Vi nấm (Fungi) và độc tố vi nấm (Mycotoxin) là vấn đề rất quan trọng trong công tác bảo quản nông sản, thực phẩm và trong y tế. Gần 400 độc tố vi nấm được phát hiện cho đến nay [18], trong đó, aflatoxin là độc tố được quan tâm nghiên cứu nhiều nhất
MỤC LỤC CHƯƠNG TRANG Trang tựa Lời cảm tạ……………………………………………………………………iii Tóm tắt …………………………………………………………………… .iv Abstract……………………………………………………………………….v Mục lục ………………………………………………………………………vi Danh sách các chữ viết tắt……………………………………………… ….ix Danh sách các hình……………………………………………………………v Danh sách các bảng………………………………………………………… .vi Danh sách các biểu đồ……………………………………………………… .vi 1. ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Đặt vấn đề……………………………………………………………01 1.2 Mục đích…………………………………………………………… 02 1.3 Yêu cầu………………………………………………………………02 2. TỔNG QUAN 2.1 Đại cương về aflatoxin……………………………………………….03 2.1.1 Lịch sử phát hiện ……………………………………………….03 2.1.2 Phân loại……………………………………………………… .04 2.1.3 Tính chất hoá lí………………………………………………….05 2.1.4 Tác động sinh học……………………………………………….05 2.1.4.1 Độc tính cấp……………………………………………07 2.1.4.2 Độc tính mãn………………………………………… .08 2.1.5 Sự hiện diện trong thực phẩm………………………………… .10 2.1.6 Giới hạn về hàm lượng trong thực phẩm và thức ăn gia súc…….10 2.2 Các phương pháp phân tích aflatoxin…………………………………12 2.2.1 Phương pháp sinh học……………………………………………12 2.2.2 Phương pháp phân tích hoá lí…………………………………….12 2.2.2.1 Lấy mẫu………………………………………………….13 vi 2.2.2.2 Chiết aflatoxin…………………………………………13 2.2.2.3 Làm sạch mẫu………………………………………….14 2.2.2.4 Cô đặc mẫu…………………………………………… 14 2.2.2.5 Phát hiện và xác định hàm lượng……………………….14 2.2.3 Phương pháp miễn dịch học…………………………………… 16 2.3 Sắc kí ái lực miễn dịch (IAC – ImmunoAffinity Chromatography)….17 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 3.1 Thời gian và địa điểm………………………………………………….20 3.1.1 Thời gian…………………………………………………………20 3.1.2 Địa điểm………………………………………………………….20 3.2 Vật liệu…………………………………………………………………20 3.2.1 Đối tượng nghiên cứu…………………………………………….20 3.2.2 Hóa chất………………………………………………………… 20 3.2.3 Dụng cụ………………………………………………………… .20 3.2.4 Thiết bị……………………………………………………………21 3.3 Phương pháp nghiên cứu………………………………………………21 3.3.1 Các phương pháp phục vụ cho nghiên cứu………………………21 3.3.1.1 Quy trình tạo giá ái lực miễn dịch……………………….21 3.3.1.2 Phương pháp quang phổ kế để xác định nồng độ AFG1 23 3.3.1.3 Quy trình chiết xuất, cô đặc và tinh chế AFG1 với cột IAC 3.3.1.4 Phương pháp dùng huỳnh quang kế đo lường lượng AFT 3.3.2 Xây dựng đường chuẩn cho AFG1 bằng huỳnh quang kế……….26 3.3.3 Khảo sát các chỉ tiêu 27 3.3.3.1 Độ nhạy của cột………………………………………… 27 3.3.3.2 Độ lặp lại của cột…………………………………………28 3.4 Phương pháp xử lí số liệu…………………………………………… .28 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Cột IAC 2,5 do Viện Pasteur Tp. HCM sản xuất……………………… 29 4.2 Nồng độ dung dịch AFG1 chuẩn xác định bằng quang phổ kế……… .29 4.3 Đường chuẩn AFG1 dựa trên huỳnh quang kế…………………………29 4.4 Độ nhạy của cột……………………………………………………… .30 4.5 Độ lặp lại của cột……………………………………………………….31 vii 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận……………………………………………………………….34 5.2 Đề nghị……………………………………………………………… 34 6. TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………………… .35 Phụ lục viii . 4.1 Cột IAC 2,5 do Viện Pasteur Tp. HCM sản xuất ……………………..29 4.2 Nồng độ dung dịch AFG1 chuẩn xác định bằng quang phổ kế………...29 4.3 Đường chuẩn AFG1. tạo giá ái lực miễn dịch …………………….21 3.3.1.2 Phương pháp quang phổ kế để xác định nồng độ AFG1..23 3.3.1.3 Quy trình chiết xuất, cô đặc và tinh chế AFG1