- Các bước nghiên cứu, xét nghiệm.
3.4.6 Phương pháp làm phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu Phản ứng H
kháng huyết thanh chuẩn của một số subtype virus cúm.
+ Nếu phản ứng HA âm tắnh, phôi phát triển bình thường ta tiến hành tiêm lần 2 trên trứng.
3.4.6 Phương pháp làm phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu - Phản ứng HI ứng HI
* Ứng dụng:
+ Phát hiện kháng thể virus cúm gia cầm.
+ Xác ựịnh hàm lượng kháng thể cúm gia cầm sau khi sử dụng vacxin phòng bệnh.
* Nguyên liệu:
- Kháng nguyên chuẩn: là virus cúm H5N1 vô hoạt ựã ựược xác ựịnh hiệu giá ngưng kết hồng cầu (ựơn vị HA). Kháng nguyên dùng cho phản ứng HI là 4 ựơn vị HA/ 25ộl.
- Huyết thanh cần kiểm tra: ựược tách từ máu thuỷ cầm sau khi ựã tiêm phòng vacxin, bảo quản ở - 86oC.
- Hồng cầu gà 0,5%.
* Tiến hành phản ứng HỊ
- Thực hiện trên tấm nhựa vi ngưng kết 96 lỗ ựáy hình chữ U, chữ V (12 x 8). Mỗi mẫu huyết thanh dùng một dãy lỗ.
+ Cho 25ộl dung dịch PBS vào các lỗ từ 2 ựến 12. + Cho 50ộl huyết thanh cần kiểm tra vào lỗ 1.
+ Pha loãng huyết thanh theo bậc 2: chuyển 25ộl huyết thanh từ lỗ 1 sang lỗ 2, trộn ựều hỗn dịch tại lỗ 2, hút 25ộl từ lỗ 2 sang lỗ 3. Tiếp tục làm như vậy pha loãng huyết thanh ựến lỗ 11, hút bỏ ựi 25ộl.
+ Lỗ 12 dùng làm ựối chứng.
+ Cho kháng nguyên 4HA/ 25ộl ựã pha vào các lỗ từ 1 ựến 11. + Lắc nhẹ tấm nhựa, ựể ở nhiệt ựộ phòng 20 - 30 phút.
+ Cho 25ộl hỗn dịch hồng cầu gà 0,5% vào tất cả các dãy lỗ, lắc nhẹ tấm nhựa, ựể ở nhiệt ựộ phòng 20 phút.
* đọc kết quả:
nước bên trên trong.
Hiệu giá của phản ứng HI: là ựộ pha loãng huyết thanh cao nhất mà ở ựó vẫn có khả năng ngăn trở ngưng kết hồng cầụ
+ Phản ứng HI âm tắnh: hồng cầu bị ngưng kết nằm rải ựều thành mảng ở ựáy lỗ.