- Các loại tủ lạnh: 200 C, 800 C, 40C Buồng an toàn sinh học cấp độ
3.6.1 Tách chiết ARN
Trước khi tách chiết ARN cần chuẩn bị: dung dịch đệm RLT bổ sung 2 – mecraptoethanol tỉ lệ 1:100 và RPE bổ sung 4 lần thể tích ethanol. Mẫu sau khi được xử lý sẽ tiến hành chiết tách ARN theo các bước sau:
1) Cho 500 µl dung dịch đệm đã được bổ sung 2- mecraptoethanol vào ống eppendorf 1,5 ml.
2) Chuyển 200 µl mẫu đã xử lý vào ống eppendorf, trộn 15 giây, sau đó ly tâm 5000 vòng/phút trong 5 giây cho lắng xuống.
3) Ủ 5 phút ở nhiệt độ phòng.
4) Cho thêm 500 µl ethanol 96 – 100% trộn 15 giây rồi ly tâm 9000 vòng/phút trong 5 phút.
5) Lắp khóa van vào hệ thống và gắn cột lọc vào van. Bật máy hút chân không, điều chỉnh khóa van để P = 600 - 800.
6) Cho hết toàn bộ hỗn hợp mẫu trên vào cột lọc, rút hết dung dịch trong cột lọc.
7) Cho 700 µl RW1 vào cột lọc, rút hết dung dịch rửa trong cột lọc. 8) Cho 500 µl RPE vào cột lọc, rút hết dung dịch trong cột lọc. 9) Lặp lại bước 8.
10) Lấy cột lọc ra cho vào ống lọc, ly tâm 14000 vòng/phút trong 3 phút. 11) Lấy cột lọc đặt vào ống eppendorf, cho vào cột lọc 50 µl đệm AE hoặc RNase-free H2O sau đó giữ ở nhiệt độ phòng trong 1 phút rồi ly tâm 9000 vòng/phút trong 3 phút.
12) Bỏ cột lọc, đậy nắp ống eppendorf giữ ARN.
3.6.2. Master mix
Thành phần master mix được trình bày ở bảng 3.2.
Sau khi cho các chất có trong bảng 3.2 vào ống eppendorf tiến hành vortex và spin trong thời gian 10 – 15 giây.