Khóa luận tốt nghiệp Sư phạm sinh học: Khảo sát ảnh hưởng độc tính Cadmium đến độ tăng trọng cơ thể và các chỉ số huyết học của chuột nhắt trắng (Mus musculus var. albino)

Mục tiêu nghiên cứu Khảo sát được mức độ ảnh hưởng của độc tính Cadmium đến sức khoẻ chuột nhất trắng đực thông qua độ tăng trọng cơ thé và một số chỉ số huyết học nhằm cung cấp dữ liệu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRUONG DAI HỌC SƯ PHAM TP HO CHÍ MINH

k LL os

HA VAN PHUOC

CUA CHUOT NHAT TRANG

(Mus musculus var albino)

KHOA LUAN TOT NGHIEP DAI HOC

NGANH SƯ PHAM SINH HỌC

THÀNH PHO HO CHÍ MINH — 2024

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HÒ CHÍ MINH

t› Kí] œ

HÀ VĂN PHƯỚC

KHAO SÁT ANH HUONG ĐỘC TÍNH CADMIUM DEN ĐỘ TANG TRỌNG CƠ

THE VÀ CAC CHI SO HUYET HỌC

CUA CHUOT NHAT TRANG

(Mus musculus var albino)

KHOA LUAN TOT NGHIEP DAI HOC

NGANH SƯ PHAM SINH HOC

NGƯỜI HƯỚNG DAN KHOA HOC PGS TS Nguyén Thi Thuong Huyén

THÀNH PHO HO CHÍ MINH - 2024

người đã giúp đỡ tôi trong thời gian qua.

Dau tiên, tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Cô — PGS TS Nguyễn Thị ThươngHuyện — người Cô tâm huyết, đã tận tâm hướng dan, hỗ trợ tôi toàn bộ kinh phí, giúp

đỡ tôi trong suốt qua trình nghiên cứu và thực hiện dé tài khoá luận tốt nghiệp Tôi xin

gửi lời cảm ơn chân thành nhất đến toàn bộ Quý: Thay Cô Khoa Sinh học, Trường Dai

học Sư phạm Thành phố Hỗ Chi Minh đã giảng dạy các kiến thức, truyền đạt những

kinh nghiệm quý bau cho tôi trong suốt 4 năm học tập và rên luyện tại trưởng Tôi xinchân thành cảm ơn Thay — ThS Trương Văn Tri, Thay — ThS Võ Văn Thanh, Cô — CN

Hà Thị Bé Tư đã nhiệt tình chỉ dan, giúp đỡ tôi trong suốt qua trình thực hién đề tài tại

Phòng thí nghiệm Giải phẫu — Sinh lí người và động vật.

Tôi xin chân thành cam ơn Viện Pasteur Thanh phố Hỗ Chi Minh đã cung cấp

nguôn chuột để tôi thực hiện và hoàn thành dé tài khoá luận tốt nghiệp

Cuối cùng, tôi xin cảm ơn gia đình, bạn bè đã luôn ủng hộ tôi trong suối quãng

thời gian thực hiện đề tài khoá luận tốt nghiệp Cảm ơn chị Nguyễn Thị Thanh Hằng.

chị Hỗ Linh Kiêu Nhi, anh Ly Viên Triệu Quang, chị Nguyên Thị Thùy Dương, ban

Nguyễn Kim Mi, bạn Phạm Anh Hao, bạn Võ Hoàng Báo Ngọc, bạn Tổng Tuyết Linh,

em Trương Huy Bứu, em Lâm Thị Khánh Phương đã luôn sẵn sàng giúp đỡ tôi trong

quả trừnh thực hiện khoá luận.

TP Hà Chí Minh, ngày 08 tháng 05 năm 2024

SINH VIÊN

Hà Văn Phước

LỜI CAM ĐOAN

Khoá luận tốt nghiệp với tên dé tài “Khdo sát ảnh hưởng độc tính Cadmium đến độtăng trong cơ thể và các chỉ số huyết học của chuột nhất trắng (Mus musculus var albino)”

do tôi thực hiện đưới sự hướng dẫn của Cô — PGS.TS Nguyễn Thị Thương Huyền.

Tôi xin cam đoan các kết qua trong khoá luận là trung thực và chưa từng được ai

công bé trong bat kì công trình nao khác

Học viên thực hiện

Hà Văn Phước

MỤC LỤC

09009 1091 .-:':-:-`:||Ư:ỊỞỮÃä:, ,LƠỎ.Ỏ i

DM Tasca eccn ea sanccesaaccssaascteesssstracsntctntssatseeastsaenssesetesetsccuszstesetsteesaasseeeeeeenies iii

DANH MỤC CHU! VIET TAT cccccccccsessscssesssersessseseesssessessvesssesessseesesssessersntesesnonsaseees vi

DANH MUG BANG HIỂU unaannoannooiooaooiooioooiioooiinuanneiannnoange vii

DANH MỤC HINH ẢNH 222222222222222222222222212222222121 2721111 2.1111 re viii

Chương 1 TONG QUAN 2-22 22 2222112222122117712112221121122112111721211721 111cc 3

1.1 Tơng quan về Cađmium - 6s 6 22 9É 11 2t 12012101210111011 11g11 H121 3

1.1.1 Trạng thái tồn tại, đặc tính va ứng dụng của Cadmium trong tự nhién 3

1.1.2 Các nguồn phát thải ơ nhiễm Cadmium và các con đường phơi nhiễm

CEITHUTH:::::::::: 221221351351 11512215821541541694 564 044456354 của l bái lên gãá sêệi sân 3

1.1.3 Ảnh hưởng của Cadmium đối với cơ thể con người và động vật 4

1.1.4 Cơ chế sinh li của việc ảnh hưởng Cdmium đến các chỉ số huyết học 5Š1.2 Tơng quan về chuột nhắt trắng - - + 5 222222222111 s => ssccxe< 6

1.3.2 Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam cu n nhe 1]Chương 2 VAT LIEU VA PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU «+ <:-=- 12

2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 2-52 222 z2Sxc2SvEESxczxrrrcrxrcsrrxee 12

32 Dunecu,(BiGIIbị Va NOG: CHAE asscscssscssscscssssessisnssssasssnassesinssanessascaisssssasssasssesnnanii 12

2.2.1 Dung cu, thiết bi dùng chăm sóc chuột và thu mau máu chuét 122.2.2 Hoá chất và dung dịch thí nghiệm - c5 cv svcccccSscsren 13

2:3) Phirong pháp nghiên GỮN!:; ::s.:::::::::c:cciii2i2201212022111211136102351631303136338233363356355E 14

201 (BDIIiiHiii0 NHAN vs ca xvx305413601621421831532302162319136216641243431502441653 14

2.3.1 Phương pháp chăm sóc chuột . . -.-< << << << << 15

2.3.4 Phương pháp nghiên cứu - - cu SH Hư l6

2.3.4.1 Phương pháp chuân bị dung dich cadmium chloride l6

2.3.4.2 Phương pháp cho chuột uống dung dich cadmium chloride 162.3.4.3 Phương pháp khao sát độ tăng trọng eo 17

2.3.4.4 Phương pháp thu nhận mẫu mau chuét 0 0 0 cceccecceeceeseeeseeeeeees 17

2.3.4.5 Phương pháp xác định số lượng hỏng cầu, bạch cau, tiểu cầu và ham

lượng Hồ:::::::::::2:iiii:iiii12ii131141541231123158831235415954533453535833885334935523 826532 18 2.3.4.6 Phương pháp xác định thời gian đông mau 20

2.3.4.7 Phương pháp xác định hermatOCrIL ccc S351 1< xxx 21

2.3.4.8 Phương pháp làm tiêu ban miấu - ceeeeeeeeceeeeeeeeeneeeeeeees 22

2.3.4.9 Phương pháp xác định kích thước hồng câu - : 525556: 23

2.3.4.10 Phương pháp xử lí số liệu - 2-2222 z2 Sxz22zzzcczczre 23

Chương 3 KET QUA VÀ BAN LUẬN -2222 22252 102222102027110022121 201112 cty 24

3.1 Ảnh hưởng độc tính Cadmium lên độ tăng trọng cơ thé chuột 24

3.2 Ảnh hưởng độc tính Cadmium lên số lượng hong cầu, hàm lượng hemoglobin,

chỉ số hematocrit, nông độ huyết sắc tô trung bình hỏng cầu và kích thước hồng

II 27 3.2.1 Số lượng hồng cầu trung bình St cxcstcssres 27

3.2.2 Hàm lượng hemoglobin - - Ăn Ăn se, 28

3.2.3 Chi nằm

3.2.4 Nông độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu - ¿c2 32

3.2.5 Kích thước hồng cầu + S SE 2S 2E SE SS S2 1 xxx se 343.3 Anh hưởng độc tính Cadmium lên số lượng bạch cầu - 37

3.4 Ảnh hưởng độc tính Cadmium lên số tiêu cầu và tốc độ đông máu 403.4.1 Số lượng tiểu cầu ¿ -22+2222E12S37512251221211 11 1121721112111 eerxcee 403.4.2 Tốc độ đông máu -¿ - 2Ự HH ng HH HH1 011001110 1101p 4l

3.5 Kết quả tong hợp tác động của Cadmium đối với các chỉ tiêu khảo sát sau § tuần

Phụ lục 2 - Chỉ số sinh lí máu ChuGt ssssssssssssscccssssssssssessccssssssssssessssessnsssssesssensssssssss PL3

Phụ lục 3 - C hap thuận của hội đồng đạo đức trong nghiên cứu trên động vat PLI8

SD | Standart deviation - Độ lệch chuân

WO — | Tuan 0 (trước khi đưa vào bồ trí thí nghiệm)W4 | Kếtthúc 4tuần

DANH MỤC BANG BIEU

Bảng 1.1 Một số chỉ số huyết hy s0) nÚa II" .ốốốỐốỐốố.ẽ 7

Bang 2.1 Dụng cụ, thiết bị chăm sóc chuột, 6 c2 2202121112111 122216 13

Bảng 2.2 Dụng cụ thiết bị lấy máu chuột vả quan sat tiêu bản - .- 13

Bảng 2.3 Hoá chat pha dung dich thí nghiém 0 0 0cccccecccsscsseeeeseessesseseeseeseeseeeeen 14

Bảng 3.1 Kết quả tông hop vẻ tác động của cadmium lên độ tăng trong va một số chi

SỐ huyết học của chuột nhất trắng Si2366463462861630623224608003640462620222632222620840240682 44

DANH MUC HINH ANH

Hình 2.1 Sơ đô bố tri thí nghiệm tổng thẻ 2-22-2222 2223122332 22222222zcrzzcee 16

Hình 2.2 Bồ trí chuồng nuôi chuột thi nghiệm ở các nghiệm thức - 16

Hình 2.3 Thao¡tác cho Chit ing oscccsscssscsssssssasssaasscaassssiscsascasasoassoosscsunassnanssanasasenaacs 17

Hình 2.4 Hình ảnh minh hoa cân khối lượng cơ thể chuột - 5255255: 18

Hình 2.5 Minh hoa thao tác lây máu ChuGt cccccssccssssssssstecssecsssesssecsscssscessneseness 18

Hình 2.6 Minh hoa thao tác xác định số lượng hồng câu và bach càu 19

Hình 2.7 Minh hoa thao tác xác định ham lượng Hb cc ccenecteeeteeeteeteneees 21

Hình 2.8 Minh hoa thao tác xác định tốc độ đÔNE HẤN::::::::::::2:::2:222ii2sicszrsarisaassasi 22 Hình 2.9 Minh hoạ thao tác xác định chi số hematocrit Si898515855885138513585586 8555518 22

Hình 2.10 Minh hoạ thao tác làm tiêu bản máu chuột - - 5c 5555 ssc<<s<<zx 23

Hình 2.11 Minh hoa đo kích thước hồng cầu bằng phần mén S$ - Eye 24 Hình 3.1 Đồ thị thé hiện độ tăng trọng của chuột tại các nghiệm thức thử nghiệm qua TẠI) 0011 E:aaidđdidđidiÝŸÝỶŸỶÃỶÝÝỶÝỶÝ 25

Hình 3.2 Đô thị thé hiện số lượng hỏng cầu của chuột tai các nghiệm thức thử nghiệmqua các tuần nuôi 2-22 ©2t92SE+42EEEZEE211E221122E231227111771117211122721472112 22222 cerzce 28Hình 3.3 Đồ thị thé hiện hảm lượng hemoglobin của chuột tại các nghiệm thức thử

BfHiEm.0105:G001fNHIRHDIL.; 2 5::22125244321601531195210621132001421032)182110201223115563303831188203920937202210 30

Hình 3.4 Đồ thị thé hiện chi số hematocrit của chuột tai các nghiệm thức thử nghiệm GRD (iilai(Bi[DiL 2 c2: 55:25010011652002101136122101571851092221)271022162101213835111317121932003314322736103510: 32

Hình 3.5 Dồ thị thê hiện nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu của chuột tại các

nghiệm thức thứ nghiệm qua các tuần nuôi - 2-5262 2222 2221 5211222xzzcxszee 34

Hình 3.6 Dé thị thê hiện kích thước hồng cầu của chuột tại các nghiệm thức thử

nghiệm qua các tuần nuôi 2 52-©22222222E3SE3 233 31 211721172117211771172117210722 2222 36 Hình 3.7 Đô thi thé hiện số lượng bạch cau của chuột tại các nghiệm thức thử nghiệm

qua các tuần nuôi 2-2 2z sE29E22EEEE S312 11712211221172117211721172.112 2117211714752 39Hình 3.8 Dé thị thé hiện số lượng tiêu cầu cúa chuột tại các nghiệm thức thứ nghiệm

Qua u60 28.7 áI

Hình 3.9 Đồ thị thể hiện thời gian đông máu của chuột tại các nghiệm thức thử

BPhiôm.Gii51G11EiTUSNIHDDfL 002:1640722122221150116002141022106230021004210020106310330121113401620034162211621162101 4

MỞ ĐÀU

I Lí đo chọn đề tài

Quá trình công nghiệp hoá, hiên đại hoá mang lại sự tiền bộ tích cực trong đời

sông, nhưng cũng mang đến những anh hưởng về môi trường và sức khỏe con người

Các chất thải từ quá trình sản xuất công nghiệp, nông nghiệp từ hoạt động của con

người ngày càng nhiều đã lam tình trạng ô nhiễm môi trường ngày càng trở nênnghiêm trọng Trong các tác nhân gây 6 nhiễm môi trường, kim loại nặng là mối quan

tâm hàng đầu vì nó có khả năng gây độc và độc tính này có xu hướng tích lũy sinh

học, không phân hủy vả có thé gây rủi ro sinh thái Trong số đó, Cadmium (Cd) là

kim loại không thiết yêu hiện ở vị trí thứ 7 trong danh sách ưu tiên các chất của Cơ

quan Đăng ki Chất độc và Bệnh tật (ATSDR 2019), được coi la một trong những

nguyên tô độc hại nhất đối với môi trường và con người Các nghiên cứu đã cho thay

Cd có thé gây ung thư, gây đột biến hoặc gây quai thai cho các loài khác nhau tùy thuộc vao liễu lượng và thời gian tiếp xúc [1].

Cd có thé tích tụ nhiều ở máu, gan, phối, thận, tinh hoàn và xương Các nghiên

cứu dịch tế học chứng minh rằng việc tiếp xúc lâu dai với lượng Cd thấp góp phan

gây ra bệnh tật và tử vong do các bệnh tim mach, xơ vữa động mạch, bệnh động mạch

vành và đột quy [1] Xong, cơ chế ma nó ảnh hưởng đến các mô, cơ quan và hệ cơ quan khác nhau ở các sinh vật khác nhau là rất phức tạp và đến nay vẫn chưa được

giải thích day đủ [2] Hiện nay, cũng chưa có phương pháp điều trị hiệu quả đối với

ngộ độc Cd vì nó có những biêu hiện và triệu chứng khác nhau trên người nhiễm ít hay nhiều các biểu hiện và triệu chứng còn chưa được nghiên cứu cụ thể Phác đồ

điều trị chính có liên quan đến việc sử dụng chất thải kim loại nhưng điều nay lại gây

ra một số tác dụng không mong muốn, chang hạn như tái phân phối/chuyên vị trí của

kim loại và các biéu hiện độc hai nghiêm trọng [3] Do vậy, việc nghiên cứu độc tính

Cd đề có những kết luận rõ rang, từ đó đưa ra những phương pháp điều trị cụ thé, phùhợp là vô cùng cần thiết

Chính vi những lí do trên, dé tài khoá luận tốt nghiệp “Khảo sát ảnh hưởng

độc tính Cadmium đến độ tăng trọng cơ thể và các chỉ số huyết học của chuột

nhất trắng (Mus musculus var albino)” được thực hiện.

H Mục tiêu nghiên cứu

Khảo sát được mức độ ảnh hưởng của độc tính Cadmium đến sức khoẻ chuột

nhất trắng đực thông qua độ tăng trọng cơ thé và một số chỉ số huyết học nhằm cung

cấp dữ liệu khoa học vẻ tác động độc hại của Cadmium đối với sức khỏe của chuộtnhất trắng nói riêng và động vật chung, góp phần bảo vệ sức khỏe cộng đồng và môi

trường.

ILL Đối tượng nghiên cứu

Chuột nhất trắng đực 6 tuần tuổi (19 - 21 g)

IV Nội dung nghiên cứu

Khảo sát ảnh hưởng của độc tính Cadmium lên:

Độ tăng trọng của chuột;

Một số chi số huyệt học của chuột; số lượng tế bào máu (hồng câu, bạch câu,tiêu cầu); kích thước hong cầu; hàm lượng hemoglobin, chỉ số hematocrit, nồng độ

huyết sắc tô trung bình hỏng cầu; tốc độ đông máu.

V Phạm vi nghiên cứu

Đề tài được thực hiện trên chuột nhất trắng đực 6 tuần tuổi;

Thời gian bồ trí thi nghiệm: 4 tuần/đợt thí nghiệm.

Khảo sát ở 3 nồng độ Cadmium: 1 mg/kg b.w, 3 mg/kg b.w và 6 mg/kg b.w

Các thông số khảo sát gồm: độ tăng trọng cơ thé chuột; các chỉ số huyết học (Số

lượng tế bảo mau; kích thước hồng cau; ham lượng hemoglobin, chỉ số hematocrit, nồng

độ huyết sắc tó trung bình hồng cau; tốc độ đông máu)

Chương 1 TONG QUAN

1.1 Tong quan vé Cadmium

1.1.1 Trạng thái ton tại, đặc tinh và ứng dụng của Cadmium trong tự nhiên

Cadmium hay còn được gọi là Cadimi (Cd; số nguyên tử 48, trọng lượng nguyên

tử 112,41) thuộc nhóm XII trong bảng tuần hoàn các nguyên tố hoá học, là một

nguyên tô hoá học có trong vỏ Trái Dat, được một nhà bác học Đức tìm ra vào năm

1817 Dây là một kim loại nặng có trong đất, có nguồn gốc từ quá trình đốt, tinh chế

khai thác mỏ và đốt nhiên liệu hoá thạch, Trong tự nhiên, Cadmium thường được khái

thác tại các mó Đồng, Chi va Kém, thường ít gặp ở dang tinh chat vì Cd không tồn

tại ở dạng đơn chất mà thường kết hợp với các chất khác đề tạo thành nhiều dang hop

chất khác nhau Một số dạng hợp chất Cadmium phô biến như cadmium oxide,

cadmium chloride, cadmium sulfate va cadmium sulfide [4], [5].

Cadmium là một kim loại nặng và hiểm trên Trái Dat Ở thé rắn, Cadmium cómàu trang ánh xanh, tương đối mềm, déo, dé uốn và dé cắt bằng dao, không bị ri sét

Kim loại này có nhiều phương điện tương tự như kẽm nhưng có xu hướng tạo ra những hợp chất phức tạp hơn Trong tự nhiên, Cd được sử dung lam chat mau, chat

ôn định cho PVC và hợp kim, trong mạ điện dé bảo vệ thép không bị ăn mòn Các

hợp chat của Cd được dùng dé tạo mau cho thay tinh vả trong nghề làm đẻn Một

trong những ứng dụng mới của Cadmium là làm pin Mặt Trời bán dẫn Telluride và

kính quang học hong ngoại [5].

1.1.2 Các nguồn phát thải ô nhiễm Cadmium và các con đường phơi nhiễm

Cadmium

Việc tiếp xúc với Cd xảy ra thông qua hút thuốc 14, nước hoặc thực phâm bi ô

nhiễm, không khí bị ô nhiễm do đốt nhiên liệu hoá thạch hoặc ô nhiễm nghề nghiệp.

Một trong những nguồn gốc tiếp xúc ớn nhất với Cd đối với cơ thê con người là thông

qua chuỗi thức ăn [6] [7] Hàm lượng Cd cao còn được tìm thấy trong các loài giáp xác, nhuyễn thể hai mảnh vỏ, hàu, động vật chân đầu và cua; nó cũng được tìm thấy trong các sản phẩm nội tang, chăng hạn như gan và than, trong hạt có dau, ca cao,

đậu và một số loại nắm đại Thực phẩm có nguồn góc từ thực vật, tùy theo độ ô nhiễm

của đất, thường chứa nông độ Cd cao hơn thịt, trứng, sữa va các san phâm từ sữa

Trong số này, gạo và lúa mì, rau lá xanh, khoai tây, cà rốt và cần tây có thể chứa

nhiêu hơn [Š] Ở những khu vực có đất bị ô nhiễm, bụi là một con đường tiềm năng

dé tiếp xúc với Cadmium [8] Các nguồn Cd đo con người tạo ra trong môi trường có

nguôn gốc từ nâu chảy va tinh chế đồng và niken, đốt nhiên liệu hóa thạch và sử đụng

phân lân Cadmium cũng có mặt như một chất gây ô nhiễm trong các lò luyện kim

loại màu và tái chế chất thải điện tử Hoạt động núi lừa, quá trình xói mòn và màimon dân dan của đá va đất, cháy rừng cũng 1a một trong những lý do làm tăng nồng

độ Cả trong môi trường sống (khí quyền, đất và nước) [9]

Một trong những con đường phơi nhiễm chính của Cadmium ở người là thông

qua việc tiêu thụ gạo [10] Cd thê hiện các đặc tính thủy hoá cụ thẻ, gây ra khả năng

đi chuyển của nó trong nước ngằm Ở độ pH gan trung tính (<6,5) Cd vẫn ở dangdung dịch, trái ngược với khả năng cô định điền hình của các kim loại nặng khác [11].Một nguồn phơi nhiễm với Cd là sử đụng thuốc lá, phơi nhiễm Cadmium do hút thuốc

lá có thê khác nhau tùy thuộc vao loại thuốc lá Một điều thuốc chứa 1-2 ug Cd: một

người hút 20 điều thuốc mỗi ngày sẽ hap thụ khoảng I pg Cd Khoảng 10% Cd được

hít vào với tỉ lệ hap thụ ở phôi là 40%4-50% Cadmium hít phải có liên quan đến các

bệnh về đường hô hap liên quan đến hút thuốc lá, chăng hạn như bệnh phôi và ung thư phôi [5].

1.1.3 Ảnh hưởng của Cadmium đối với cơ thể con người và động vật

Cadmium can thiệp vào các kim loại sinh học thiết yếu của cơ thé như Kém,Magnesium, Calcium và Sat, làm thay đổi cân bằng nội môi và xáo trộn chức năng

sinh học của chúng [12] Sy hap thụ Cd diễn ra chủ yếu qua đường hô hap và ở một

mức độ nhỏ qua đường tiêu hóa-ruột, sự hap thụ qua da là kha ít Khi Cadmium di

vào cơ thé, nó được vận chuyển vào máu thông qua hồng cau và albumin va sau đó được tích lũy ở thận, gan và ruột [13] Sự bài tiết cadmium ra khỏi cơ thé chậm va

xảy ra qua thận nước tiêu, nước bọt và sữa trong thời kỳ cho con bú Việc tiếp xúc

với Cd ở mức độ thấp có thé dẫn đến tôn thương than, gan, hệ xương và hệ tim mach,

cũng như suy giảm thị lực và thính giác Cùng với tác dụng gây quái thai và đột biến

mạnh, Cd cũng cho thấy tác dụng phụ ở liều thấp đối với khả năng sinh sản của cả

nam và nữ [14] Điều này là do sự thay đôi biểu hiện của nhiều gen trong phôi, dẫn

đến sự methyl hoá bất thường của chúng trong nhau thai và phôi Các kiều biến đôi

do cadmium gây ra có liên quan đến khả năng dé dàng liên kết với thiol khi làm cạn

kiệt chat cho methyl S-adenosyl methionine, dẫn đến thay đổi methylome và sau đó

là thay đôi hoạt động enzyme methyltransferase DNA, có thé gây ra rỗi loạn phát triển nhau thai và thai nhỉ [5].

Cadmium gây ra sự thay đôi steroid, rối loạn chu kỳ kinh nguyệt và hormone

sinh sản, trì hoãn tuôi day thì và kinh nguyệt, say thai, sinh non và giảm cân khi sinh.

Cadmium cũng liên quan đến sự loãng xương ở phụ nữ mãn kinh [15] Sự hap thụ

Cadmium đường ruột tăng lên khi dự trữ sắt cơ thể cạn kiệt và thiếu sắt, tình trạng phô biến ở phụ nữ trong độ tuôi sinh sản [16] Cd có thé tương tác với các con đường

truyền tín hiệu nội tiết t6 khác nhau và được coi là một chất gay rỗi loạn nội tiết có

thé liên kết alpha thụ thé estrogen và ảnh hưởng đến sự truyền tín hiệu đọc theo conđường tín hiệu estrogen va MAPK Cd liều thấp ảnh hưởng đến hệ tim mach [15]

Các nghiên cứu địch té học cho thay tiếp xúc với Cd có thé thúc day sự phát triển của

các bệnh cơ xương chang hạn như loãng xương viêm khớp dang thấp (RA) và viêm

xương khớp (OA) [17].

1.1.4 Cơ chế sinh lí của việc ảnh hưởng Cdmium đến các chỉ số huyết học

Sau khi và cơ the, một lượng lớn Cd trong hồng câu liên kết với các protein có

trọng lượng phân tử cao, trong khi một lượng nhỏ liên kết với huyết sắc tố, Hệ thống

tạo máu là một trong những hệ thống nhạy cảm nhất và nó là mục tiêu gây độc quan

trọng của Cd Đặc biệt, sự hấp thụ Cadmium gây ra bệnh thiếu máu hông cầu trong

mau (giảm số lượng tế bào hồng cau trong máu và nông độ hemoglobin) va gia tăng

số lượng tế bào bạch cau (chủ yêu là bạch câu trung tính) [11] Các nghiên cứu cho thay, phơi nhiễm Cd có liên quan đến rối loan mach máu Các nhóm malondialdehyd

va protein carbonyl huyết tương tăng lên trong khi glutathione hong cầu giảm ở những

đối tượng tiếp xúc với Cd [18] Phơi nhiễm cadmium gây tăng huyết áp và ton thương

mạch máu thông qua kích hoạt NADPH oxidase, hệ thông renin-angiotensin và con

đường cyclooxygenase 2 trong động mach [11].

1.2 Tổng quan về chuột nhắt trắng

1.2.1 Vi trí phân loại

Giới: Động vat Animalia [19]

Ngành: Có dây sống Chordata Phân ngành: Có xương sông Vertebrata hay có hộp sọ Craniota

Lớp: Thú, hữu nhũ Mammalia Phân lớp: Thú nhau Placentalia

Tông bộ: Gam nhắm Glires Bộ: Gặm nham Rodentia

Phân bộ: Răng đơn hàng Simplicidentata

Họ: Chuột Muridea

Giống: Chuột Mus Linnacus, 1785

Loài: Chuột trắng Mus musculus Linnaeus, 1785Noi: Chuột nhat trắng Mus musculus var, albino Linnaeus, 1785

1.2.2 Dac diém hinh thai va sinh li

Chuột nhat trắng — Mus musculus var albino là loài chuột thi nghiệm rat phôbién trong các các lĩnh vực như y hoc, sinh học, tâm lí học va nhiều lĩnh vực khác

Chúng có hình dạng tương tự với chuột nhắt nhà, với bộ lông ngắn mau tring, mắt

đỏ, miệng thuyén, tai vừa phải va đuôi it lông Thân của chuột trưởng thành daikhoảng 7,5 - 10 em (tính từ mũi đến gốc đuôi), đuôi có chiều dài khoảng 5 - 10 em

Cân nặng của chuột mới sinh dao động khoảng 0,9 - 1,5 g, trong khi chuột trưởng

thành có thé nặng từ 31 - 40 g Chuột nhất trắng có độ tuôi trưởng thành từ 5 - 8 tuần tuôi, tuôi sinh sản từ 6 - 7 tuần tuôi, chu kỳ động dục là 4 - 5 ngày (tự phat), thời gian

mang thai từ 19 - 21 ngày, mỗi lứa sinh từ 6 - 8 con, khoảng cách giữa hai lứa là

khoảng 30 ngày Chuột nhất trắng thường sống trung bình từ 1,5 - 2 năm [20] Chuột

con khi mới sinh ra chưa mở mắt, chưa có lông, da hông, đến ngày thứ 9, chúng được

bao phủ bởi bộ lông dày (phần đầu sẽ mọc sớm hơn vài ngày); đến ngày 14 sẽ mở

mất, chúng có thé bat dau tách khỏi mẹ sau 16 ngày tuôi [21] Chuột nhất trắng hiền

lành, có tập tính chải chuốt bộ lông, làm tỏ, lèo trèo, đào 6, gam nham, và các hành

vi xã hội [20] Chúng thường hoạt động mạnh về đêm rất nhạy cảm đến sự chuyên

động và thay đôi cường độ ánh sáng [21].

1.2.3 Đặc điểm sinh lí máu

Mau ngoại vi ở chuột bao gồm huyết tương, hồng cầu, bạch cau và tiêu cầu Nó

có chức năng tương tự như con người la cung cấp oxygen, chất đỉnh đưỡng và vậnchuyền, loại bỏ các chất thai trong quá trình chuyên hoá của cơ thé Cả ba loại tế bào

máu (hồng cầu, bạch cau và tiêu cầu) đều bắt nguồn từ tủy xương Một số thông số

số huyết học của chúng được mô tả ở Bảng 1.1 [12]

Tế bao hồng cau ở chuột có đường kính 4 - 7 pm và có hình thái tương tự như

ở người Ở chuột con (dưới 4 tuần tudi), hong cầu lưới có thể được nhìn thấy chiếm

tới 10% số hong cầu [22] Nhìn chung, tế bào hồng cầu của chuột có kích thước trungbình nhỏ hơn so với các loài khác, nhưng vi số lượng hồng cau của chúng cao hon,

nên năng lực thần kinh của chuột cũng tương tự như các loài khác Ở chuột, các tế

bao hong cau thường được sản xuất trong tủy xương và lách, quá trình sản xuất xây

ra ngay cả ở những con trưởng thành Điều nay trái ngược với các loài khác trong đó

qua trình tạo mau ở lách thường không xảy ra ở giai đoạn trưởng thành So với các

loài động vật có vú khác, hỏng cầu chuột có tuôi thọ khá ngắn, tước tính khoáng 30

-52 ngày (ở chó là 110 ngày và ở người là 120 ngày) Sự gia tăng hoặc giảm số lượng

tế bào hồng cầu có thé liên quan đến van dé mat nước của cơ thê xuất huyết, tăng tan

máu hoặc giảm sản xuất tế bào máu [21].

Số lượng bach cầu (WBC) trung bình ở chuột là 5 000 - 12 000 tế bao/uL, baogồm: bạch cầu lympho (chiém 70 - 75%), bach cầu đơn nhân (chiếm 2 - 6%), bạchcau trung tính (chiếm 20 - 25%), bạch cầu ưa acid (chiếm 0 - 3%) va bạch cầu ưabase (chiếm 0 - 0.1%) Bạch cầu có chức năng quan trọng trong hệ thông miễn dịch

đặc biệt là trong phản ứng viêm và nhiễm trùng [22] Giảm bạch cầu có thể do các

vấn đề trong tủy xương làm giảm sản xuất bạch câu, rỗi loạn quá trình điều hòa miễn

dịch, căng thăng, tăng cường đi vào mô hoặc tăng phá hủy Chuột thường tăng số lượng tế bào bạch cầu dé phản ứng với các chứng viêm [21],

Ở chuột các tiêu cầu thường tập hợp lại với nhau, đường kính của tiểu cầu dao

động từ 1 - 4 wm Các cạnh của tiều cầu không đều, với các sợi nhọn và xúc tu lỗilõm không có nhân Tiêu cầu rất quan trọng đối với sự hình thành cục máu đông và

cam máu, chúng phan ứng với tôn thương tế bao nội mô bằng cách kích hoạt, kết tụ

và cung cấp bẻ mặt xúc tác cho các yếu tố đông máu [22] Chuột có số lượng tiêu cầu

cao hơn bat kỳ loài động vật thí nghiệm nào (khoảng 300 000 - 1 000 000 tế bao/uL),

tudi thọ của tiêu cầu khoảng 4 - 5 ngày Tiểu cầu giám có thé do các vấn đề trong tủy

xương lam giảm sản xuất hoặc gia tăng sự phá hủy [21].

Các chỉ số huyết học ở chuột phụ thuộc vào nhiều yếu tố như giới tinh, tuôi,trạng thía sinh lí và sinh sản, Cụ thé, chuột đực trưởng thành có tỉ lệ phan tram thé

tích của tế bào hồng cau trong máu (HCT) cao hơn và tông số bạch cau (tế bao lympho

và bạch cầu hạt) nhiều hơn so với con cái; số lượng tế bảo hông cầu (RBC ) HCT và

nông độ hemoglobin (MCHC) ở chuột con thấp hon ở chuột trưởng thành [21].

Các chi số tế bao máu đóng vai trò chìa khoá quan trọng trong việc đánh giá tình

trạng sức khỏe của động vật và con người Khi chúng bị tác động bởi các yếu tô bên

ngoài, bao gồm cả nhiễm kim loại nặng nói chung và nhiễm Cd nói riêng, các chi sốnay thường biến động đáng kê Sự tăng hoặc giảm đột ngột trong các chỉ số tế bảo mau,

như số lượng hong cau, bạch cầu, hoặc tiểu cầu, có thé là đầu hiệu của mức độ nhiễm

độc của kim loại nặng trong cơ thê Ví dụ, nhiễm độc cadmium đã được liên kết với sự

suy giảm hay tăng số lượng hong cau, bạch câu, tiêu cầu [23] [24] Do đó, việc đo lường và đánh giá các chỉ số tế bảo máu thường được coi là một phần quan trọng của quá trình chân đoán và theo dõi tinh trang sức khỏe, đặc biệt là trong trường hợp nghỉ

ngờ vẻ nhiễm độc kim loại nặng như Cadmium

1.3 Các công trình nghiên cứu trên thé giới và ở Việt Nam liên quan đến ảnh hưởng của độc tính Cadmium

1.3.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới

Viswanadh và cộng sự (2010) đã nghiên cứu về tác dụng kháng độc tô của mangiferin (MNG) đối với sự thay đôi các nông độ CdCl› Chuột được tiêm một liều MGN tồi ưu trong phúc mạc (2,5 mg/kg thé trong) trước khi thử nghiệm với các nông

độ CdCl: khác nhau (6, 7, 8, 9 và 10 mg/kg thé trọng) Việc thử nghiệm chuột bằng các liều CdCl: khác nhau dan đến sự gia tăng phụ thuộc vào liều vào tan số của hồng

cau đa sắc vi nhân (MnPCE) va hong cau bình thường (MnNCE) Hơn nữa, việc tiền

xử lí MGN đã làm giảm hàm lượng peroxid hoá lipid (LPX) trong gan, trong khi đó

lại thay sự gia tăng đáng kế ở hoạt động của Glutathione (GSH),

glutathione-S-transferase (GST), Superoxide effutase (SOD) va Catalase (CAT) ở gan Nghiên cứu

của cho thay MGN có tác dụng gây độc kháng nguyên mạnh chống lại độc tính do

được tiến hành trên chuột cái trưởng thành (Rattus Norvegicus) bằng cách sử dụng ở

liều uống cấp tính (60 mg/kg thẻ trọng) trong 90 ngày Kết quả cho thay rằng rằng

liều cấp tính này đã gây ra một số tác động tiêu cực đáng ké đối với sức khoẻ chuột Những tác động bao gồm: giảm cân, tỉ lệ tử vong cao, tăng mức độ protein,

phosphatase acid, phosphatase kiềm, alanine aminotransferase và aspartate

aminotransferase trong tất cả các mô mềm Ngoài ra, Cd cũng đã ức chế mức độ

acetylcholinesterase trong tất cá các mô, làm chậm tốc độ tăng trưởng và gây ra việc

mở âm đạo muộn Kết quả từ nghiên cứu mô học của buông trứng cho thay tình trạng

teo nhỏ của buồng trứng ở tất cả các giai đoạn hình thành nang trứng, dẫn đến khá

năng sinh sản giảm sút [26].

Hounkpatin và cộng sự (2012) đã thực hiện nghiên cứu nhằm xác định độc tínhhuyết học của Cd, thủy ngân và đánh giá vai trò kháng oxy hoá của vitamin C với hai

tác nhân này Trong nghiên cứu nay, 65 con chuột được chia thành 13 lô, mỗi lô 5

con, được thành 2 nhóm Các nhóm này được gây nhiễm với hai liều lượng khác nhau

của mỗi kim loại (liều cao và liễu thấp) qua đường uống trong 28 ngày liên tiếp Nông

độ đã được chuẩn bị cho thí nghiệm (0,25 mg/kg, 2,5 mg/kg) đối với CdCh; (0,12

mg/kg, 1.2 mg/kg) đối với HgCh va vitamin C (150 mg/kg) Kết quả nghiên cứu cho

thay Cd ở liều thấp (0,25 mg/kg b.w) làm giảm các số lượng bạch cau, hồng câu,Hemoglobin (HGB), Hematocrit (HCT), nhưng làm tang số lượng tiêu cầu Nhưng ởliều cao (2,5 mg/kg b.w), Cd tác động tiếp tục làm giảm số lượng bach cầu, hồng cầu,

tăng nhẹ HGB, HCT vả vẫn tăng mạnh đối với tiêu câu [27].

Horiguchi và cộng sự (1026) gây nhiễm bằng cách tiêm Cd vào chuột BALB/c

ở liều 2,5 mg/kg ip và LPS ở mức 0,5 mg/kg ip Kết quả cho thấy, ở chuột được nhiễm

Cd, số lượng bạch câu trung tính tăng đều đặn đến 24 giờ, trong khi chuột được điều

trị bằng LPS cho thay bạch cau tăng nhanh hơn, đỉnh điểm là 12 giờ Những kết qua

nay chỉ ra rằng Cd có tác dung đặc trưng là làm chậm cảm ứng G-CSF ở gan, gây

viêm toàn thân kèm theo bạch cau trung tính kéo dai [28]

Sharaf và cộng sự (2017) tập trung vào việc xác định độc tính huyết học vànhững thay đổi sinh hoá ở chuột nhất đực bị ảnh hưởng khi uống một liêu duy nhất

cadmium clorua (3 mg/kg b.w) trong 30 ngày Kết quả cho thay Cd làm giảm khối

lượng cơ thẻ chuột đáng so với nhóm chuột đối chứng không uống Cd (106 g so với

203 g, tương ứng Các chỉ số huyết học có những biến đôi khác nhau: bạch cầu và

tiểu cầu tăng mạnh so với đối chứng; hỏng cầu và HGB giảm mạnh (p < 0,05) [23].Trong năm này, Atanbaeva và cộng sự đã nghiên cứu sự nhiễm độc một số kim loại

nặng gây ton thương các tế bào máu trong cơ thé động vật và làm suy yếu kha năng

miễn địch, trong đó có Cd Khi tăng mức độ ngộ độc lên gấp 100 lần, cơ thê động vật

đã có dau hiệu ngộ độc mạnh, cuối cùng toan bộ chuột thí nghiệm déu chết trong

vòng 5-6 ngày Ngoài ra, kết qua còn cho thấy bach cầu trung tính chuột thí nghiệm

tăng và giảm bạch cầu lympho [29] Cũng trong năm này, Arbi và cộng sự đã nghiên

cứu ảnh hưởng của việc tiếp xúc lâu đài với thủy ngân và cadmium đơn thuần vả kếthợp lên hệ thông đông máu của chuột Sprague-Dawley 4 con chuột đực Spraguc-

Dawley được tiếp xúc với cadmium (Cd) và thủy ngân (Hg), đơn độc hoặc kết hợp,

trong 28 ngày với liều lượng tương đương 1000 lần giới hạn của Tô chức Y tế Thế

giới Kết quả cho thay Cd làm tăng đáng ké độ day của sợi fibrin và gây ra sự kết tụ

và hình thành các cặn lắng dày đặc (DMD) Hg làm giảm sự hình thành mang lưới

fibrin [30].

1.3.2 Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam

Cho đến hiện nay, ở Việt Nam vẫn chưa có nhiều công trình khoa học nghiên

cứu về ảnh hưởng của độc tính Cadmium lên các chỉ số huyết học chuột nhất tring

trong thời gian dài (trên 30 ngay) Vi vậy, việc thực hiện đề tai nay góp phần cung

cap dẫn liệu khoa học có thé làm cơ sở cho các bước nghiền cứu tiếp theo.

Chương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

Khoá luận được tiễn hành từ tháng 09/2023 đến tháng 04/2024 tại Phòng thí nghiệm Giải phẫu — Sinh lí Người & Động vật (M103), Trường Dai học Sư phạm

Thanh phố Hồ Chí Minh

2.2 Dụng cụ, thiết bị và hoá chất

2.2.1 Dụng cụ, thiết bị dùng chăm sóc chuột và thu mẫu máu chuộtCác dụng cụ thiết bị chính sử dụng cho dé tài được thé hiện ở Bảng 2.1 và 2.2

Bảng 2.1 Dụng cụ, thiết bị chăm sóc chuột

Tên dụng cụ thiết bị Xuất xứ

| 6 | Nhiệt kế điện tir do nhiệt độ và độ âm Đức

Bảng 2.2 Dụng cụ, thiết bị lấy máu chuột và quan sát tiêu bản

STT | Tên dung cu, thiết bị Hãng sản xuất Xuất xứ

| Kính hiền vi soi nôi Nikon Nhật

Kính hiển vi quang học Nhật

3 Kính hiền vi đảo ngược Nikon Nhat

P16 [Ding hb mei id Trg ub

Pit [Bipot =i Strip =i an Mac

2.2.2 Hoá chất và dung dich thi nghiệmCác hoá chất chính sử dung cho đề tải được thé hiện ở Bang 2.3

Bảng 2.3 Hoá chất pha dung dịch thí nghiệm

Cadmium chloride ngậm nước Đức

(CáCla.2,SH>O)

Scharlab SL _ | Tây Ban Nha

dẫn của [21] trước một ngày, bảo quản ở ngăn mát tủ lạnh (4°C) và ghi rõ thông tin

về tên dung địch, thời gian pha

Dung dich hồng cầu Hayem: 5 g NazSO¿ + 1 g NaCl + nước cat vừa đủ 100 mL

dung địch.

Dung dich bạch cầu Lazarus: 5 mL acid acetic nguyên chất + 20 giọt xanhmetylen 1% + nước cất vừa đủ 100 mL

Dung dịch Magie sulfate 14%: MgSOs: 14 g; nước cat vừa đủ 100 mL

Dung dich Giemsa: 7,6 g Giemsa + 750 mL methanol + 250 mL glycerin.

Dung dich chống đông 5%: 5,0 g natri citrate; nước cất vừa đủ 100 mL.

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Bố trí thí nghiệm

Cơ sở chọn các nông độ Cd: (i) theo Acharya và cộng sự (2008) cho thay liều 1,0

mg CdCls/kg/ngày trong 5 - § tuần thí nghiệm đã ảnh hướng đến chức năng sinh sản của

chuột đực {31]: (ii) theo Sharaf và cộng sự (2017) cho thấy chuột rat bị nhiễm độc Cd (3,0

my/kg b.w) trong 30 ngày bị giám khối lượng cơ thé, giảm số lượng hông cầu, Hb nhưng

lại làm tăng các chỉ sé bach cầu, tiểu cầu, men gan (AST, ALT, ALP), ure, creatin va

protein tong số; làm thận bj phù [23]; (iti) theo nghiên cứu cua Ali và cộng sự (2012), LDsocủa Cd từ CdCh là 5.98 mg/kg b.w theo đường tiêm [32]; (iv) kế thừa kết quả nghiên cứu

của nhóm nghiên cứu khoa học có LD«(Lethal dose — liều gây chết 50%) của Cd từ

CdCh.2,5H20 là 70 mg/kg b.w Như vậy, liều chon đề gây tác động độc tinh ban trường

diễn thường khoảng 1/10 LDsp Ngoài ra, theo Đỗ Trung Dam, 2014, liều độc bán trường điển khoảng 1/10 LDSO hoặc nhỏ hon dé dam bảo chi số điều trị TI (Therapeutic index),

tỉ số giữa liều gây chết trung bình LDsp va liều hữu hiệu trung bình ED50 (Effective dose),

> 10 [33] Vi thế, các nồng độ Cd** 1 mg/kg b.w, 3 mg/kg b.w và 6 mg/kg b.w được chon

dé khảo sát trong thí nghiệm này

Bồ trí thí nghiệm: 36 chuột đạt tiêu chuẩn làm thí nghiệm được phân chia vào 3 nghiệm thức thí nghiệm ứng với 3 nông độ Cd khảo sát va 1 nghiệm thức đối chứng (không gây nhiễm Cd) Mỗi nghiệm thức gồm 9 chuột và được đánh dấu theo thứ tự

cô định ở đuôi cho từng con ở từng nghiệm thức Cụ thé từng nghiệm thức như sau:

Nghiệm thức 1 - Đối chứng (ĐC): chuột uống nước máy khử clo bình thường.

Nghiệm thức 2 (Cd1): chuột uéng Cd** với nồng độ 1 mg/kg b.w

Nghiệm thức 3 (Cd3): chuột uống Cd** với nồng độ 3 mg/kg b.w.

Nghiệm thức 4 (Cd6): chuột uống Cd?" với nông độ 6 mg/kg b.w.

Dé tải được Hội đồng đạo đức trong nghiên cứu trên động vật (ACUCUS) chap

thuận với mã số hồ số 1211/KHTN - ACUCUS ngày 11 tháng 12 năm 2023 (Phụ lục 2).

Các thí nghiệm của khoá luận được bồ trí theo sơ đồ Hình 2.1 và Hình 2.2

Ôn định chuột trong phòng thí nghiệm 2 tuần

Độ tăng trọng

+ Số lượng tế bào máu

F P ” + Đường kính hong cầu

Kiém tra chat lượng chuột ‹ Hàm lượng Hb

Hình 2.2 Bồ trí chuồng nuôi chuột thí nghiệm ở các nghiệm thức

2.3.1 Phương pháp chăm sóc chuột

Chuột nhất trắng đực (Mus musculus var albino) 4 tuần tuôi được mua từ Viện

Pasteur Thành phố Hồ Chí Minh Chuột được nuôi ôn định ở điều kiện phòng thínghiệm trong 2 tuần cho dat trọng lượng 19 - 21g (6 tuần tuổi) trước khi tiền hành

thí nghiệm.

Điều kiện nuôi: Chuột được nuôi trong lồng kính kích thước 30x19x19 cm’,

dưới nền chuông lót trau, trên nắp chuồng đậy bằng lưới inox (4 - 5 con/chudng); chu

ki sáng tối (10 giờ sáng va 14 giờ tôi) ở nhiệt độ phòng (27 28°C), có độ âm từ 57

-80% được ghi nhận bởi máy đo nhiệt ké điện tử đặt trong phòng Thức ăn cho chuột

là viên thức ăn tông hợp chuyên cho chuột được mua từ viện Sinh học Nhiệt đới,

nước uống là gồm nước sinh hoạt của phòng thí nghiệm Chuột được cho ăn, bỏ sung

nước uống vào lúc 7 giờ và 17 giờ hàng ngày Chuông nuôi được thay trấu 2 - 3

ngay/lan.

2.3.4 Phương pháp nghiên cứu

2.3.4.1 Phương pháp chuẩn bj dung dich cadmium chloride

Pha dung dich muôi cadmium chloride ngậm nước (CdCl2.2,5H20) dat nong độ

60 mg/kg b.w:

Từ dung dich muối cadmium chloride ngậm nước (CdCl›.2.SH:O) có nồng độ

60 mg/kg b.w, tính toán dé pha ra lượng dung dịch cần cho từng chuột trong từng

nghiệm thức uống, dam bảo tương ứng với 3 nông độ Cd”' | mg/kg thê trong, Cd?”

3mg/kg thé trọng va Cd?’ 6 mg/kg b.w.

2.3.4.2 Phương pháp cho chuột uống dung địch cadmium chlorideNước nhiễm Cd?" được cho chuột uống

bằng cách dùng xi lanh 1 mL gắn với đầu kim

chuyên dụng (đầu tròn) bơm trực tiếp qua miệng

xuống thực quản (Hình 2.3) Thời gian cho uống

vao lúc 06 — 07 giờ sang hàng ngay, trước khi cho

chuột ăn 30 phút Theo dõi và ghi nhận các dấu

hiệu bất thường hằng ngày vào số nhật kí

Hình 2.3 Thao tác cho chuột uống

2.3.4.3 Phương pháp khảo sát độ tăng trọng

Cân khôi lượng cơ thé từng con chuột tương ứng với mỗi nồng độ theo từng nghiệm

thức vao budi sáng trước khi cho ăn với chu ki

2 tuan/lan (Hình 2.4) Ghi chép thông số theo

nghiệm thức Từ kết quá này sẽ tính được độ

tăng trọng của chuột sau mỗi hai nuôi ở từng

nghiệm thức Độ tăng trọng của chuột tại thời

điểm khảo sát được tính bang cách lấy khỗi

lượng cơ thẻ chuột tại thời điểm khảo sát trừ đi

khối lượng cơ thé chuột tại thời điềm tuần Hình 5.4 Hình ảnh minh hoa

trước đó cân khối lượng cơ thể chuột

2.3.4.4 Phương pháp thu nhận mẫu máu chuột Trước khi lấy máu, cho chuột nhịn đói một đêm hôm trước, sáng hôm sau tiễn hành lay máu Chu kì 4 tuan/lan, lay máu ở tĩnh mạch đuôi chuột đề đánh giá một số chỉ số huyết học: số lượng hồng cau, bạch cau, tiêu cầu, Hb, thời gian đông máu và kích thước hồng cau Cách lay máu chuột như sau:

+ Cho chuột vảo | falcon nhựa 50 mL, dé lộ đuôi chuột ra phía ngoài.

+ Dùng bông gòn tam cồn 70° sát trùng, dùng kim trích lấy máu ở tĩnh machđuôi chuột đẻ thực hiện khảo sát các chỉ số huyết học nêu trên (Hình 2.5)

2.3.4.5 Phương pháp xác định số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu va

hàm lượng Hb

Các phương pháp này đều thực hiện theo hướng dẫn trong Giáo trình thực hành

Sinh li học người vả động vật, trong đó số lượng tiêu cầu được xác định theo phương

pháp Fonio [34] Mau máu chuột được thu nhận từ tinh mạch đuôi (Hình 2.6).

Phương pháp xác định số lượng hồng cầu và bạch cầu

Hình 2.6 Minh hoạ thao tác xác định số lượng hồng cầu và bạch cầu

Bước 1: Chuẩn bị buông đêm

Làm vệ sinh buồng đếm lamella và ống trộn hồng cau, thông ống trộn hồng cầu

bằng ether và dé khô (hoặc tráng ông trộn hồng cầu bằng dung dịch chống đông) Day

lamella trên lưới đếm của buồng đếm và đua lên kính hiển vi kiểm tra ở vật kính X10

Bước 2: Lay mẫu máu và pha loãng máuDùng côn sát trùng vị trí lay máu, chờ cho khô Dùng kim trích máu vô trùng

dé lay máu Lay bông gòn lau sạch giọt máu đầu tiên, dùng tay nặn và chờ cho máu tiếp tục chảy ra dé lay máu.

Dùng ống trộn hông câu/bạch cầu hút máu đến vạch 0,5 Nếu máu lên quá vạch

thì dang bông gòn thắm nhẹ ở đầu ống Thao tác phải đứt khoát, tránh bọt khí vào

ống trộn.

Tiếp tục hút thêm dung dịch hồng cau vào ống trộn hồng cầu đến vạch 101 (với ống

trộn bạch cau là vạch L1) Như vậy, máu đã được pha loãng 200 lần (với máu trong ốngtrộn bạch cầu là được pha loãng 20 lần) Nếu muốn pha loãng máu 100 lần, ta hút máu đếnvạch số 1, rồi tiếp tục hút hung địch pha loãng đến vạch 101 Dùng ngón tay cái và ngóngiữa bịt hai đầu ống trộn và lắc đều dé trộn máu với dung dịch pha loãng

Bước 3: Dàn máu vào buồng đêm

Bỏ vải giọt đầu trong ống trộn đặt đầu ống trộn vào cạnh của lamelle tiếp giáp

với buông đếm, nhờ lực mao dan, máu pha loãng sẽ tràn đều vào buồng đếm (tránh

dé máu tran vào quá nhiều, kết quả không chính xác) Đưa buồng dém lên kính hiền

vi và tiếng hành đếm số lượng hồng cau/bach cau.

Bước 4: Cách đếm

Chỉnh buông đếm hiện rõ ở thị trường, chuyên qua vật kính X40, đếm số lượng

hồng cầu thuộc 5 6 trung bình (80 ô nhỏ) bao gồm đếm 4 ô ở 4 góc lưới đếm và 1 ô

ở giữa vị trí trung tâm Việc xác định hồng cầu thuộc một ô được tuân theo nguyên

tắc Egorov như trên (với số lượng bạch cầu đếm 25 6 trung bình (400 ô nhỏ) ở giữa

trung tâm, ta được B bạch cầu).

Bước 5: Cách tính số lượng tế bào hong câu/bạch cau trong 1 mì mau

Gọi số hồng cầu đếm được trong 80 6 vuông nhỏ là A, điện tích 1 ô vuông nhỏ

là 1/4000 mmỶ, máu pha loãng 200 lần Do đó, số lượng tế bảo hồng cau trong 1 mm} máu

hồng cau, căn cứ vào số lượng hồng cầu có trong 1 mm máu dé tính ra số lượng tiểu

cau trong | mm? mau.

Phuong phap xac dinh ham lugng hemoglobinDung dich HCI 0,1N được thêm vào huyết sắc kế Sahli tới vạch thấp nhất Tiếp

theo, sử dung kim trích máu lay máu ở tinh mạch đuôi chuột, hút máu vào pipette Sahliđến vạch 0,02 mL Mẫu máu sau đó được chuyền vào đáy huyết sắc kế Sahli có sẵn

chứa HCI 0,1N Máu được thôi nhẹ nhàng vào ông đề lắng xuống đáy, sau đó hút dung

dịch HCI được hút lên ống dé rửa sạch máu trong pipette Sau khi khuấy đều bằng đũa

thủy tinh, mẫu được dé yên trong 5 phút đẻ HCI tác dụng với máu thành dung dịch

hematin chlohydrate có mau nâu sam.

Ong sau đó được đặt vào giá, từng giọt nước cất được thêm vào mẫu và khuấy

đều băng đũa thủy tinh Việc thêm nước cất tiếp tục cho đến khi quan sát thấy màu của

3 ống trên giá đồng nhất Tại thời điểm nay, chi số tương ứng trên bảng chia độ thứ được ghi nhận (Hình 2.7) Day là nồng độ Hb trong máu với đơn vị 2% (trong 100 g

dung dịch chứa số gram Hb) hay g/dL máu

2.3.4.6 Phương pháp xác định thời gian đông máu

Xác định bằng phương pháp Milian: Dùng 2 lame kính sạch và khô, lấy mẫumáu tir tĩnh mạch chuột nhỏ vào mỗi lame kính 1 giọt (đường kính 1 cm), bam đồng

hồ ngay khi chảy máu Đặt 2 lame kính vào đĩa petri và đậy lại (Hình 2.8) Sau 2 phút,

nhac lame | rồi nghiêng một góc 45° xem giọt máu đã đông chưa, cứ 30 giây kiểm

tra cho đến khi nghiêng lame kinh giọt máu không thay đôi hình dang là máu đã đông

Lame thứ 2 cũng quan sát như vậy cho tới khi máu đông Bam đồng hồ dừng lại Thời

gian đông máu tính cho đến khi máu đông ở phiến kính thứ 2

Hình 2.8 Minh hoa thao tác xác định tốc độ đông máu

2.3.4.7 Phương pháp xác định hematocrit

Cho một lượng máu vào ống mao dẫn hematocrit , đo độ dài của phần máu trong

ống mao quản bằng thước kẹp điện tứ (H1); li tâm ống mao quán chứa mẫu máu ở

tốc độ (3200 vòng/phú®) trong 15 phút Dùng thước kẹp điện tử đo phần huyết thanh

phía trên (H2) (Hình 2.9) Chỉ số hemacrotit được xác định bằng công thức: (H1

-H2)/H1* 100%.

Hình 2.9 Minh hoa thao tác xác định chỉ số hematocrit

te

2.3.4.8 Phương pháp làm tiêu bản máu

Các bước làm tiêu bản máu được thực hiện theo hướng dẫn trong giáo trình thực

hành Sinh lí học người và động vật [34], cụ thé gồm 4 bước (Hình 2.10):

Bước I: Chuẩn bị mẫu máu: ding côn sát trùng vị trí lay máu, chờ cho khô.Nhỏ giọt dung dịch MgSOy 14% lên vi trí lay máu vừa sát trùng Dùng kim trích máu

vô trùng chích qua giọt MgSO dé máu chảy tự nhiên hoà với dung dich Lay máu

này làm tiêu bản và nhuộm Giemsa.

Bước 2: Dàn mỏng mẫu máu: lẫy mẫu máu đã chuẩn bị ở bước | bỏ vài giọt

dau, cham nhẹ | giot mau lén cuỗi lame thứ nhất Lay lame 2 cham vào giọt mau với góc nghiêng 30 - 45°, dé giọt mau lan theo cạnh lame rồi kéo lame 2 từ dau này sang

đầu kia với tốc độ vừa phải nhưng vẫn giữ nguyên với góc nghiêng như vậy lúc này

ta đã dàn đều giọt máu thành lớp mỏng trên lame Dé tiêu bản máu khô tự nhiên hoặc

có thê dùng gió, tủ ấm, hơ nhẹ trên đèn côn làm khô tiêu bản

Bước 3: Cổ định tiêu bản: sử dụng con methylic nhỏ đều trên tiêu bản máu, sau

đó dé đứng tiêu bản trên giá cho alcohol chảy hết và dé tiêu ban khô tự nhiên

Bước 4: Nhuộm tiêu bản: tuỳ vào phương pháp sử dụng thuốc nhuộm người ta

có thé tiền hành nhuộm đơn hoặc nhuộm kép Tiêu ban máu đã được cô định bằng

alcohol được ngâm trong dung dich Giemsa (2 mL Giemsa pha với 18 mL nước cat,

lắc đều) trong 15 - 20 phút (có thé nhỏ dung dich Giemsa phủ đều trên mẫu máu của tiêu bản đã có định khi không ding cốc ngâm lame) Gác các lame mẫu lên các thanh thủy tinh năm ngang trên miệng một chậu thủy tinh, tránh hoá chất chạm vao tay và quần áo người làm Rửa tiêu bản bằng nước cắt một góc nghiêng (không đẻ nước

chảy vào chỗ có tiêu bản máu) đến khi nước trong, không còn phai màu Đề khô mẫu

tự nhiên (hoặc say khô nhẹ trong tủ ấm hay trên ngọn đèn côn).

Hình 2.10 Minh hoa thao tác làm tiêu bản máu chuột

2.3.4.9 Phương pháp xác định kích thước hồng cầu Quan sát mẫu tiêu ban máu dưới kính hiện vi Sử dụng phan mềm S — Eye do ban kính của các hong cầu Mỗi nghiệm thức lấy ngẫu nhiên các lame và tiến hành đo bán

kinh của 300 hồng cau, xuất số liệu dang file excel, thống kê vả ghi nhận kết quả

(Hình 2.11).

a eur aur

Hình 2.11 Minh hoa do kích thước hồng cầu bằng phần mén S — Eye 2.3.4.10 Phương pháp xử lí số liệu

Tat cả số liệu của đề tài được xử lí theo các thuật toán xác suất thong kê trên máy vi

tính bằng phần mềm Graphpad Prism 9.2 Các số liệu trung bình được trình bay ở dạng số liệu trung bình (TB) và độ lệch chuẩn (Standard Deviation - SD) Các so sánh khác biệt trong phân tích phương sai một va hai yếu t6 (ANOVA) đều sử dụng thử nghiệm Tukey với mức ý nghĩa là 0,05 (p < 0,05 thì sự sai khác có ý nghĩa thông kê).

Chương 3 KET QUÁ VA BAN LUẬN

3.1 Ảnh hưởng độc tinh Cadmium lên độ tăng trọng cơ thé chuột

Trước khi tiễn hành thí nghiệm, tông số có 36 con chuột được kiểm tra cân nặng

và kết qua can nặng trung bình của chuột đưa vảo thí nghiệm dat 21,32 + 0,66 g (p=

0,8381) (xem phụ lục 1.2), thoả mãn điều kiện ban đầu là chuột phải đạt 19 - 21 g Điều này đảm bảo các điều kiện thí nghiệm đồng nhất và làm cơ sở đánh giá kết quả của thí nghiệm về sau Từ phụ lục 1.2, kết quả về độ tăng trọng trung bình của

các nghiệm thức khảo sát qua mỗi 2 tuần thí nghiệm được thé hiện ở Hình 3.1

Hình 3.1 Biểu đồ thé hiện độ tăng trọng của chuột tại

các nghiệm thức thử nghiệm qua các tuần nuôi Kết quả từ Phụ lục 1.3 cho thấy:

Sau 2 tuần khảo sát, khối lượng cơ thé của chuột tăng rất mạnh ở nghiệm thức

ĐC, nghiệm thức Cdl cũng tăng nhưng chi bằng 1/2 lần nghiệm thức DC, độ tăng trọng

đao động trung bình trong khoảng 2,58 — 4,37 g Khối lượng cơ thé của chuột cũnggiảm rất mạnh ở nghiệm thức Cd3 và Cd6, độ giảm trong dao động trung bình trong

khoảng 2,28 — 4,06 g (gap 4— 6 lần so với nghiệm thức ĐC) Trong đó, độ tăng trọng

của chuột ở nghiệm thức Cdé6 là thấp nhất và khác biệt có ý nghĩa (p = 0.0014) so với

nghiệm thức ĐC Độ tăng trọng của chuột ở nghiệm thức ĐC là cao nhất và khác biệt

có ý nghĩa (p = 0.0014) so với nghiệm thức Cd6 (xem phụ lục 1.3) Kết quả này cho thay, nòng độ Cdˆ* 3 mg/kg b.w và 6 mg/kg b.w làm giảm độ tăng trọng cơ thé của chuột

sau 2 tuần thí nghiệm trong đó nồng độ 6 mg/kg b.w làm giảm độ tăng trọng của chuột

sau 2 tuần thí nghiệm mạnh nhất.

Sau 4 tuần thí nghiệm, độ tăng trọng ở nghiệm thức Cd3 là cao nhất (gấp 3 lần

so với nghiệm thức DC) và ở nghiệm thức Cd6 là thấp nhất (gap 2 lần so với nghiệm thức DC) Sự khác biệt vẻ độ tăng trọng trung bình ở các nghiệm thức trong thời gian

này đều không có ý nghĩa thong kê Kết qua nay cho thấy, nồng độ Cd°” 6 mg/kg b.w

làm giảm độ tăng trọng cơ thé của chuột sau 4 tuần thí nghiệm; nồng độ Cd°* 3 mg/kg

b.w lam tăng độ tăng trọng cơ thé của chuột sau 4 tuần thí nghiệm tuy nhiên sự tương

quan tăng — giảm này không đáng kẻ.

Sau 6 tuần thí nghiệm, trọng lượng cia chuột có xu hướng giảm ở tat cả các

nghiệm thức so với 2 tuần trước đó, riêng nghiệm thức Cd6 có độ tăng trong giảmmạnh nhất (gap 2 lần nghiệm thức DC) Độ tăng trọng ở nghiệm thức Cdl là cao nhất(gap 1.5 lần nghiệm thức DC) Sự khác biệt về độ tăng trọng trung bình ở các nghiệm

thức trong thời gian này đều không có ý nghĩa thống kê Kết quả này cho thấy, nồng

độ Cd** 6 mg/kg b.w lam giảm độ tăng trọng cơ thé của chuột sau 4 tuần thí nghiệm;

Nông độ Cd?" 3 mg/kg b.w làm tăng độ tăng trọng cơ thẻ của chuột sau 4 tuần thí nghiệm, tuy nhiên sự tương quan tăng — giảm nay không đáng kẻ.

Sau § tuần thí nghiệm, khối lượng cơ thê của chuột có xu hướng giảm ở các

nghiệm thức Nhìn chung, sau § tuần nuôi, độ tăng trọng của chuột ở các nghiệm thứcsắp xép theo thức tự như sau (sắp xép theo thức tự độ tăng trọng tăng dan): Cdl < Cd6

< Cđ3 < DC (Hình 3.1) Sự khác biệt về độ tăng trọng trung bình ở các nghiệm thứctrong thời gian nay đêu không có ý nghĩa thống kê

Nhìn chung, kết quả của nghiên cứu này cho thay, trong 6 tuần dau, tốc độ tăng

trọng của chuột giảm dan theo sự tăng dan nồng độ Cd khảo sát so với nghiệm thức

đôi chứng trong đó 2 tuần đầu là thê hiện rõ sự cách biệt ở nông độ 3 và 6 mg/kg b.w

so với nông độ 1 mg/kg b.w Nhưng ở 2 tuần cuối, tốc độ tăng trọng không theo quy

luật như 6 tuần đầu ma thay vào đó là nồng độ 1 mg/kg b.w cũng có kết quả tương

đương néng độ 6 mg/kg b.w tức làm giảm độ tăng trong của chuột Nhu vậy 3 nồng

độ Cd khảo sát đã ảnh hưởng đến tốc độ tăng trong của chuột, thẻ hiện rõ ở 6 tuầnđầu gây nhiễm

Bàn luận

Kết quả đề tai này tương đồng với một số nghiên cứu trước đó Nghiên cứu [35]

cho thấy rang, chuột được tiêm Cd?* qua màng bung sau 8 ngày dẫn đếntốc độ tăng trọng cơ thẻ bị chậm lại so với nhóm đối chứng Theo [36], những con chuột đực được cho ăn gạo bị nhiễm Cd (0.005 và 0.74 mg/kg b.w) đã giảm trọng lượng cơ thé

từ 19,8 xuống 17,5 g sau một tháng Nghiên cứu [37] cho thay rằng việc gây nhiễmchuột bằng cách tiêm Pb-Cd dưới da với tỉ lệ 50: 1 trong 35 ngày làm cho chuột chan

ăn, thường xuyên bị stress, hoạt động giảm sút rõ rệt, khôi lượng giảm và lông bị kích ứng hoặc khô Theo [38], các con chuột được gây nhiễm với Cd (1, 10 và 100 pg/L)

trong nước uống từ tuôi bỗ me cho đến khi đạt 10 tuần tuôi sau ra đời, đã dẫn đếntăng trọng lượng cơ thẻ ban đầu tăng nhưng sau đó giảm ở các tuần tiếp theo, đặc biệt

là đối với Cd (10 và 100 ug/L) Theo [39] Chuột đực Sprague-Dawley được chouống CdCh (25, 50, 100 và 150 mg/kg b.w), dẫn đến giảm khối lượng cơ thé trong3-4 ngày dau, đặc biệt là ở nhỏm dùng liều cao

Khoi lượng cơ thé là thông số quan trong dùng dé đánh giá tình trạng sức khỏe của động vật thí nghiệm Kết quả đẻ tai nay cho thay rằng Cd đã có ảnh hưởng đáng kẻ đến độ tăng trọng cơ thê chuột ở các nghiệm thức được gây nhiễm Cd trong 6 tuân dau, đặc biệt

ở nghiệm thức Cd6 Nguyên nhân dẫn đến giảm khối lượng cơ thé ở chuột nhiễm độc Ca?*

có thé là do Cd ảnh hưởng đến sự hap thụ và phân phối các nguyên tô thiết yếu, làm giảm

sự hap thu phosphorus trong thức ăn, gây rồi loạn quá trình chuyển hoá acid amine, từ đó

làm giảm quá trình tông protein [35] Các nghiên cứu khác cũng chỉ ra rằng phơi nhiễm

Cd có ảnh hưởng đến chức năng trao đôi chất của hệ niêm mạc ruột, chủ yếu liên quan đến tác động lên chuyển hoá carbohydrate, aciđ amine và lipid đo tác đụng lên hoạt động của

vi sinh vật ở niêm mạc ruột, từ đó làm chậm quá trình chuyên hoá các chất, dẫn đến khôi

lượng cơ thê chuột bị giảm đáng kẻ [40].

3.2 Anh hưởng độc tính Cadmium lên số lượng hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, chi số hematocrit, nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu

và kích thước hồng cầu

3.2.1 Số lượng hồng cầu trung bình

Từ Phụ lục 2.1.2, kết quả về số lượng hồng cau trung bình của các nghiệm thứckhảo sát qua mỗi 4 tuần thí nghiệm được thê hiện ở Hình 3.2 Số lượng tế bảo hồng

cau trung bình của chuột ở lần lấy máu dau tiên (tuần 0, trước khi đưa vào bồ trí thí nghiệm) ở các nghiệm thức thử nghiệm dao động trong khoảng 8,75 — 9,67*10° tế bao/mm máu (p = 0.9927) Như vậy, số chuột đưa vào thí nghiệm có số lượng hồng

cầu ban đầu tương đương nhau và nằm trong khoảng giới hạn tham chiếu (7 - 13x10

tế bào/mmẺ [12]) Điều lam cơ sở đánh giá kết quả của thí nghiệm về sau.

*

9.35 9-66 935 936 974 923 969 BS Cd3

Số lượng hồng cầu (10°TB/mm*)

Tuan 4

Thời gian (tuân)

Hình 3.2 Biểu đồ thé hiện số lượng hồng cầu của chuột tại

các nghiệm thức thử nghiệm qua các tuần nuôi

Kết quả từ Hinh 3.2 cho thấy:

Theo thời gian thí nghiệm, ở nghiệm thức Cdl, số lượng hồng cau tăng rất mạnh

ở tuần 4 và tuần 8, sự thay đôi này có ý nghĩa thống kê (p = 0.0003) Ở nghiệm thức

Cd3, số lượng hông cầu giảm ở tuần 4 nhưng tăng mạnh ở tuân 8, sự thay đôi nay có

ý nghĩa thông kê (p = 0,0047) Ở nghiệm thức Cd6, số lượng hỏng cầu giảm mạnh ở

tuần 4 (gấp đôi nghiệm thức DC) nhưng tăng mạnh ở tuần 8, sự thay đôi nay cũng có

ý nghĩa thông kê (p < 0.0001).

Từ Phụ lục 2.1.3 cho thấy:

Theo nghiệm thức thử nghiệm qua mỗi 4 tuần nuôi, sau 4 tuần thí nghiệm, số

lượng hong cau của chuột ở nghiệm thức Cdl là cao nhất, sự khác biệt này có ý nghĩa

thống kê (p < 0.0001) đôi với nghiệm thức Cd6, số lượng hông cầu chuột ở nghiệm

thức Cd6 là thấp nhất và có sự khác biệt có ý nghĩa thông kê với các nghiệm thức còn lại (p < 0,0001) Kết qua này cho thay, Cd? 1 mg/kg b.w làm tăng mạnh số lượng

hông cau của chuột sau 4 tuần thí nghiệm trong khi đó, Cd?" 6 mg/kg b.w làm giảm

số lượng hồng cầu của chuột sau 4 tuần thí nghiệm

Sau § tuần thí nghiệm số lượng hồng cầu của chuột ở nghiệm thức Cd1 và Cd3

vẫn là cao nhất, tuy nhiên khác biệt không có ý nghĩa so với các nghiệm thức còn lại.

Số lượng hồng câu của chuột ở nghiệm thức DC là thấp nhất, khác biệt cũng không

có ý nghĩa so với các nghiệm thức còn lại Kết quả này cho thấy, Cd** 1 mg/kg b.w làm tăng mạnh số lượng hồng cầu của chuột sau 8 tuần thí nghiệm, Cd?’ 6 mg/kg b.w làm tăng nhẹ số lượng hông cau của chuột sau 8 tuần thí nghiệm.

Kết quả trên cho thấy, nồng độ Cd?" 1 mg/kg b.w làm tăng mạnh số lượng hong

cầu của chuột sau 4 tuần thí nghiệm va 8 tuần thí nghiệm nồng độ Cd** 6 mg/kg b.w

làm giảm số lượng hồng cầu của chuột sau 4 tuần thí nghiệm và tăng nhẹ sau § tuần

bê tri thí nghiệm) ở các nghiệm thức dao động trong khoảng 15,34 — 15,38 g/dL máu, (p = 0.9952) Như vay, số chuột đưa vảo thí nghiệm có hàm lượng hemoglobin ban

đầu tương đương nhau và nằm trong khoảng giới hạn tham chiếu (12,2 - 16,2 g/dL

[12]) Điều làm cơ sở đánh giá kết qua của thí nghiệm về sau.

Thời gian (tuần)

Hình 3.3 Biểu đồ thể hiện hàm lượng hemoglobin của chuột

tại các nghiệm thức thử nghiệm qua các tuần nuôi

Kết quả từ Hình 3.3 cho thấy:

Theo thời gian khảo sát, ở nghiệm thức Cdl, hàm lượng hemoglobin có xu

hướng tăng nhanh ở tuần 4 sau đó tăng nhẹ ở tuần 8, sự khác biệt nảy có ý nghĩa

thống kê (p = 0.0003) Trong khi đó, ở nghiệm thức Cd3, hàm lượng hemoglobin giảm nhẹ ở tuần 4 sau đó tăng mạnh ở tuần §, sự thay đôi này có ý nghĩa thống kê (p

<0.0001); Ở nghiệm thức Cd6, hàm lượng hemoglobin giảm mạnh ở tuần 4 sau đó tăng

mạnh ở tuần 8, sự thay đôi này có ý nghĩa thông kê (p < 0,0001).

Theo nghiệm thức thử nghiệm qua mỗi 4 tuần nuôi, Sau 4 tuần thí nghiệm, ham

lượng hemoglobin của chuột ở nghiệm thức Cd1 là cao nhất, sự khác biệt này có ý nghĩa thong kê với các nghiệm thức còn lại (p lần lượt = 0,00318, < 0,0001, <0,0001)

và ở nghiệm thức Cd6 là thấp nhất, sự khác biệt này có ý nghĩa thông kê với các