Khóa luận tốt nghiệp Sư phạm sinh học: Khảo sát khả năng kháng độc tính cì của dịch ép quả sơ ri lên hệ sinh sản chuột nhắt trắng đực (Mus musculus var. Albino)

Trong y học hiện đại, việc nghiên cứu các hoạt chất có nguồn gốc tự nhiên có tác dụng điều trị nhiễm độc chì là một hướng tiếp cận mới và nhanh chóng thu hút được sự quan tâm của các nhà

BO GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HÒ CHÍ MINH

k LL os

LY VIEN TRIEU QUANG

(Mus musculus var albino)

KHOA LUAN TOT NGHIEP DAI HOC

NGANH SƯ PHAM SINH HỌC

THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH - 2023

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HÒ CHÍ MINH

w LL Ͽ

LY VIEN TRIEU QUANG

KHAO SAT KHA NANG KHANG DOC

TINH CHi CUA DICH EP QUA SO RI LEN

HE SINH SAN CHUỘT NHAT TRANG DUC

(Mus musculus var albino)

KHOA LUAN TOT NGHIEP DAI HOC

NGANH SƯ PHAM SINH HỌC

NGƯỜI HƯỚNG DAN KHOA HỌC

ThS Trương Van Trí

THÀNH PHO HO CHÍ MINH - 2023

LỜI CẢM ƠN

Trong qua trình thực hiện khoá luận tot nghiệp, ngoài sự cỗ gắng và no lực của

bản thân, tôi còn có sự giúp đỡ và chi dạy tận tình của các Thay Cô, bạn bè và gia đình trong suốt quá trình thực hiện đề tài.

Trước tiên, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất đến Thay - ThS Trương VanTri đã tận tình hướng dan, truyền đạt kiến thức và động viên tôi vượt qua những khó

khăn trong quá trình thực hiện khoá luận tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn đến quý Thay Cô Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Ho Chí Minh đã giảng day các kiến thức, truyền đạt những kinh nghiệm quý báu cho tôi trong suốt bốn năm

học tập và rèn luyện tại trường Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến Cô Nguyễn

Thị Thương Huyện, Có Tran Quốc Thẳng Hoa, Thay Võ Văn Thanh và anh chị tại

Phong thí nghiệm Giải phẫu - Sinh li người & động vật của Trường Dai học Sư phạm

Thành phổ Hồ Chí Minh đã tận tình chỉ bảo và hỗ trợ tôi trong quá trình thực hiện

nghiên cứu.

Tôi xin cam ơn gia đình và ban bè đã luôn ting hộ tôi trong quá trình thực hiện

khoá luận tốt nghiệp Cảm ơn bạn Duong, bạn Phước, bạn Mi, bạn Bưu đã nhiệt tink

giúp đỡ và động viên tôi trong quá trình thực hiện nghiên cứu.

TP Hỗ Chi Minh, ngày 15 tháng 05 năm 2023

SINH VIÊN

Lý Viễn Triệu Quang

T,Mũe tiền BEHIỂT Ca sissies cassis szssesescssssssnasesacsssssssasenssessssascssasssszsesassscscassessasaase 2

TEL, Di turgng nghien 0 csseesseessesssessseesseesseesseesessssenovsnsvessennnenneensneeaneens )

TV Nội dung nghiễn Ciiil scccsccssesssecsssassceassesssnacsscsseassscassasasoasseausnasseasscasseassseass 2 FBaimi+viipnghiôBi€ỨU :s:s:siccioiiiisiioiiisiitiiiitiii141111121133331251535313531852858539838385558 2

Hinman Bs TODS GIAN n2 nenuenoiresonieeieantaiitastia6sa006100631052100210060092003E001 4

LoL Chuot sẽ hố 1.Ả L +

I,1.L, VỊ phân logs cccisissssssisissssssisissesveisvscsesessvesssvavensasaveveesevavscecssvsesesossevevenseveve 4

1.1.2 Sơ lược về chuột nhất trắng 3ã853lSã84531898535558384355355583ã45)558334558555331955E45369559543585E 4

1.1.3 Đặc điểm hệ sinh sản chuột nhắt trắng đực ¿5255 cssc5sscsse2 5

1125/01 HINH MO HN ¡1:65:62 12651521305:15131921315133151531398013151331316113451331338113131541315933481331535418 5 I.1-3:2 MàotHNB:::::::::::::::::ccccciiiiiiiiiiiiiniiitiiiitiiRE11111211853138581333858358883335888353850 6

1.2.4 Anh hưởng chi lên hệ sinh dục đực 5555 cc<~e<eseereeeree 12

1.3 Tổng quan về Sơ ri (0 2 22112110 11 21 1110111221012100201110112 11211 2 14

1.3.1 Sơ lược về Sơ ri và tác dung trong đời sống -cc-ccces 14

1.3.2 Thanh phan của địch ép quả Sơ ri - 552c 25522 222vcssrrrrrsrree 15 1.3.3 Sơ lược về vitamin C (ascorbic acid) o cccccecccesssesssesssesssesssessseesseeseveveees 16

1.4 Tình hình các công trình nghiên cứu trên thé giới và ở việt nam 18

1.4.1 Tình hình nghiên cứu trên thé giGi c.ccccccecsssseeesssesessvessssveesssseeseveresnseneen 18 1.4.2 Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam Ăn, 21 Chương 2 VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHAP NGHIÊN CỨU 23

2,1 Thời gian và địu điểm ngiiiên COU csscsssssssescsscsssssssosssasossasesaasocsssasssassessnses 23 2.1.1, DEG GUA TEEN LGÍNIsssssrsessniieeasirioreiiirieeiiinittioiiiiititiitittiagitgitdasignssstassnt 23 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 2c 2 10022121112 72121111 T1 1122110121211 se 23 2.2 Dụng cụ, thiết bị và hoá chấtL 2-2221 23 21215211211 22211 2112122521111 2 xxe2 23 2.2.1 Dụng cụ, thiết bị ding chăm sóc chuột và thu tinh trùng chuột 23

2.2.2 Hoá chất và dung dich thí nghiệm 2 -22222scccScczzeeeerczzke 24 2.3.IPhương pháp nghiện CỨNG¡:cccccccocccoctiiodiisiisiiiisi3i431124136313848353130381Ÿ56 25 2.3.1 Phương pháp chăm sóc chuột SH 26 2.3.2 Cơ sở chọn nồng độ chì, địch ép quả Sơ ri và vitamin C thương mại 26

0.3: 1)IB0IN1(Rlif HIẾN an c2 nen 16622 ttoeitttnneitionnne:EooEE51266502100121010002531001 27 2.3:4.IPhương ¡pháp MEMIGM CU csc: issscscscsscscsassescssseseescszsssscsesaeszcscosesessostasasssezecis 28 2.3.4.1 Phuong phap chuan bj dich ép qua So ri, dung dich chi nitrate va dung dich vitamin C thương miại - - Án, 28 2.3.4.2 Phương pháp cho chuột uống chi, vitamin C và dịch ép quả Sơ ri 29

2.3.4.4 Phương pháp thu nhận mẫu tinh hoản va tinh dich - 29

2.3.4.5 Phương pháp xác định kích thước và khối lượng tinh hoàn 31

2.3.4.6 Phuong pháp đánh giá mật độ tinh trùng chuột 31

2.3.4.7 Phương pháp đánh giá chất lượng tinh trùng chuột 32

2.3.4.8, Phương pháp đánh giá chất lượng và quan sát vi thé của tinh hoàn 33

2.3.4.9 Phương pháp xử lí số liệu 2222222222111212221111112 111 e, 34 Chương 3 KET QUA VA BẢN LUẬN 2222 2222222222112 1175223022 E2-cy 35 3.1 Tác dụng kháng độc tính chi của dịch ép quả Sơ ri lên kích thước và khỗi lưgng¡tnhihoàn CHhHỐI:::;::::::::::::::::::::::i222222222222232230122231230123358550232122285553235363E 35 3.1.1 Kích thước tinh hoàn chuột tại các nghiệm thức qua 4 tuần và 8 tuần 35

3.1.2 Khối lượng tinh hoàn chuột tai các nghiệm thức qua 4 tuần va 8 tuân 40

3.1.3 Bàn luận về tác động của chi và dịch ép qua Sơ ri lên kích thước và khối

lượng tiihiHöoàn GHUỔI:csssssaoaoosnioosiiioiriỷniiioeoooooiiiiooaiingieitagioaasne 43

3.2 Tác dụng kháng độc tính chì của dịch ép quả Sơ ri lên số lượng và chất lượng

3.3 Tác dung kháng độc tinh chì của dịch ép quả Sơ ri lên cau trúc vi thé tinh hoàn

CHU voces ccsucassccsssccscucseczsscasencusucussaasiaassesscesacuaasesaicasssesanerssaassuassnessuatsncusnousaazseus 59

3.3.1 Cấu trúc vi thé tinh hoàn chuột ở các nghiệm thức sau 4 tuần s93.3.2 Cau trúc vi thé tinh hoan chuột ở các nghiệm thức sau 8 tuần 61

3.3.3 Bàn luận về cau trúc vi thé tinh hoàn của chuột - 62

KETLUAN VA EIENNOHĂsneaaoaaannnnnnadanorranaaatetdottnnansnnaal 66

ÏIEBHHHEB 060161 665120006210023600-21565210600022005222306 -355-002118223-27 66

2 Kiến nghị -. 522- 22 2222222213221121112111211171112112117211721721772117210221 12.11 ciye 66ADT THAM HÀ Du nbnnaaieioieeironicriantaanoinsaessaal 67

7105112 PLI Phụ lục | - Kích thước tính hoàn - LG 1122122211111 1H SH ng se, PLI Phụ lục 2 - Khối lượng finh hoa -::::s:scaissasssessccsascassesseeasscasseassseassesszcssecassesseca PLP?

Phụ lục 3 - Số lượng tinh trùng chuột s6 1 22112211221 c1 1021021026 PLI0Phụ lục 4 - Chất lượng:tinhiftrùng(ChUốP-;: :::::::::: ::::iz2i12112211202012112233013832254 623832 PL13

Phụ lục 5 - Kết qua phân tích ham lượng vitamin C trong địch ép qua So ri PL23

Phụ lục 6 - Chap thuận của hội đồng đạo đức trong nghiên cứu trên động vat PL24

LH i

NT

Pb Chỉ uống nước pha Pb* từ chi nitrate nông độ 70 mg/kg

Uống chi nồng độ 70mg/kg thẻ trọng + dịch ép qua Sơ ri nông độ 20 mg/kg

DANH MUC BANG BIEU

Bang 2.1 Dụng cụ, thiết bị chăm sóc chuột , s2 25 t0 0022012218221 sec 23Bảng 2.2 Dung cụ, thiết bị thu mẫu tinh hoản, tinh trùng chuột va quan sát tiêu bản 23

Bang 2.3 Hoá chat pha dung dịch thí nghiệm 2222222222222 cc2ccsrzsrree 24

Bang 3.1 Kích thước tỉnh hoan trung bình của chuột tai các nghiệm thức qua

A tun VAS tM nh ad na jãñ 35 Bảng 3.2 Khôi lượng tỉnh hoàn trung bình của chuột tại các nghiệm thức qua

4 tuần và § tuần 2 SH TH HH1 TT TH ng nước 41 Bang 3.3 Số lượng tinh trùng trung bình của chuột tai các nghiệm thức qua 4

71 VA 8 HUAN n Ra 46

Bảng 3.4 Chất lượng tỉnh trùng trung bình của chuột tại các nghiệm thức qua

4 td VAS nan acc Sl

DANH MỤC HÌNH

Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tông thẻ 22202220 20 1022122122 ecsse 25Hình 2.2 Bồ trí chuồng nuôi chuột thí nghiệm - 2-5222 28

Hình 2.3 Sơ ri chua Brazil được mua tại Gò Công (Tiền Giang) 28

Hình 2.4 Hình minh họa thao tác cho chuột uống - 5: 5 2620 22 22cexcee 29

Hình 2.5 Phương pháp thu mao tinh và mẫu tinh hoàn chuột 30

Hình 2.6 Phương pháp thu tinh dịch chuột trong môi trường CBZZ 30 Hình 2.7 Phương pháp đo kích thước tinh hoàn chuột .- <c<~ce+ 31 Hình 2.8 Mật độ tinh trùng trên buông dém Neubauer (X40) - - 32 Hình 2.9 Trạng thái của tinh trùng sau khi nhuộm kép (x40) 33 Hình 2.10 Hình minh hoạ mẫu ngâm tỉnh hoàn chuột nhất trăng 34

Hình 3.1 Kết quả thé hiện sự khác biệt vẻ kích thước chiều ngang trung bình của tinh

hoàn giữa các nghiệm thức (kiêm định Tukey) -5-5c5ccceec-ec-i.-.- Ÿ7

Hình 3.2 Đồ thị thé hiện kích thước chiều ngang trung bình của tinh hoàn tại các

nghiệm thức thử nghiệm qua 4 tuần và § tuân 2222-22 ©2zccsecserrsrrrseee 37

Hình 3.3 Kết quả thé hiện sự khác biệt về kích thước chiều đọc trung bình của tinh

hoàn giữa các nghiệm thức (kiêm định TTUKÔY ) (0i: 5s5522005211549495084631669315384594623636518 39

Hình 3.4 Đồ thị thé hiện kích thước chiều doc trung bình của tinh hoàn tại các nghiệm

thức tứ nghiệm qua 4 tuần và S!tUAed sccssessssessscsssessseasssssssossscsssssssonsoossssssssesssosssesss 39Hình 3.5 Kết qua thé hiện sự khác biệt về khối lượng trung bình của tỉnh hoàn giữacác nghiệm thức (kiểm định Tukey) - 6c c2 2 22122117210 111 1121112210222 xe 42Hình 3.6 Đồ thi thé hiện khối lượng trung bình của tinh hoàn tại các nghiệm thức thử

nghiệm qua 4 tuần và § tuần -. 52-52 22222222223221112112112211711 2121 -xecxeer 42

Hình 3.7 Kết quả thê hiện sự khác biệt về số lượng tỉnh trùng trung bình giữa các

nghiệm thức (kiêm định 'Tukey) + 22222222223 2222 E3 2x2 S222 Execxrrxree 47

Hình 3.8 Đồ thị thẻ hiện số lượng tinh trùng trung bình tại các nghiệm thức thir

nghiệm qua 4 tuần và § tuần 22 22©©Ez+EEZSEESEE 21221312 3173473 7Set-xrrrree 47 Hình 3.9 Kết quả thé hiện sự khác biệt về tỉ lệ sông trung bình của tinh trùng giữa các nghiệm thức (kiểm định Tukey) 2-2 ©2z2z+tzxetczzczxercvxecvreerr 42

Hình 3.10 Dé thị thê hiện tỉ lệ sông trung bình của tinh trùng tại các nghiệm thức thử

nghiệm qua 4 tuần và 8 tuần - 0-22 0222 2102222112112 11 210230122112 111212 xe 52Hình 3.11 Kết quả thê hiện sự khác biệt về tỉ lệ di động bình thường trung bình của

tinh trùng giữa các nghiệm thức (kiểm định Tukey) 55-c55Scs-ccc-cc- 53

Hình 3.12 Đồ thị thê hiện ti lệ di động bình thường trung bình của tinh trùng tại các

nghiệm thức thử nghiệm qua 4 tuần và 8 tuần 2-2222-2272cccxxcrrrcrrrrree 33 Hình 3.13 Kết qua thé hiện sự khác biệt về tí lệ dj dang trung bình của tinh trùng

giữa các nghiệm thức (kiểm định HC VÌ|-.::c-a2s2031201522113555552555395285523539935553855355385854 53

Hình 3.14 Đồ thị thẻ hiện ti lệ dị đạng trung bình của tỉnh trùng tại các nghiệm thức

thê nghiệm giia:d tần AB A ics scbsssscusnsaanncanacaanccsinassacssasasancassesananinancsanss 33

Hình 3.15 Các kiểu hình dạng của tinh trùng chuột ghỉ nhận qua thí nghiệm (x40) 55

Hình 3.16 Cau trúc mô tinh hoàn chuột ở các nghiệm thức sau 4 tuần thí nghiệm (Scale! Dar IOŨ|HTN):::::::::::<:::eccic2i:22ti221212111231102311231163316311635833563136533887383358385353883514512 59

Hình 3.17 Cấu trúc mô tinh hoàn chuột ở các nghiệm thức sau 8 tuần thí nghiệm

(Salle Dar Q|jiTHÌ::-::::::::-::::icccci:22::221222101210220122212292253185535520532552285265584338588552252622a8538 6l

MỞ ĐẦU

I LÍ DO CHỌN DE TÀI

Hiện nay, môi trường và sức khỏc cộng đông luôn là van dé được quan tâm hang đầu Những nỗ lực loại bỏ các chất ô nhiễm ra khỏi môi trường hoàn toàn không theo

kịp với việc lượng chất thải sản xuất ngày càng tăng Điều này thường dẫn đến sự

biến đôi về môi trường, gây mat cân bang sinh thái và ảnh hưởng trực tiếp đến đời sống con người.

Trong quá trình công nghiệp hoá, các chất thải néu không được xử lí hoặc xử lí không triệt dé sẽ gây 6 nhiễm môi trường nghiêm trọng, đặc biệt là ô nhiễm kim loại nặng Nguồn gốc tự nhiên của chúng bao gồm sự phong hoá của đá và núi lửa phun trào, trong khi các nguồn đo con người gây ra bao gồm khai thác mỏ, các lĩnh vực công nghiệp nông nghiệp khác Điều nay đã dân đến sự gia tăng ham lượng của các kim loại nặng trong môi trường, làm xáo trộn các chu trình sinh địa hoá của chúng, tác động xấu

đến các hệ sinh thái đưới nước, trên cạn, không khí Việc xử lí ô nhiễm kim loại nặng

rất khó khăn cân một thời gian dai dé phân hủy các chất độc tích tụ gây 6 nhiễm hệ

sinh thái Chì là kim loại được sử dụng rộng rãi trong sản xuất, nhưng lại gây ngộ độckhi xâm nhập vao cơ thê qua đường hô hap, qua đường tiêu hoa, qua da, qua nhau thai.Các nghiên cứu cho thấy rằng, chì gây căng thăng cho não bộ, ảnh hưởng đến các cơchế cân bằng nội môi tác động xâu dén hoạt động sinh lí của các cơ quan Vấn dé đángquan tâm là bệnh nhân nam bị nhiễm chỉ sẽ giảm ham muốn, giảm chức năng nội tiết

tỉnh hoàn, tinh trùng bị biến đôi hình thái, tính đi truyền giảm, có thé din đến vô sinh

[1].

Trong y học hiện đại, việc nghiên cứu các hoạt chất có nguồn gốc tự nhiên có

tác dụng điều trị nhiễm độc chì là một hướng tiếp cận mới và nhanh chóng thu hút

được sự quan tâm của các nhà nghiên cứu, trong đó phải kê đến các loài thực vật có

ham lượng vitamin C cao Cho đến thời điểm hiện tại, phan lớn các công bố đều

hướng đến khả năng kháng độc tinh chi của vitamin C L-ascorbic acid hay vitamin

C là chất chéng oxi hoá, có tác dụng kháng khuẩn, hỗ trợ hệ miễn dịch, chống ung thư, tông hợp collagen, cải thiện quá trình sinh tỉnh và chất lượng tỉnh trùng.

Sơ ri Brazil (Malgiphia emarginata DC) có qua nhỏ, vỏ mong, hương vị thom

ngon, vị ngọt, chua nhẹ, thành phan dinh dưỡng cao, chứa ham lượng vitamin C khoảng

1567.9 mg/100 g [2] Với điều kiện thời tiết và thé nhưỡng thuận lợi số lượng lớn Sơ ri Brazil được sản xuất hang năm ở nước ta, cung cấp nguồn vitamin € tự nhiên dồi dao.

Tuy vậy, công dung kháng độc tính chi của quả Sơ ri lên hệ sinh sản va chức nang sinh

sản vẫn chưa được nghiên cứu làm rõ Do đó, việc có thêm các khảo sát, nghiên cứu về

công dụng của quả Sơ ri là cần thiết dé giúp khai thác tôi đa tiềm năng từ So ri, góp phan tăng tính ứng dụng của loài nảy.

Với những lí do trên, dé tài “Khao sát khả năng kháng độc tính chì của dịch

ép quả Sơ ri lên hệ sinh sản chuột nhắt trắng đực (Mus musculus var albino)”

được thực hiện.

II MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU

Khao sát được khả nang kháng độc tính chi của dịch ép qua Sơ ri lên hệ sinh

sản chuột nhắt trắng đực thông qua số lượng và chất lượng tỉnh trùng, kích thước và

khối lượng tinh hoàn, cau trúc giải phẫu của tỉnh hoàn chuột.

II ĐÓI TƯỢNG NGHIÊN CUU

Chuột nhất trắng đực 6 tuần tuôi (19-21 g).

IV NOI DUNG NGHIÊN CUU

Khao sat tác dụng khang độc tinh chi của dich ép qua Sơ ri lên:

— Kích thước tinh hoàn của chuột;

- Khối lượng tinh hoàn của chuột;

— Số lượng tinh trùng của chuột:

— Chat lượng tinh trùng của chuột;

~ Cau trúc mô tinh hoàn của chuột.

V PHAM VI NGHIÊN CỨU

Thời gian bố trí thí nghiệm: 8 tuan/dot thí nghiệm.

Khao sát ở 1 nồng độ chi: 70 mg/kg thẻ trong; 3 nông độ dịch ép quả Sơ ri dựa

trên ham lượng vitamin C trong dịch ép (20 mg/kg thê trong, 30 mg/kg thẻ trọng và

40 mg/kg thé trong);

CHUONG 1 TONG QUAN

1.1 CHUOT NHAT TRANG

1.1.1 Vị trí phan loại

Giới: Động vat Animalia [3]

Nganh: Cé day séng Chordata

Phân ngành: Có xương sông Vertebrata hay có hộp sọ Craniota

Lớp: Tha, hữu nhũ Mammalia

Phân lớp: Thú nhau Placentalia Tổng bộ: Gam nhắm Glires

Chuột nhat tring, Mus musculus var albino Linnaeus, thuộc bộ gam nham, ho

Muridae, lan dau tiên được sử dung dé nghiên cứu hô hap vào thé ki XVIL Chiêu dài

cơ thé con trưởng thành (mũi đến gốc đuôi) 7,5 - 10 em, chiều đài đuôi 5 - 10 cm.Chuột có lông trắng ngắn, đuôi dai, tai dựng tròn, mắt lôi, mõm nhọn Chuột có tuôi

thọ 1 - 3 năm, trọng lượng con sơ sinh từ 1 - 2 g, con trưởng thành từ 20 - 30 g Thị

giác của chuột kém phát triên, thính giác và khứu giác rất nhạy bén, giúp chúng thoát

khỏi nguy hiểm, tìm kiểm thức ăn [4], [5]

Con đực và con cái khó phân biệt, con cái có khoảng cách giữa hậu môn và lỗ

sinh dục nhỏ hơn đáng kể Con cái có 5 đôi tuyến vú và núm vú Khi trưởng thành về

mặt tình dục (4 - 6 tuần tudi), khác biệt nỗi bật là sự hiện điện của tỉnh hoàn ở con

đực, chu kì sinh tinh trùng khoảng 35 ngày Tỉnh hoàn tương đối lớn so với cơ thé và

có thé được thu vào trong Chuột nhắt trắng thường bỏ, chạy bing bốn chân nhưng khi ăn, chiến đấu hoặc định hướng, chúng đứng bang hai chân sau Chuột chủ yếu

hoạt động vào lúc hoàng hôn hoặc về đêm, không thích đèn sáng Chúng sống, ân napgan nguồn thức ăn, làm tổ từ nhiều vật liệu mềm khác nhau Chuột có tính lãnh thécao, những con đực trưởng thành thường trở nên hung dữ khi nuôi chung lồng, trừ

khi chúng được nuôi cùng nhau từ khi mới sinh ra [5].

1.1.3 Đặc điểm hệ sinh sản chuột nhất trắng đực

Hệ sinh sản ở chuột nhất trắng đực gồm bộ phận chính: tỉnh hoàn, mào tỉnh, ống dan tinh, túi tinh, tuyến tiền liệt, niệu đạo và dương vật [6].

1.1.3.1 Tình hoàn

Tỉnh hoàn chuột là một hình trứng, mỗi tỉnh hoàn nặng khoảng 0,06 g và có

kích thước xap xi 0,66*0,39*0.45 cm Ở chuột, các cap tinh hoan nam trong biu, duocbao phủ bởi một bao xơ day đặc, màu trắng, một lớp trung mô kép và lớp tinh mac

cũng năm trên bề mặt bên trong của bìu Mỗi tỉnh hoàn còn được bao bọc bởi lớp mỡ mào tỉnh hoàn Đặc biệt, tỉnh hoàn ở chuột thông với khoang bụng thông qua các ông

bẹn, được mở trong suốt cuộc đời Các ống bẹn được bao phủ bởi lớp đệm mỡ mào

tinh hoàn khi tinh hoàn nằm trong bìu Chức nang chính của tinh hoàn là sản xuất va

giải phóng tính trùng [6].

Phan lớn mỗi tinh hoàn được cau tạo bởi các ông sinh tỉnh xoắn phức tạp và các

vách ngăn Lớp tinh mạc nối với vách ngăn giữa các ông phân chia tinh hoàn thành

các tiêu thủy Các ông sinh tinh kết ni theo trình tự, đến mạng tinh hoàn, tiểu quanroi dẫn đến mào tinh hoàn và ống dẫn tỉnh Ở chuột, lớp tinh mạc thường là nơi xuất

hiện các khối u trung biểu mô; đo đó, bề mặt của tinh hoàn, mao tính hoản và niêm

mạc biu cần được kiểm tra chặt chẽ Biểu mô của các ông sinh tinh bao gom cac té

bao Sertoli và các tinh nguyên bào được bao quanh bởi lớp mang day; lớp mang day

gồm một lớp biêu mô mỏng phủ trên các tế bao myoid của phúc mac, collagen va một lớp chất nên ngoại bào bên trong Nằm cạnh các ông sinh tinh là các tế bào Leydig

(té bảo kể), đây thân kinh và mạch máu Các tinh nguyên bào có chức năng tạo ra

giao tử đực (tỉnh trùng) Tế bảo Sertoli có tế bào chất tương đối ít và nhân thuôn dải, nằm xen kẽ các tinh nguyên bào có tác dụng nuôi đưỡng sự phát triển của tinh trùng.

Tỉnh tử được hình thành gắn vào màng tế bào Sertoli: mỗi tế bảo Sertoli có thê hỗ trợ

cho 50 tỉnh nguyên bào [6].

Mang tinh hoàn là cau trúc kết nỗi giãn ra của các ông sinh tỉnh xuất phát từ đỉnhmỗi tiêu thùy tỉnh hoàn; mạng nằm dưới lớp tinh mac, tại cực giữa của tỉnh hoàn; năm

ở ria tinh hoàn và tạo thành phần kết nối với các ông dẫn Động mach tinh hoàn được

cuộn lại va được bao quanh bởi đám rồi tinh mạch giúp trao đôi nhiệt Mạng tinh hoànđược lót bởi một biểu mô hình khối, det va nằm dưới lớp tinh mạc [6]

Tinh nguyên bảo là giai đoạn sớm nhất của quá trình trưởng thành của tinh nguyên bào, nam ở mang day của ông sinh tinh Trong quá trình sinh tinh, các tỉnh nguyên bào

di chuyển từ ngoại vi vào lòng ông khi chúng trải qua các giai đoạn trưởng thành có trật

tự và tuần tự cao từ tỉnh nguyên bảo phát triển thành tinh nguyên bao thứ cấp roi đến

tinh tử và cuối cùng biệt hoá thành tinh trùng nằm giữa lòng ống Sự trưởng thành cudi

cùng của tỉnh trùng diễn ra ở mảo tỉnh hoản Chu kì sinh tỉnh xảy ra trong 35 ngày, ở

chuột 52 ngày tuôi Các tế bào Leydig tông hợp và tiết ra testosterone dưới sự điều hoa

của hormone LH do tuyến yên tiết ra Tế bào Leydig có tế bao chất di đào, có các bạch

cau ái toan va nhân tròn [6].

1.1.3.2 Mao tinh

Mao tinh hoàn được hình thành do các ống tinh từ mang tinh uốn khúc chạy lên

và đồ chung vào một ông chung, thường có 3 - 5 ống dan và các ông dan nằm trong

lớp đệm mỡ mào tinh hoản Ông tinh của mào tinh được cấu tạo bởi một lớp biêu môđơn bao gồm các tế bào hình trụ cao có lông mao và các tế bảo ngắn, không có lônghút Lông mao đây tinh trùng vào mao tỉnh, các tế bao không liên kết được cho là táihap thu một số chất lỏng trong tinh hoản Mỗi ông dẫn được bao quanh bởi một dai

cơ trơn mỏng giúp day tinh trùng về phía mào tỉnh, Mao tinh nơi điễn ra giai đoạntrưởng thành cuối cùng và lưu trữ tinh trùng trưởng thành Các cặp mào tinh hoàn

giống nhau về cau trúc, bao gồm các đoạn: dau, thân và đuôi Các mào tinh hoàn có

thé được chia nhỏ hơn nữa dựa trên chức năng Nó nam ở mặt sau của tinh hoan, với

đầu ở cực trên và đuôi ở cực dưới Mao tinh hoàn của chuột dai hơn mào tỉnh hoàn của con người và gắn với tinh hoàn một cách lỏng lẻo, phần đầu của mao tinh hoàn

được bao bọc bởi lớp mỡ mao tinh hoàn Phan đâu được nỗi với các ông dan phụ:

đuôi, nơi chứa tinh trùng trưởng thành, được nỗi với ông dẫn tinh Mao tinh phát triểnthành ông sinh tinh và thường hình thành các khối u Các khối u phát triển khi tỉnh

trùng xâm nhập vào các mô kẽ và gây ra các phản ứng viêm Ngoài ra, sự tắc nghẽn lòng mạch của hệ thống ống tiết có thể dẫn đến vô sinh [6].

1.1.3.3 Ong dan tinh

Ong dẫn tinh được nói với mào tinh va dẫn tinh trùng từ đuôi mao tinh đến niệu đạo Nó là một phần của thừng tinh, cùng với các mach máu va day thần kinh liên quan Ở chuột, ông dẫn tinh dẫn từ đuôi của mao tỉnh vao ông tỉnh, ông nảy mở vào

niệu đạo ở mức độ của tinh hoàn Về mặt mô học, ống dẫn tinh được lót bởi biêu mô

trụ có lông mao được bao bọc bởi một lớp cơ trơn day bao gồm một lớp tròn day trung gian, các lớp bên trong và bên ngoài của cơ trơn định hướng theo chiều dọc.

Các lớp cơ trơn day nay dan và tong tinh trùng ra ngoài trong quá trình xuất tinh Ở

chuột già, có những tế bao có nhân đa bội lớn nằm trong biêu mô của ống dẫn tinh,mào tỉnh trở nên rất lớn và đôi khi có thể bị xoắn một bên hoặc hai bên với sự ảnh

hưởng của lưu lượng máu tĩnh mạch hoặc động mạch [6].

1.1.3.4 Các tuyến sinh duc phụTúi tinh là một trong những tuyến phụ sinh dục lớn, là nơi chứa tinh trùng và

tiết dich tạo ra tinh dịch Túi tinh năm hai bên, có rãnh ở mặt lưng đối với bàng quang.

Ở chuột mỗi tuyến dài tới 25 mm và cuộn tròn với các đầu nhọn phía trước Tuyếnđông máu, là tuyến tiền liệt phía trước ở chuột, được gắn hai bên với độ cong ít hơn

túi tinh Ở chuột, túi tinh được lót bởi cơ trơn và mô liên kết với một biểu mô trụ tạo

thành các nếp gấp niêm mạc phân nhánh đặc trưng Tế bảo biêu mô chứa các hạt tiết

dé thay với nhân đáy, lòng ống chứa các chất tiết đặc trưng Khi tuyến bị căng phòng

với chất tiết, các nếp gấp giãn ra va ngắn lại Túi tinh của chuột giả có thê giữ lại dịch tiết và to ra Chúng cũng có thé bị chặn và phinh ra khi chuột bị ung thư tuyến tiền

liệt, sự giãn nở nay có thé dẫn đến chướng bụng [6]

Trái ngược với con người, ở chuột có đương vật được bao bọc trong bao quy đầu, bằng xương nằm gan và kết thúc xa ở đầu quy dau là biểu hiện giao phôi niệu sinh dục đực, kéo dai xâp xi 1 mm ra ngoài niệu đạo, bao gôm mô sợi sụn Niệu đạo

được bao quanh bởi thê XÓP Lòng niệu đạo của chuột được lót bởi một lớp biéu mô

chuyên tiếp Lỗ niệu đạo bên ngoai đương vật được lót bởi biểu mô lát tang [6]

Ngoài ra còn có tuyến tiền liệt và tuyến Cowper hỗ trợ cho sự sản sinh tinh

trùng Các tuyến phụ có nhiệm vụ sản xuất các enzyme và các chất dinh dưỡng cho

tinh trùng: chất tiết của chúng góp phân hình thành tinh dich [6]

1.2 TÓNG QUAN VẺ CHÌ

1.2.1 Chì

Khai thác chì đã thực hiện hơn 6000 năm và là một trong những kim loại dau

tiên được phát hiện [7] Chì có kí hiệu hoá học Pb, là một kim loại mềm, dé uốn,không phân hủy, có màu xám xanh, số nguyên tử (Z) là 82, phân tử khối (M) là 207dvC, mật độ nguyên tử 11,34 g/cmẺ và nhiệt độ nóng chảy thấp 327°C [8] Kim loạichi va hợp chất của chi gần như không tan trong nước nhưng lại tan trong một số acidtrong điều kiện nhất định Chì được tìm thấy nhiều trong vỏ Trái dat, chủ yếu là chi

sunfua (quặng galena), quặng chỉ thường xuất hiện cùng với quặng đồng, kẽm, bạc, asen, antimon, đá núi lửa, đất ngâm, trầm tích, khó có thê tìm thay chì kim loại nguyên

chất Chì trong môi trường tồn tại dưới dạng ion kim loại tự do, liên kết với các phân

tử vô cơ (NO:?, HCOr, CO:?”, SO¿2”, Cr) hoặc phôi tử hữu cơ (acid amin, acid

fulvic, acid humic) Chì cũng có thé được hap phụ trên bề mặt của oxide sắt, đất sét,

dat nhiễm acid, đá vôi [9]

Trong nhiều thé ki, các tinh chất độc đáo của chi mang tính ứng dụng rất cao trong việc sản xuất Một lượng lớn chì kim loại và hợp kim chì được sử dụng trong

sản xuất pin, bọc cáp, hệ thông ông nước và đạn được Kim loại này rất hiệu quả nhưmột chat hap thụ âm thanh, rung động và như một lá chắn bức xạ tia X , lò phản ứng

hạt nhân Chi nitrate và chì acetate là các mudi hoà tan đóng vai trỏ là chất trung gian

và trong các ứng dụng đặc biệt Các muối chì như asen chì đã được sử dụng làm thuốc trừ sâu, chì cacbonat (PbCO;), chì sunfat (PbSO:), chì cromat (PbCrO.), chì tetraoxide (Pb.O,) và các hợp chat chì khác là chất tạo mau trong sơn Trong những năm gan đây, việc sử dụng chì đã được hạn chế để giảm các mỗi nguy hiểm cho sức khỏe [9].

Chì là kim loại độc thứ hai sau asen, gây hại nghiêm trọng đến sức khỏe Nong

độ chì tăng cao trong máu ảnh hưởng đến hành vi, hoạt động nhận thức, tăng trưởng làm chậm quá trình đậy thì, giảm khả năng nghe ở trẻ sơ sinh và trẻ em Ở người lớn,

chì gây ra các van dé về tim mạch, hệ thần kinh trung ương thận, kha nang sinh sản

Lí do chính dẫn đến sự tồn tại kéo dai của chì trong môi trường là đặc tính không

phân hủy sinh học, mặc đủ nó có thê tồn tại Ở nhiều dang hoá học khác nhau Vật chấthạt chứa chì luân chuyên liên tục giữa không khí, nước, đất bằng các quá trình hoá

học, vật lí, thời tiết, dòng chảy, lượng mưa, sự lắng đọng khô của bụi, Dưới hầu hết điều kiện môi trường, chì ton tại ở trạng thái oxi hoá Pb**, có thé được tao phire

bởi các phôi tử hữu cơ khác nhau trong môi trường Sự biến đôi của các hợp chat chi

tạo nhiều con đường gây ô nhiễm Qua đó, thực vật và động vật sẽ tích lũy nguồn chì độc hại vào các chuỗi thức ăn [8].

Chi nitrate (Pb(NOs)2) là dang chi vô cơ được sử dụng làm nguyên liệu màu sơn

chì, pháo hoa, giấy in nhiệt, thuốc diệt chuột, là chat xúc tác khó thay thế trong khai

thác, tinh chế khoáng sản vàng [10] Quá trình sản xuất, ứng dụng chi nitrate đều rat

độc hại cho con người và môi trường Vì vậy, chì nitrate được sử dụng trong thực nghiệm khảo sát tác dụng độc tính chì lên hệ sinh sản chuột.

1.2.2 Ô nhiễm chì

Ở quy mô toàn cầu, ô nhiễm chì là một mỗi đe dọa lớn đối với sức khỏe con người, đặc biệt là trẻ em do phơi nhiễm qua nhiều con đường Nông độ tự nhiên của chì ảnh hưởng tại các hoạt động núi lửa phun trào, hoa hoạn va các quá trình xói mon nhưng không có tác động lớn Công nghiệp hoá, đô thị hoá, công nghệ phát triển, gia

tăng sử dụng nhiên liệu hoá thạch phân bón hoá học sử dụng thuốc trừ sâu, khai thác

quản lí chất thải không phù hợp là nguyên chính của lượng chì độc hại cao trong môi

trường Nhiễm độc chi là một mối đe dọa lớn đối với sức khỏe cộng đồng ở các nước

phát triển và đang phát triển Theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO), chi là một trong

mười kim loại độc hại, ước tính đã gây ra 0,9 triệu ca tử vong va 21,7 triệu ca khuyếttat, chiém 30% toan cau trong năm 2019 [9]

Ti lệ hap thụ chì vào cơ thé rất cao, từ 20 - 70% và cao hơn đối với trẻ em [11] Không có giá trị ngưỡng cho nông độ chi có trong máu được coi là an toàn Mức

độ tiếp xúc chì thấp nhưng vẫn có khả năng gây đị tật vĩnh viễn cho bệnh nhân Chìđược hap thụ nhanh chóng trong máu và có tác động xấu đến một số hệ cơ quan như

hệ thần kinh trung ương, hệ tim mạch, thận, hệ sinh sản và hệ thống miễn dịch, nhiều

nghiên cứu chứng minh tiếp xúc nhiều với chi nồng độ cao có thể gây ung thư Hau

hết quy định đã đặt ra giới hạn cho lượng chỉ téi đa tiếp xúc hàng ngày là 1.0 ug/g,

tuy nhiên việc hấp thụ kéo dài ngay cả mức chì thấp cũng gây nguy hiểm cho con người [12] Khả năng 6 nhiễm chi cao có thé xảy ra trong các ngành công nghiệp và

nơi làm việc như: công nghiệp luyện kim, tỉnh chế chì, nhà máy sản xuất pin, hoạt

động hàn hoặc cắt thép, xây dựng, công nghiệp son, in an, nhà máy cơ khí, Những

trường hợp tiếp xúc chỉ tại nơi làm việc thường mang bụi chỉ vào khu vực sinh sông,

tăng khả năng phơi nhiễm cho vùng Ở các quốc gia nơi xăng pha chi vẫn được sử

dụng lượng khí thải nhiễm chi tit các phương tiện giao thông rat khỏ kiểm soát Bên

cạnh việc tiếp xúc với môi trường, chì có thê phát sinh từ các nguồn như thực phẩm

hoặc đồ uống được lưu trừ, nấu chín hoặc phục vụ trong các thùng chứa chì, thực

pham phát triển trên đất bị ô nhiễm và các phương thuốc truyền thống, mỹ phẩm.

thuốc lá và các sản phẩm chứa chì khác [8]

Những nỗ lực nhằm giảm nông độ chi trong môi trường, chủ yếu thông qua việc

giảm sử dụng xăng pha chì, xử lí nguồn chất thải tại các nhà máy, kiểm soát bụi bản,

vệ sinh khu vực sông vả nâng cao hiểu biết của dan số Bat chap su ton tai của chitrong môi trường, sự tiếp xúc của con người đã giảm đáng ké ở các quốc gia nơi các

biện pháp kiểm soát đã được thực hiện trong 10 - 30 năm qua [11].

1.2.3 Độc tính của chì

Độc tính của chì đã là một chủ đề được các nhà khoa học môi trường quan tâm

do tác dụng độc hai của nó đối với thực vat, động vật và con người Chi chủ yêu được

hap thụ qua phổi và đường tiêu hoá Trẻ em thường hap thụ khoảng 40 - 50% lượng

chì có trong thức ăn, trong khi người lớn chỉ hấp thụ khoảng 10 - 15% [13] Một khi

chì được hap thụ chúng sẽ liên kết với các tế bao hồng cau và phân phối thông qua chủ yếu ở xương, các mô mém (gan, thận, tủy xương, não) Ở người lớn, khoảng 85

- 95% lượng chì trong cơ thé được lưu trữ trong khoang xương và khoảng 70% ở trẻ

em Vi thế, trẻ em có nguy cơ biéu hiện các triệu chứng bệnh nhiễm độc chi vì lượng

chi trong các mô mềm cao hơn Một phan chì không được hap thụ sẽ được bai tiếtqua nước tiêu [14] Do sự tương đồng với các cation hoá trị hai khác như canxi và kẽm.chì có thể can thiệp vào cơ chế tế bào được điều hoà, trở thành chất chuyền hoá trunggian Sự phô biến của các nhóm cho electron, các cation hoá trị hai trên khắp cơ thê

con người, sinh lí bệnh học của độc tính chì khá phức tap va liên quan đến hau hết mọi

hệ thống cơ quan [15].

Tại hệ thông thần kinh, chì làm Suy yêu, mat tính hiệu tại các thụ thé Synape ở

não trẻ, là cơ sở cho những thay đối về nhận thức và hành vi [16] Bệnh lí thần kinhngoại biên là biêu hiện phô biến của độc tính chì mãn tính ở người lớn nhưng cơ chế

hoạt động chưa được tìm hiểu rõ [17].

Tại hệ tuân hoàn, chì can thiệp vào chức năng của một số enzyme liên quan đến

tông hợp heme, các enzyme liên quan đến việc duy trì tính thắm, tính toàn vẹn màng

tế bào hỏng cau, dan đến giảm năng xuất trao đôi chat, tăng sự phá hay hồng cau [13],

[15] Chì lưu thông trong cơ thé liên kết với các tế bào hong câu, một phần nhỏ có

trong huyết tương Tuy nhiên, nếu mức độ chi trong máu vượt quá 2,9 pmol/L, liênkết hỏng cau sẽ trở nên bão hoa, chì trong huyết tương bắt đầu tăng lên, tiến đến các

cơ quan khác trong cơ thể Chì cũng được biết là có liên quan đến tăng huyết áp và các bệnh lí tim mạch [9], [1Š].

Tại thận, chì gây roi loan qua trinh tai hap thu tai ống lượn gần của thận đến hội,giảm lượng acid uric bai tiết trong ông xa, dan đến nông độ ure trong máu cao hon,hình thành tỉnh thê ure trong khớp gây ra bệnh gout Chì cũng có vô số tác dụng đối

với hệ thông nội tiết, bao gồm suy giảm chức năng tuyến giáp, tăng trưởng và pháttriên xương, sinh san [15].

Một trong những biểu hiện sớm nhất của nhiễm độc chì ở người lớn là “dau

bụng do chì”, đây là một hội chứng đặc trưng bởi sự kết hợp của đau bụng, táo bón,chuột rút, buồn nôn, nôn, chan an va giảm cân Đặc biệt đối với trẻ em sẽ có những

triệu chứng nghiêm trọng hơn như rồi loạn giấc ngủ, mệt mỏi, ít nói, khó tập trung,

học kém Khi liều lượng và thời gian tiếp xúc tăng lên trẻ em phát trién các dau

không rõ rang, táo bón đau bung, chán ăn Người lớn cũng biểu hiện các dau hiệu.triệu chứng tương tự, nhưng thời gian phơi nhiễm có khả năng lâu hơn sẽ gặp van dé

về huyết ap, bệnh tim mạch va ảnh hưởng xấu đến khả năng sinh sản [9] Nhiễm độc

chi cap tính, ở trẻ em có hành vi bat thường, thoái triển, nôn mira, co giật, trường hợpnặng gây phù não, dan đến tăng áp lực nội sọ, hôn mê vả tử vong O nông độ chi

tương tự, các biêu hiện trên cũng được phát hiện ở người lớn Các tôn thương do độc

tính chi gần như không thé chữa khỏi Nhiều nghiên cứu hiện nay cho thay nhiễm độc chì có tiềm nang ung thư thận, tủy xương [16], [17].

1.2.4 Ảnh hưởng chì lên hệ sinh dục đực

Tiếp xúc với chì có liên quan đến một số rồi loạn chức năng sinh sản ở nam giới

như giảm ham muốn tình dục, suy giảm khả năng sinh tỉnh và tôn thương nhiễm sắc thê, Tuy nhiên, các nghiên cứu về mối quan hệ giữa phơi nhiễm chi vả tôn thương

sinh sản nam giới đã cho thấy kết quả không nhất quán Nguy cơ thường được cho làtương quan trực tiếp của nồng độ va thời gian phơi nhiễm ngày cảng tăng Các cơ chế

độc tính chì lên hệ sinh sản nam vẫn chưa được làm sáng tỏ hoàn toàn Hoạt động của

một số enzyme như: phosphatase, natri kali ATPase đã được chứng minh giảm trong

cơ quan sinh sản của chuột tiếp xúc với chì Một van đề khác về độc của chì liên quan

đến việc tạo ra quá nhiều gốc tự do (ROS) Gốc tự do ức chế sản xuất chất chống oxi

hoá sulfhydryl, gây mất cấu trúc acid nucleic, bat đầu quá trình peroxide hoá lipidtrong màng tế bào Chì gây ra stress oxi hoá và thúc đây việc tạo ra hydro peroxide

xúc lâu dai với chi, hoạt động của superoxide dismutase đã được quan sát, điều này

cho thay một cơ chế thích ứng chồng lại lượng sản xuất gốc tự do tăng lên do chì gây

ra Tuy nhiên, từ liêu thấp đến liều cao, có những phan ứng khác nhau của stress oxi

hoá do chì gây ra ở các vị trí khác nhau bao gồm cả tỉnh trùng Các nghiên cứu trên

chuột tiếp xúc với chi đã chứng minh rằng chi ảnh hưởng đến chức năng tinh tring,làm giảm nồng độ testosterone trong huyết thanh Gốc tự do là một cơ chế phân tửquan trọng đôi với các rồi loạn sinh sản nam giới trong giai đoạn nội tiết tố hoặc trong

quá trình sinh tinh [18].

Các nguyên nhân thường gặp nhất của vô sinh nam có liên quan đến sự sinh tỉnh

trùng Phân tích tinh dịch (số lượng tinh trùng, khói lượng tinh dịch, hình thái tinh trùng và đánh giá các thông số chức năng) la một trong những xét nghiệm đầu tiên trong phỏng thí nghiệm Ở nam giới, khi tiếp xúc với chi thường xuyên đã làm cho

nhiều thông số tinh trùng bj ảnh hưởng khi nồng độ chì trong huyết tương tinh dịch

hoặc chỉ trong máu tăng lên, thường la ở mức >40 Hg/dL, nhưng đôi khi ngay cả ở

mức <10 ug/dL Ti lệ cao các tinh trùng chưa trưởng thành, tinh trùng rộng, tròn và

ngắn ở những người lao động tiếp xúc với chi đã được báo cáo ở cả mức chì trong

máu cao (40 uig/dL) và thấp (<15 ug/dL) Nhiều nghiên cứu cho thấy, các van dé về

sinh tinh do chi gây ra, mặc dù, một số nhà nghiên cứu đã không chứng minh được

mỗi tương quan giữa lượng chì và tỉnh địch hoặc sự bất thường về số lượng và hình thái tinh trùng Những thay đôi trong các cơ quan sinh đục phụ như giảm trọng lượng

tinh hoàn túi tinh, mào tinh và tuyến tiên liệt đã được chứng minh trong các nghiêncứu khác nhau Những thay đổi đã được gây ra bởi sự gia tăng nông độ chi tiếp xúcvới chi bao gém những thay đôi về hình thái mô tỉnh hoàn va giảm số lượng tinh

nguyên bao [18].

Quá trình thụ tinh không chi phụ thuộc vào số lượng va hình thái tinh trùng mà

còn liên quan đến các thông số chức năng Khi nồng độ chi trong máu <10 ug/dL, chì

đã được chứng minh làm giảm kha năng vận động, kha năng sống sót của tinh trùng,

có thé phát hiện được khi kiểm tra chất lượng mau, tinh dịch, tinh trùng ở người lao

động, giảm chức năng của tỉnh trùng ở những người đàn ông có nông độ chì trong

máu trung bình là 45 ug/dL Mặt khác, những cải thiện đáng kẻ về số lượng tinh trùng

đã được báo cáo sau khi chì máu trung bình giảm từ 42 uug/dL xuống 20 ug/dL trong

số các công nhân nhà máy Nhiều nghiên cứu đã chứng minh, sự tương tác của tỉnh trùng với tê bào trứng, mat acrosome ảnh hưởng cực mạnh mé bởi nông độ chì trong

huyết tương tinh dich, gây giảm tỉ lệ thụ tinh nhân tạo ở người [18]

Hormone sinh sản đóng một vai trỏ quan trọng và phức tạp trong việc điều hoà

sự sinh tinh, phát trién tinh trùng Testosterone là hormone nam, được hình thành va tiết ra bởi các tế bào Leydig trong tinh hoàn dé đáp ứng với sự kích thích của LH.

Nông độ chi trong tinh dich ở mức trung bình 2 ug/dL đã được báo cáo là có liên

quan dén sự giảm testosterone huyết thanh ở những người đàn ông Ue chế nồng độ testosterone tỉnh hoàn va tăng nồng độ globulin liên kết với Steroid khi tăng thời gian

tiếp xúc với chì cũng đã được chứng minh ở những con chuột tiếp xúc với chì trong

30 ngày Sự ức chế nồng độ testosterone trong các tế bào mào tinh và tăng nồng độprotein liên kết androgen của chuột cũng đã được ghi nhận Tuy nhiên, có một số báo

cáo mô tả nồng độ testosterone trong huyết thanh tăng lên trong những người đàn ông

tiếp xúc với chì từ mức chì thấp (5 ug/dL) đến tương đối cao (>40 wg/ dL) Các cơ

chế phân tử làm cơ sở cho việc kiểm tra mô bệnh đã cho thấy sự thoái hoá, rối loạn

trong các tế bảo Leydig ở chuột, do đó cho thay các tế bào Leydig ảnh hưởng rất lớn

với độc t6 chì Mặt khác, do sự mat cân bang trong trục nội tiết t6 gây ra bởi tiếp xúc với chi, các tế bào tuyến yên giải phóng mức độ LH không phù hợp và thay đối sự ức

chế ngược của Steroid Nông độ tăng của các hormone sinh sản khác như FSH tiết ra

từ tuyến yên, quan sát thấy sau khi tiếp xúc với chì ở nam giới Những khác biệt vềmức độ bải tiết FSH có thê liên quan đến các mức chỉ khác nhau, thời gian phơi nhiễm

giữa các đối tượng [18].

1.3 TONG QUAN VE SƠ RI

1.3.1 Sơ lược về Sơ ri và tác dung trong đời sống

Sơ ri (Malpighia emarginata DC) thuộc họ Malpighiaceae, chỉ Malpighia, có

nguồn gốc ở Yucatan (Đông Nam Mexico), đã được trồng ở nhiều nơi như: Nam Peru,

Đông Nam Brazil, các Bang Texas và Florida (Hoa Kỳ), Quần đảo Canary, Ghana,

Ethiopia, Madagascar, Zanzibar, Sri Lanka, Taiwan, India, Indonesia, Hawaii,

Australia, Việt Nam, Tai Việt Nam, cây Sơ ri được trồng nhiều nhất ở khu vực Gò

Công vả một số xã thuộc tỉnh Bến Tre Đây là một loại cây bụi lớn, rậm rạp có thẻ đạtchiều cao trung bình từ 2.5 - 3.0 m, đường kính từ 2 - 4 m; các cành ngắn, manh, dài

từ 0,5 - | m Cành moc xòe tạo thành tan dày đặc, vo cây hơi xù xi mau nâu xám Lá

thường có mau xanh đậm khi trưởng thành và có kích thước nhỏ, không lông, bóng, dai từ 2 - 7 cm Hoa mọc thành từng các cụm với 3 - 5 hoa có đường kính từ 2,8 - 2,5

em, với 5 cánh hoa mau hồng hay đỏ Sơ ri là một loại cây cứng cáp có khả năng phát

triển ở cả khí hậu nhiệt đới và cận nhiệt đới Nhiệt độ thích hợp cho sự phát trién là

khoảng 26°C, lượng mưa từ 1200 - 1600 mm mỗi năm [19], [20].

Qua Sơ ri thu hoạch trong mùa khô thường có hàm lượng vitamin C cao hơn

mùa mưa Màu vỏ của quả non thường có màu xanh lục hoặc xanh trăng: khi chín,

màu sắc của vỏ chuyên sang màu đỏ vàng, đỏ cam đến đỏ tươi Quả mong nước và

có hàm lượng vitamin C cao làm cho quả có vị chua Quả Sơ ri có thê được ăn trực tiếp hoặc cũng có thé được sử dung kết hợp với nhiều loại trái cây khác, thường được lam nước ép, mứt, keo, Nước ép quả Sơ ri cũng được dùng phối trộn với nước ép của các loại quả khác nhằm tang hàm lượng vitamin C [20] [21].

Quả Sơ ri được tiêu thụ trên toàn thé giới, chủ yếu là do những lợi ích về sức

khỏe có liên quan đến các hợp chất chéng oxi hoá cao Các đặc tính chéng oxi hoá

và chỗng viêm của quả Sơ ri đã được rất nhiều nghiên cứu chứng minh có khả năng

chống viêm kháng khuan, hạ huyết áp va chồng ung thư, lam giảm tôn thương do

quá trình stress oxi hoá, làm giảm nguy cơ mắc một số bệnh mãn tính như: tiêu đường,

tăng huyết áp và loãng xương Sử dụng nước ép Sơ ri như một chất bô sung thực

phẩm có thé làm giảm stress oxi hoá và bảo vệ hoặc sửa chữa các tôn thương đổi với

DNA ở người béo phi [22], [23] Nước ép quả Sơ ri còn giúp dé ngăn ngừa sắc tố đa,làm trắng da, ngăn ngừa và điều trị các bệnh nhiễm trùng da Ngoài ra, chiết xuất Sơ

ri, có thé ngăn chặn quá trình oxi hoá lipoprotein mật độ thấp, do đó làm giảm một

yếu tô nguy cơ quan trọng trong bệnh tim mạch vành Một so sánh khá thú vị là chi

can một giọt nước ép của quả Sơ ri là có lượng vitamin C bằng với lượng vitamin C

của quả cam, trong khi đó vitamin C tự nhiên trong trái cây được cho là tốt hơn nhiều

so với vitamin € tong hợp [20] [21].

1.3.2 Thành phan của dịch ép qua Sơ rỉ

Thanh phan hoá học của quả Sơ ri chịu ảnh hưởng bởi kiểu gene, môi trường va

độ chín Trong 100 g quả Sơ ri, có chứa 332 kcal calo, ham lượng nước chiếm ti lệ

lớn khoảng 92 95%, ham lượng carbohydrate chiếm 0,43%, lipid chiếm 0,23

-0,80% và protein chiếm 0.21 - 1.20% Các loại đường chính là fructose glucose và

sucrose [19].

Ham lượng vitamin C trong quả Sơ ri có thé thay đôi tùy theo chủ yếu vào giaiđoạn chín, dao động từ 862,86 - 1465,22 mg/100 g thịt quả và có thé lên đến 3756,06

mg/100 g đối với qua trong quả chưa trưởng thành (xanh) Hàm lượng lượng vitamin

C giảm trong quá trình chín chủ yếu do quá trình oxi hoá sinh hoá bên trong quả Ngoài

ra trong qua Sơ ri còn chứa nhiều loại vitamin như như B1, B2, B3, BS, B6, provitamin

A và các khoáng chất như canxi, sắt, kali, magie, photpho [ 19]

Ngoài ra quả Sơ ri còn chứa các loại chất khác như: phenol, carotenoid,

anthocyanin (bao gồm cyanidin 30-œ-shamnoside và pelargonidin-3-œ-thamnoside,

malvidin-3,5-diglucoside), phytochemical, nhiều loại acid hữu cơ (acid mallic, acid citric và acid tartaric), dẫn xuất của acid benzoic (acid gallic và acid syringic),

phenylpropanoid (acid caffeic, ferulic acid, ), flavonoid và nhiều loại acid amin

(asparagin, alanin, proline, acid aspartic, serine và acid y-aminobutyric) [21] Trong đó nôi bật là hàm lượng polyphenol từ 1561,67 - 2631,34 mg/100 g thịt qua, tương tụ như

vitamin C, polyphenol là chất chống oxi hoá quan trọng đối với con người [19] Dù

dịch ép quả Sơ ri có nhiều tác dụng tích cực đối với sức khỏe con người và có the ứng

dụng trong lĩnh vực y học nhưng vẫn chưa được nghiên cứu nhiều và rộng rãi

1.3.3 Sơ lược về vitamin C (ascorbic acid)

Vitamin € (L-Ascorbic acid) là một acid sáu cacbon không ôn định, dé bị oxi

hoá vả có thê bị phân hủy bởi oxi, kiềm và nhiệt độ cao tan tốt trong nước Nó được

phân lập lần đầu tiên vào năm 1928, bởi nhà hoá sinh người Hungary va người đoạt

giải Nobel Szent-GyorGyi [24] Con người không thê tự tông hop vitamin C do không

có enzyme gulonolactone oxidase, chất này cần thiết để tông hợp tiền chat tức thờicủa acid ascorbic 2-keto-I-gulonolactone Con người có thé bỏ sung vitamin C thông

qua các loại trái cây và rau củ, nguôn trái cây phong phú bao gồm: Cam Bưởi Kiwi Xoài, Du đủ, Dâu tây, Quýt, Dua hấu, Táo, Nho, Cà chua, ; các loại rau củ giàu

vitamin C bao gồm mang tây, bông cải xanh, bắp cai, súp lơ trắng, cải xoăn, cải xanh,

khoai tây, Cá va sữa cũng chứa một lượng nhỏ vitamin C, Lượng vitamin C giám

dần khi thực phẩm giả đi Các khuyến nghị mới nhất về vitamin C, theo Viện Han

lâm Khoa học Quốc gia, là 75 mg/ngày đối với nữ giới và 90 mg/ngày đối với nam

giới, những người hút thuốc có thé cần bé sung thêm 35 mg, lượng dung nap hangngày tôi đa là 2000 mg [25], [26]

Vitamin C là một chất cho điện tử và đặc tính nảy quyết định hau hết các chức năng của nó Vì là một chất cho điện tử, nên vitamin C có khả nang chất chống oxi

hoá mạnh mẽ do trung hoà các gốc tự do [21] Do tính chất tan trong nước nên vitamin

C có thé hoạt động cả bên trong và bên ngoài tế bao dé dap tất các gốc tự do, bảo vệ

DNA của tế bào khỏi bị hư hại gây ra bởi các gốc tự đo và các chất gây đột biến; bảo

vệ tinh trùng khỏi bị oxi hoá [27], [28].

Vitamin € có thê làm tăng oxide nitric nội mô giúp chống oxi hoá, có tác dụng

có lợi đối với chức năng nội mô mạch máu ở những người khỏe mạnh và ở những

bệnh nhân mắc bệnh tim mach Nông độ vitamin C trong huyết tương thấp có liên

quan đến tăng huyết áp và suy giám chức năng nội mô [21] Bỗ sung vitamin C cótác dụng hạ huyết áp đặc biệt là huyết áp tâm thu, nồng độ vitamin C trong huyếttương thấp có liên quan đến đột quy và tăng nguy cơ tử vong [22] Vitamin C có thểdap tắt các chất chuyên hoá oxi phản ứng trong dạ dày hoặc tá trảng và ngăn chặn sựhình thành các hợp chat N-nitroso gây đột biến, từ đó giảm nguy cơ phát triển nhiều

loại ung thư như: ung thư vú, cỗ tử cung, ruột kết, trực trang, thực quản, thanh quản,

phôi, miệng, tuyến tiền liệt va da day [27] [29]

Liều lượng lớn vitamin C được sử dụng trong điều trị và phòng ngừa một số

lượng lớn các bệnh roi loạn như tiểu đường, đục thủy tinh thé, đột tăng quy, nhăn

bệnh áp, tim thoái và ung hoá, thư, xơ vữa động mạch Thiếu vitamin C có thé dẫn

đến thiểu máu, bệnh cỏi, nhiễm trùng, chảy máu nướu răng, thoái hoá cơ, vết thương

kém lành, mảng xơ vữa động mạch, xuất huyết mao mạch và rối loạn thần kinh Nhiễm trùng làm cạn kiệt nguồn dự trữ vitamin C của cơ thẻ, đo đó làm cho hệ thông

miễn dịch của cơ thê yêu đi Vitamin C còn giúp nâng cao sức dé kháng của cơ thê

cac loai bénh, bao gồm cả các bệnh nhiễm trùng và các bệnh truyền nhiém, ví dụ như

viêm gan, HIV, cảm lạnh, cảm cúm, Nó tăng cường và bảo vệ hệ thông miễn dịch

bang cách kích thích hoạt động của các kháng thé và hệ thong miễn dịch [24] Vitamin

C có liên quan đến việc tăng khả năng miễn dịch, chuyển hoá thuốc và bài tiết

hydroxiproline trong nước tiểu, tái tạo mô, đông thời tăng tuôi thọ Loại vitamin nàycũng giúp gan giải độc các chất độc hại trong hệ thống và máu trong việc chống lại

nhiễm trùng Acid ascorbic rất quan trọng trong chức năng thích hợp của hệ thống

miễn dịch Là một chất chống oxi hoá, nó phản ứng với các hợp chất như histamine

và peroxide để giảm các triệu chứng viêm [30].

Cơ thé cần vitamin C cho các chức nang sinh lí bình thường Vitamin C giúp hình thành chat dẫn truyền thần kinh; giúp cơ thẻ hap thy sắt lưu thông tự do trong

huyết tương, bach cầu và hồng cầu và dé phá vỡ histamine (một chat gây viêm tế bao

máu và di vào tất cả các mô phan ứng dị ứng); giúp chuyên hoá tyrosine, acid folic

va tryptophan; làm giảm cholesterol trong máu và góp phan tổng hợp các acid amin

carnitine và catecholamine điều chỉnh hệ than kinh Vitamin C rat quan trọng đỗi với

sự hình thành collagen, giúp vết thương mau lành và duy trì sự phát triển của mô Làmột chat chống oxi hoa, nó bảo vệ cơ thé khỏi tác hại của các gốc tự do và chat ô

nhiễm, đặc biệt là kim loại nặng [24].

1.4 TÌNH HÌNH CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THÊ GIỚI VÀ

Ở VIỆT NAM

1.4.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới

Wang và cộng sự (2006) đã thực hiện nghiên cứu nhằm khám phá cơ chế và kiểm tra tác động của việc sử dụng kết hợp acid ascorbic (140, 420, 1260 mg/kg thé trọng) va thiamine (10, 30, 90 mg/kg thé trọng) đối với quá trình sinh tinh trong tinh

hoàn của những con chuột tiếp xúc với chi acetate (0,2%) Kết qua nghiên cứu cho

thay, sau 42 ngày, chi acetate làm các biểu hiện TGFBI vả caspase-3, apoptosis (AI)

- sự chết theo chương trình của tế bào và ton thương DNA déu tăng lên Việc sử dụng kết hợp với acid ascorbic và thiamine liêu thấp và liều trung bình cho thấy tỉ lệ tn

thương DNA va số lượng tế bào chết đi ở chuột bị viêm tinh hoàn thấp hon, đồng thời

các mô bị tôn thương cũng có sự cải thiện Tuy nhiên, việc bô sung đông thời acidascorbic va thiamine ở liều cao lại thúc day AI của tế bào tinh hoàn thông qua việc

giảm biêu hiện TGFBI và caspase-3 [31].

El-Neweshy và cộng sự (201 1) đã tiền hành nghiên cứu nhằm đánh giá hiệu qua

của vitamin C (20 mg/kg thé trọng) trong việc cải thiện tác động có hại của nhiễm

độc chi acetate (20 mg/kg thé trọng) lâu dài đối với gan, thận, não Sau 60 ngày, chi

acetate đã làm tế bao gan, thận thoái hoá và viêm tế bào cửa, hình thành các tế bao karyomegalic chứa các hạt trong biêu mô ống lượn gần gây phù tiêu não, tụ cầu não

và nhuyễn não, các mô tinh hoàn ngừng sinh tinh và phù né các kẽ Vitamin C đã cải

thiện và giảm thiểu các tác động độc hại của chì [32].

Pandya và cộng sự (2012) đã thực hiện nghiên cứu nhằm khảo sát ảnh hưởng

của việc tiếp xúc với chi và cadmium đối với chuyên hoá Steroid tinh hoàn và hệ

thống chống oxi hoá của chuột, tất cả đều sử dụng với liều 0,025 mg/kg thểtrong/ngay, trong vòng 15 ngày Kết quả cho thấy, việc tiếp xúc với chì và cadmium

xÚc gây ra sự gia tăng các gốc tự do và giảm hoạt động của các enzyme chống oxi

hoá ở tinh hoàn, dẫn đến việc sản xuất testosterone bị thay đỗi, số lượng tinh trùng ởtỉnh hoàn và mào tinh giảm đáng kẻ, khối lượng tỉnh hoàn và mào tỉnh hoàn cũng như

khả năng di động và sống của tính trùng cũng giảm đáng kẻ Các thí nghiệm in vitre

cho thay, vitamin C có thé giảm độc tính của các gốc tự do gây ra bởi chi và cadmium,cải thiện tình trạng nhiễm độc của tinh hoàn liên quan đến stress oxi hoá, phục hôicác hoạt động của enzyme chuyên hoá Steroid [33]

Ayinde va cộng sự (2012) đã thực hiện một nghiên cứu nhằm khảo sát tác độngcủa vitamin C (40 mg/kg thé trọng) và vitamin E (150 mg/kg thé trọng) đối với chức

năng sinh sản của chuột đực khi tiếp xúc với chỉ acetate (60 mg/kg thẻ trọng) trong vòng 6 tuần Kết quả cho thấy, có sự gia tăng đáng kẻ trong các chỉ số stress oxi hoá

và hàm lượng chì trong tỉnh hoàn và sự suy giảm đáng kẻ kẽm trong tỉnh hoàn của

chuột tiếp xúc với chì Chuột uống chì có sự gia tăng đáng kể về nồng độ androgen, ham lượng hormone FSH va testosterone trong huyết thanh Về mô tinh hoàn, chì gây

thoái hoá của biêu mô ông dẫn kèm theo đó là sự giảm đáng kê số lượng tinh trùng

Sự suy giảm về số lượng và chất lượng tinh dịch cũng như khả năng di động, hìnhthái và số lượng của tinh trùng Tuy nhiên, vitamin C và vitamin E đã làm giảm tácđộng độc hại của chì đối với hệ sinh sản [34]

Ebuehi và cộng sự (2012) đã thực hiện nghiên cứu nhằm khảo sát ảnh hưởng của

việc uống vitamin C (40 mg/kg thê trong) và vitamin E (150 mg/kg thé trọng) đối với

nhiễm độc gan và stress oxi hoá do chỉ acetate (60 mg/kg thể trọng) ở não chuột cách

ngày; nhóm 4 được uống 2 mL chi acetate (60 mg/kg thẻ trọng), thí nghiệm kéo dai trong 7 tuân Kết quả cho thay, chi làm tăng đáng ké lượng chi trong mau, hoạt động apartate transaminase, alanine aminotransferase và alkaline phosphatase tăng lên đáng

kể trong huyết thanh, mức oxide nitric va malondialdehyde tăng lên đáng ké trong não

của chuột, trong khi mức glutathione, superoxide dismutase và hoạt động catalase

(CAT) giảm đáng kẻ trong não của chuột uống chì Nghiên cứu cũng chỉ ra rang, vitamin C và vitamin E làm giảm đáng ké nông độ chi trong máu, cải thiện tổn thương gan và giảm đáng kẻ stress oxi hoá trong não của chuột [35].

Singh và cộng sự (2016) đã thực hiện nghiên cứu nhằm khảo sát vai trỏ bảo vệ

của vitamin C (200 mg/kg thé trọng) đối với hình thái và sinh hoá của tỉnh trùng ởchuột nhiễm chi nitrate (40 và 80 mg/kg thé trọng) Sau 2 tháng, kết quả cho thay, chì

làm tăng đáng kẻ số lượng tỉnh trùng bất thường òđầu đôi, đầu chuối, đầu vô định

hình, khuyết đầu, cụt đầu, cong cô, cong đuôi, đuôi kép, khuyết đuôi và đuôi vòng)

Tuy nhiên, vitamin € có thé làm giảm tác động độc hại của chi, cải thiện từ đó giảm bớt tôn thương do chi gây ra [36].

Autifi và cộng sự (2018) đã thực hiện nghiên cứu nhằm phát hiện tác dụng chống

lại độc tính gây ra bởi chi acetate của vitamin C, giúp bảo vệ trong gan và lá lách của

chuột Sau 28 ngảy tiền hành thu mẫu và phân tích kết quả của nghiên cứu cho thay

việc sử dụng chi acetate (10,8 mg/kg thé trọng) gây ra những thay đôi mô học ở gan và

lá lách của chuột bạch tạng trưởng thảnh Ia do stress oxi hoá Vitamin C (27 mg/kg thé

trọng) có thé cải thiện những thay đổi này ở gan và lá lách, ngăn ngừa độc tinh chi

acetate trên gan và lá lách, điều nay có thé là do đặc tính chống oxi hoá và loại bỏ các

gốc tự do của vitamin € [37]

Hamad (2020) đã tiễn hành nghiên cứu dé điều tra tác động của vitamin € (100mg/kg thể trọng) chống lại độc tính của chi acetate đôi với số lượng, bình thái tỉnh

trùng và mô tinh hoàn Sau 6 tuần, kết quả cho thay, chi acetate (30 mg/kg thê trọng)

làm giảm số lượng tinh trùng, gia tăng đáng kể các bất thường ve tinh trùng va tôn

thương mô tinh hoan Vitamin C có tác dụng chống lại độc tính của chi, bảo vệ tinh

tring và mô tỉnh hoàn trước các tác động độc hại gây ra bởi chì [38].

Raeeszadeh và cộng sự (2021) đã thực hiện nghiên cứu nhằm đánh giá anh

hưởng của nano-vitamin C (NVC) (200 mg/kg thé trọng) đối với độc tính của chì

acetate (500 ppm) và natri asenate (SO ppm) gây ra trên hệ sinh san ở chuột đực Sau

30 ngày thực hiện kết quả nghiên cứu cho thay, chi acetate và natri asenat làm mức

độ FSH, LH va testosterone và các thông số tinh trùng (số lượng, tỉ lệ sống, tỉ lệ diđộng), SỐ lượng tế bảo Leydig vả tế bảo sertoli giảm đáng kế: mức độ protein

carbonyl, malondialdehyde (MDA) và sự phân mảnh DNA tăng lên đánh kế Đánh

giá mô học cho thay, trong lượng tinh hoàn, độ day đường kính ống sinh tinh giảm rõ

rệt, trong khi tỉ lệ ống không bao tăng đáng kể Hoạt động của glutathione peroxidase

(GPx), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) trong xử lí viêm tinh hoàn giảm.

Tuy nhiên, NVC bang cách ức chế tôn thương oxi hoá va cải thiện thiệt hai do chì và

asen gây ra đối với hệ sinh sản, giúp tăng nông độ LH, FSH và testosterone và cải

thiện các thông số của tỉnh trùng vả qua trình sinh tinh [39]

Qua các công trình đã công bố cho thấy tác dụng kháng độc tính chì của vitamin

C Tuy nhiên, hau hết các nghiên cứu trên đều sử dụng vitamin C thương mại Với

kỳ vọng đưa vitamin C có nguôn gốc tự nhiên vào sử dụng rộng rãi, nên dé tai hướng

tới việc sử dung vitamin C từ quả Sơ ri đẻ thực hiện khảo sát.

1.4.2 Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam

Nguyễn Thị Thương Huyền (2019) đã tiễn hành nghiên cứu nhằm đánh giá tác

dụng kháng độc tính asen (450 g/L) của tỏi và Sơ ri (250 mg/kg thé trọng) lên chỉ

số sinh lí của chuột nhất trắng đực Sau 30 ngày thực hiện, kết quả nghiên cứu cho thay, địch ép tỏi Lý Sơn và địch ép Sơ ri có tiềm năng trong việc giữ ôn định tế bào

mau trong quá trình phơi nhiễm asen Dồng thời dịch ép tỏi Lý Sơn va dịch ép sơ ri

cũng có tiềm năng trong việc bảo vệ gan, thận và lách khi bị phơi nhiễm As [40].

Ngoài ra, nhóm tác giả còn thực hiện nghiên cứu vai trò của địch ép chanh đây trong

việc kháng độc tính kẽm lên tinh trùng và tinh hoàn chuột nhất trắng hay dịch ép tỏi

kháng độc tính chỉ lên tỉnh trùng và tính hoàn chuột nhắt trắng Tuy nhiên, kết quả

nay vẫn chưa được công bố Cho đến nay, tại Việt Nam vẫn chưa có nhiều công trình

khoa học nghiên cứu vẻ tác dung kháng độc tính chi của vitamin C cũng như dịch ép

quả Sơ ri trên tinh hoan chuột Do đó, việc thực hiện dé tai này góp phần cung cap

thông tin có thé làm cơ sở cho các bước nghiên cứu tiếp theo.

CHƯƠNG 2 VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 THỜI GIAN VA DIA DIEM NGHIÊN CỨU

2.1.1 Thời gian nghiên cứu

Khoá luận được tiễn hành từ tháng 11/2022 đến tháng 04/2023.

2.1.2 Địa điểm nghiên cứu

Đề tài được thực hiện tại Phòng thí nghiệm Giải phẫu - Sinh lí Người & Động

vật (M103), Trường Đại học Sư phạm Thành phó Hỗ Chí Minh.

2.2 DỤNG CỤ, THIẾT BỊ VÀ HOÁ CHÁT

2.2.1 Dụng cụ, thiết bị dùng chăm sóc chuột và thu tinh trùng chuột

Binh nhựa đựng nước uông cho chuột (75 mL) Việt Nam Màn che Việt Nam

Máy lạnh Nhật Bản

Nhiệt kế điện tử đo nhiệt độ và độ 4m Đức

STT | Tên dụng cụ, thiết bị Hãng sản xuất Xuất xứ

Kinh hiển vi soi nôi Nhật

Kinh hiển vi quang học Olympus Nhật

+

Kính hiển vi đảo ngược Nikon Nhật

Cân phan tích Shimadzu Nhật

+

Lamella Heinz Herenz Hamburg Dức

Pipetman P200 ISOLAB Dức Kim tiêm ] mL Vinahankook Việt Nam

Tip vang Viet Nam

i> |DRpamSS 7 |§eim | ĐmMạh.

Kali dihydrogen phosphate Merck

di-Natri 1 hydrogen phosphate Merck =

ham | To À

Dung dich thi nghiệm bao gồm:

— Vitamin C thương mai (30 mg/kg): 30 mg L-Ascorbic acid (dạng bột) + nước

cất vừa đủ 5 mL

~ Dung dịch thuốc nhuộm Eosin dùng dé nhuộm tinh trùng

— Dung dịch pha lodng tinh trùng CBZ: NaCl (477,477 mg/100 mL) + KCl (35,984 mg/100 mL) + KH2PO: (16,048 mg/100 mL) + MgSOs (14,16 mg/100 mL)

+ CaC]› (18.87 mg/100 mL) + NaHCO; (211,088 mg/100 mL) + Sodium lactate

(C:HsNaO:) (350,56 mg/l00 mL) + Sodium piruvate (C:HsNaO:) (4,185 mg/100

mL) + L-Glutamine (CsHioN20s) (14.6 mg/100 mL) + EDTA (C¡aH;¿N:O:) (2.684 mg/l00 mL+ Bonine serum albumin (BSA) (300 mg/100 mL) + Gentamicine (1 mg/100 mL).

—Dung dich formaldehyde có định mẫu: formaldehyde 10% + KH2PO4 (4

g/1000 mL) + Na2HPO4 (6,5 g/1000 mL).

2.2.1 Nguyên liệu

Quả Sơ ri chua Brazil (vừa chín tới) được mua tại Gò Công, Tiền Giang dùng

dé thu dịch ép thịt qua dùng cho chuột uống với các liều khảo sát tương ứng 20,

30 và 40 mg/kg thé trọng.

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Các thí nghiệm của khoá luận được bố trí theo sơ dé Hình 2.1

Ow định chuột trong phteg thí nghiệm

Í Chỉ (Pb?) pha trong nước, |

| se ri, vitamin C được bow: H

{theo đường thye quan H

Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tông thể

Mỗi nghiệm thức bố tri 12 chuột

DC: Đối chứng, NT: Nghiệm thức

2.3.1 Phương pháp chăm sóc chuột

Chuột nhắt trắng đực (Mus musculus var albino) 4 tuần tuổi được mua từ ViệnPasteur Thanh pho Hồ Chi Minh Chuột nuôi ôn định ở điều kiện phòng thí nghiệm

trong 2 tuần cho dat trọng lượng 19 - 21 g (tương ứng 6 tuân tudi) trước khi tiến hành

thí nghiệm.

Điều kiện nuôi: chuột được nuôi trong long kính kích thước 30x19x19 cm’, dưới

nên chuông lót trau, trên nắp chuồng đậy bang lưới inox (6 con/chuéng); chu ki sáng tôi (10 giờ sáng và 14 giờ toi) ở nhiệt độ phòng (27 - 28°C), có độ âm từ 76 - 80%

được ghi nhận bởi máy đo nhiệt kế điện tử đặt trong phòng Thức ăn cho chuột là

viên thức ăn tông hợp chuyên cho chuột được mua từ Viện Sinh học nhiệt đới, nước uống là gồm nước sinh hoạt của phòng thí nghiệm Chuột được cho ăn, bô sung nước

uống vào lúc 7 giờ và 17 giờ hàng ngày Chuông nuôi được thay trau 2 - 3 ngày/lần

2.3.2 Cơ sở chọn nông độ chì, dịch ép quả So rỉ và vitamin € thương mại

Cơ sở chọn nông độ chì:

Theo Nguyễn Thị Thương Huyền (2022), nghiên cứu của đề tải cơ sở mã số

CS.2019.19.29 cho thấy sự thay đối số lượng tế bào máu, cấu trúc mô gan, thận, lách

ở nông độ chì 70 mg/kg thé trọng [41] Sử dụng kết quả trên là cơ sở chọn nồng độ

chì 70 me/kg thé trọng làm nghiên cứu gây nhiễm cho hệ sinh sản chuột nhat tring đực (Mus musculus var albino) trong 2 tuan thi nghiém.

Co sở chọn nông độ dịch ép thịt qua Sơ ri:

Theo nghiên cứu của El-Neweshy và cộng sự (2011) vitamin C nông độ 20

mg/kg thé trọng có thé cải thiện và giảm thiểu các tác động bệnh lí bat lợi của nhiễmđộc chi trong 60 ngày [32]; của Autifi và cộng sự (2018) cho thấy với nồng độ vitamin

€ với liều 27 mg/ngày có thé cải thiện những thay đôi do độc tinh của chi gây ra do

đặc tính chong oxi hoá va loại bo các góc tự do của nó [37]; của Ebuehi va cộng sự

(2012) cũng đã chứng ming vitamin C nông độ 40 mg/kg thẻ trọng làm giảm dang kế

nông độ chi trong máu, cai thiện tôn thương do stress oxi hoá gây ra bởi độc tính của chì [35] Thực hiện khảo sát thử nghiệm thăm do 3 nồng độ vitamin C từ địch ép quả

Sơ ri là 20 30 và 40 mg/kg thê trọng trên chuột nhất trắng trong 2 tuần, cùng với

trong phạm vi nghiên cứu của dé tài này, các nồng độ dịch ép quả Sơ ri đều được chọn

dé thực hiện ở thí nghiệm này Ngoài ra, dé có cơ sở so sánh, vitamin C thương mại (30

mg/kg thê trọng) được chọn dé làm đối chứng dương cho thí nghiệm

2.3.3 Bé trí thí nghiệm

72 chuột đạt tiêu chuân làm thí nghiệm được phân chia vào 6 nghiệm thức (I2 chuột/nghiệm thức) (Hình 2.2) và đánh dau theo thứ tự có định ở đuôi cho từng con

ở từng nghiệm thức, cụ thé:

— Nghiệm thức | - Đối chứng (DC): chuột uống nước máy khử clo bình thường

~ Nghiệm thức 2 - Đối chứng âm (Pb): chuột uống nước pha Pb từ chi nitrate

với nòng độ 70 mg/kg thé trọng

— Nghiệm thức 3 - Đối chứng dương (VC): chuột uỗng nước pha Pb tir chì nitrate

với nòng độ 70 mg/kg thẻ trọng kết hợp với vitamin C thương mại (30 mg/kg thé

Đề tài được Hội đồng đạo đức trong nghiên cứu trên động vật (ACUCUS) chấp

thuận với mã số hồ số 1170B/KHTN-ACUCUS ngày 19 tháng 11 năm 2019 (Phụ lục 6).

EE — - eer

Hình 2.2 Bố trí chuồng nuôi chuột thí nghiệm

2.3.4 Phương pháp nghiên cứu

2.3.4.1 Phương pháp chuẩn bị dich ép qua Sơ ri, dung dich chi nitrate và

dung địch vitamin C thương mại

Qua Sơ ri được mua từ Gò Công (Tiền Giang) (Hình 2.3) được rửa sạch tách

hat lay phần thịt quả, ép lay nước Dịch ép được gửi tới Trung tâm xét nghiệm Case

đề xác định hảm lượng vitamin € (Phu lục 5) Đồng thời dùng dịch ép này đề địnhlượng vitamin € theo phương pháp chuẩn độ oxi hoá khử sử dụng iodine Dựa trênkết quả phân tích hàm lượng vitamin C có trong dich ép quả Sơ ri (12 254 mg/kg thịt

qua) tính toán thé tích cho chuột uống theo nồng độ khảo sát của từng nghiệm thức

Hình 2.3 Qua Sơ ri chua Brazil được được sử dụng thu dịch ép

Pha muối chi nitrate (Pb(NOs)2) với nước cất dé thu được dung dịch chì nitrate(Pb(NOs)2) nồng độ 70 mg/kg thé trọng Tính toán thé tích can cho từng chuột uống,dam bảo tương ứng với nông độ 70 mg/kg thê trọng

Pha bột vitamin C thương mại với nước cất dé thu được dung dich vitamin Cthương mại nông độ 30 mg/kg thé trọng Tính toán thẻ tích cần cho từng chuột uống,dam bảo tương ứng với nông độ 30 mg/kg thê trọng

2.3.4.2 Phương pháp cho chuột uống chi, vitamin C và dich ép quả Sơ rỉ

Nước nhiễm chi, nước ép Sơ ri, vitamin C thương mại được cho chuột uéng

bang cách dùng xi lanh 1 mL gắn với đầu kim chuyên dụng (số 8) bom trực tiếp qua miệng xuống thực quản (Hình 2.4) Trước khi cho chuột ăn 30 phút, cho chuột uéng nước nhiễm chi, khung thời gian cho uống chì vào lúc 06 - 07 giờ sáng hàng ngày.

Thời gian cho uống dịch ép quả Sơ ri và vitamin C thương mại vào mỗi 10 giờ hàngngày Các chuột được theo déi và ghi nhận các dấu hiệu bất thường hằng ngày vao số

nhật kí (nếu có) trong 30 phút kế từ khi cho uống chi, dich ép Sơ ri hay dung dich vitamin € thương mai.

Hình 2.4 Hình minh họa thao tác cho chuột uống

2.3.4.4 Phương pháp thu nhận mẫu tỉnh hoàn và tinh dich

Thu nhận ở hai đợt, sau 4 tuần và § tuần thí nghiệm; ở mỗi đợt sẽ thu nhận tinhhoàn (Hình 2.5) và tỉnh dịch của một nửa tông số chuột ở mỗi nghiệm thức Tại mỗi

mốc thời gian thu mẫu, chuột thí nghiệm được gây chết bằng cách gây mê bởi thuốc

tiêm ketamin kết hợp với xylazine (liều 0,1 mL/10 g thé trọng); khử trùng vị trí mô;

mé 6 bụng chuột; kéo tỉnh hoản; mao tinh hoản ra khỏi xoang bụng; dùng kéo nhỏmũi nhọn tách phan mỡ và thu 2 mào tinh kèm một đoạn ống dẫn tinh chuyên vào

eppendorf chứa 1 mL môi trường CBZ; thu nhận 02 tinh hoàn (được tách mỡ) dé xác

định kích thước vả khối lượng

Parr YSN, , có

Hình 2.5 Phương pháp thu mào tinh và mẫu tinh hoàn chuột

A Mao tinh B Tinh hean

Chuyên eppendorf chứa 02 mao tinh vào dia petri thủy tinh ®35 chứa 1 mL

dung dich CBZ và đưa lên kính hién vi soi ndi; dùng 2 kim 1 mL xé mao tinh va day

tinh dich ra môi trường CBZ (Hình 2.6); dùng pipetman 1000 mL thu nhận hết môi

trường có tinh dịch vào 1 eppendorf mới, huyền phù hỗn hợp tinh dịch [42] Dùng

mẫu tinh dich dé xác định mật độ tinh trùng và đánh gia chất lượng tỉnh trùng