọc kết quả:
+ Phản ứng dương tắnh: hồng cầu bị ngưng kết nằm rải ựều ở ựáy lỗ. + Hiệu giá của phản ứng ngưng kết hồng cầu:
Là ựộ pha loãng virus cao nhất mà ở ựó vẫn còn virus ngưng kết hồng cầụ Người ta gọi là 1 ựơn vị HẠ
+ Phản ứng âm tắnh: Hồng cầu lắng xuống ựáy thành cục tròn, nước bên trên trong giống như lỗ ựối chứng.
- Trong trường hợp xác ựịnh virus gây ngưng kết hồng cầu:
+ Nếu phản ứng HA dương tắnh: nước trứng có chứa virus gây ngưng