Đang tải... (xem toàn văn)
Vi nấm (Fungi) và độc tố vi nấm (Mycotoxin) là vấn đề rất quan trọng trong công tác bảo quản nông sản, thực phẩm và trong y tế. Gần 400 độc tố vi nấm được phát hiện cho đến nay [18], trong đó, aflatoxin là độc tố được quan tâm nghiên cứu nhiều nhất
Phụ lục 1: Các đặc tính lí hóa của AFT. Phụ lục 2: Bảng xếp loại các độc chất dựa vào liều LD 50 trên động vật (Lu, 1996) Aflatoxin Công thức nguyên Trọng lượng phân tử Điểm nóng chảy Huỳnh quang dưới tia UV Bước sóng huỳnh quang khi kích thích bằng tia 365 nm λ Ex’ (nm) trong Metanol ACN Chloroform Aceton Nhóm difurocoumacyclopentenone AFL B1 C 17 H 12 O 6 312 267 Xanh lam 430 416 415 422 AFL B2 C 17 H 14 O 6 314 303- 306 Xanh lam 430 419 415 420 AFL B2a C 17 H 14 O 7 320 240 Xanh lam AFL M1 C 17 H 12 O 7 328 299 Xanh lam 428 AFL M2 C 17 H 14 O 7 330 293 Xanh lam 430 AFLM2a C 17 H 14 O 8 346 248 Lục Nhóm difurocoumarolactone AFL G1 C 17 H 12 O 7 328 257- 259 Xanh lục 450 440 435 448 AFL G2 C 17 H 14 O 7 330 237- 240 Xanh lục 450 437 435 448 AFL G2a C 17 H 14 O 8 346 190 Xanh lục c tớnh LD 50 Cc c (Super toxic) 5 mg/kg Rt c (Extremely toxic) 5 -50 mg/kg c tớnh cao (Highly toxic) 50 500 mg/kg c tớnh khỏ cao (Moderately toxic) 0.5 5 g/kg c tớnh nh (Slightly toxic) 5 15 g/kg Khụng c (Practically nontoxic) > 15 g/kg Ph lc 3: S lc cỏch ch to ct IAC (Vin Pasteur Tp. HCM, 2002) 1. Gõy min dch Th gõy min dch phi hon ton khe mnh, 2-3 thỏng tui, trng lng trờn 2 kg. Ly 1 ml mỏu tai trc khi tiờm mi mn cm lm chng. Khỏng nguyờn dựng tiờm l cng hp AFB1 BSA ca hóng Sigma Chemical. Khỏng nguyờn c trn vi NaCl 0,9% v tỏ cht (lc 30 phỳt) thu c huyn dch AFB1 BSA. Mi mn cm: tiờm 2 ml huyn dch/th, liu tiờm c chia thnh nhiu mi trờn lng, 100 àl huyn dch cũn li tiờm mt bờn ựi. ựi cũn li tiờm 100 àl vaccine ho g. Mi nhc li 1, 2, 3, 4, 5 tiờm trong 5 thỏng (mi thỏng 1 ln), quy trỡnh tiờm tng t nh trờn nhng lng khỏng nguyờn AFB1 BSA gim dn v khụng cú vaccine ho g. 2. Tinh ch IgG 14 ngy sau ln tiờm th 5, ly ton b mỏu t ng mch ựi. Ly tõm thu huyt thanh v tỏch b hng cu, sau pha loóng huyt thanh gp ụi bng nc mui sinh lớ. Ta IgG bng (NH 4 ) 2 SO 4 45% bóo hũa. Tip theo cho huyt thanh phn ng vi BSA loi cỏc thnh phn IgG khỏng BSA. 3. To cng hp sepharose IgG khỏng AFB1 IgG thu c sau khi tinh ch c gn ng tr lờn sepharose ó c hot húa bi CNBr theo quy trỡnh ca nh sn xut Amersham Biotech. Quỏ trỡnh gn c thc hin mt trong hai ch : (1) 22 o C 25 o C trong 2 gi hoc (2) 4 o C trong 24 gi. Trong thi gian to cng hp, hn hp c trn liờn tc bng mỏy lc nh. Khi cng hp kt thỳc, cn kim tra li IgG cũn d trong hn dch ỏnh giỏ hiu sut gn. Hiu sut gn cng cao thỡ cht lng ct cng cao. Cng hp sepharose IgG l gel cú thm cao khi cho cht lng chy qua. Sau khi x lớ loi b cỏc IgG cũn bỏm c hc trong gel, gel c úng vo ct nha kích thước 0.4 cm x 10 cm với lượng 0.1 ml – 0.15 ml/cột. Cột được bảo quản ở nhiệt độ 4 o C – 8 o C. Giá ái lực miễn dịch giữ hoạt tính ổn định ít nhất 1 năm (Nguyễn Lê Trang, 2003) Phụ lục 4: Máy quang phổ (U – 3310 Spectrophotometer – Hitachi) Máy đo huỳnh quang (Vicam – Series – 4 Fluorometer, USA). . vo ct nha kích thước 0.4 cm x 10 cm với lượng 0.1 ml – 0.15 ml /cột. Cột được bảo quản ở nhiệt độ 4 o C – 8 o C. Giá ái lực miễn dịch giữ hoạt tính. 8 346 248 Lục Nhóm difurocoumarolactone AFL G1 C 17 H 12 O 7 328 257- 259 Xanh lục 450 440 435 448 AFL G2 C 17 H 14 O 7 330 237- 240 Xanh lục 450 437