Nghiên cứu tổng hợp atenolol và metoprolol tartrat làm thuốc điều trị tim mạch

Đây là đề tài mới, lần đầu được thực hiện ở trong nước. Mục tiêu của đềtài: (theo đặt hàng của BộKH&CN) 1. Xây dựng quy trình tổng hợp và tinh chếatenolol qui mô pilot 2. Xây dựng quy trình tổng hợp và tinh chếmetoprolol tartrat qui mô pilot 3. Xây dựng tiêu chuẩn cơsởcho hai sản phẩm atenolol và metoprolol tartrat tương đương tiêu chuẩn Dược điển Anh BP 2005. 4. Đánh giá độ ổn định và xác định tuổi thọcủa sản phẩm atenolol và metoprolol tartrat 5. Đánh giá độc tính cấp và bán cấp của sản phẩm atenolol và metoprolol tartrat .

BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI CHƯƠNG TRÌNH KHCN TRỌNG ĐIỂM CẤP NHÀ NƯỚC KC10/06-10 CÁC BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ KẾT QUẢ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI "NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP ATENOLOL VÀ METOPROLOL TARTRAT LÀM THUỐC ĐIỀU TRỊ TIM MẠCH" MÃ SỐ: KC10.17/06-10 Cơ quan chủ trì đề tài: TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Chủ nhiệm đề tài: GS TSKH ĐẶNG NHƯ TẠI 8638 Hà Nội - 2010 BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI CHƯƠNG TRÌNH KHCN TRỌNG ĐIỂM CẤP NHÀ NƯỚC KC10/06-10 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI "NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP ATENOLOL VÀ METOPROLOL TARTRAT LÀM THUỐC ĐIỀU TRỊ TIM MẠCH" MÃ SỐ: KC10.17/06-10 Chủ nhiệm đề tài Trường Đại học KHTN GS.TSKH Đặng Như Tại Ban chủ nhiệm chương trình Bộ Khoa học Công nghệ Hà Nội - 2010 DANH MỤC CÁC BẢNG trang Bảng 1: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất phản ứng tổng hợp 24 axit p-hydroxy mandelic Bảng 2: Hiệu suất phản ứng tỷ lệ hai dạng epoxi 27 halohydrin Bảng 3: Các giá trị hấp thụ nhóm chức phổ hồng 51 ngoại sản phẩm Bảng 4: Phổ NMR sản phẩm atenolol 55 Bảng Kết kiểm nghiệm sản phẩm atenolol 61 Bảng Kết kiểm nghiệm sản phẩm metoprolol tartrat 62 Bảng Kết theo dõi độ ổn định 02 mẫu atenolol 63 Bảng Kết kiểm nghiệm mẫu theo thời gian lão hóa cấp 65 tốc Bảng Kết kiểm nghiệm mẫu theo thời gian lão hóa cấp 65 tốc 10 Bảng 10 Kết kiểm nghiệm mẫu theo thời gian lão hóa cấp 66 tốc 11 Bảng 11 Kết kiểm nghiệm 02 mẫu metoprolol tartrat bảo quản điều kiện PTN 68 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Stt trang Hình Sơ đồ tổng hợp thuốc thuộc nhóm chẹn thụ thể β 10 Hình Sơ đồ tổng hợp chất trung gian chìa khóa 4-hydroxy 12 phenylacetamid Hình Sơ đồ tổng hợp chất trung gian chìa khóa 4-(2-methoxy 13 ethyl)phenol Hình Các tạp chất atenolol 15 Hình Các tạp chất metoprolol tartrat 16 Hình 6: Phổ LC-MS sản phẩm xúc tác chuyển pha 27 Hình Phổ LC-MS sản phẩm xúc tác kiềm 28 Hình 8: Phổ LC-MS sản phẩm sử dụng hỗn hợp xúc tác 28 Hình Cơ chế phản ứng tạo thành dạng epoxi 30 10 Hình 10 Sơ đồ tổng hợp atenolol 31 11 Hình 11 Sơ đồ khối giai đoạn tổng hợp tinh chế atenolol 36 12 Hình 12 Phổ 1H-NMR metoprolol dung mơi DMSO-d6 39 13 Hình 13 Sơ đồ tổng hợp metoprolol 40 14 Hình 14 Sơ đồ khối giai đoạn tổng hợp tinh chế 46 metoprolol tartrat 15 Hình 15: Phổ hồng ngoại sản phẩm atenolol 51 16 Hình 16: Phổ khối MS sản phẩm 52 17 Hình 17: Phổ 13C-NMR sản phẩm atenolol 53 18 Hình 18: Phổ DEPT sản phẩm atenolol 53 19 Hình 19 Phổ 1H –NMR sản phẩm atenolol 54 20 Hình 20 Phổ 1H-NMR metoprolol dung mơi DMSO-d6 60 MỤC LỤC trang Báo cáo thống kê kết thực đề tài Danh mục bảng Danh mục hình vẽ, đồ thị MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Bệnh tim mạch loại Thuốc tim mạch chủ yếu 1.2 Thuốc chẹn thụ thể beta - Atenolol metoprolol tartrat 1.3 Các phương pháp tổng hợp atenolol metoprolol tartrat 10 1.4 Phương pháp tổng hợp hợp chất trung gian chìa khóa 11 1.4.1 Các phương pháp tổng hợp p-hydroxyphenyl acetamid 11 1.4.2 Các phương pháp tổng hợp 4-(2-methoxyethyl]phenol 13 Tạp chất liên quan phương pháp hạn chế tạp chất 14 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Phương pháp tổng hợp 17 2.2 Các phương pháp phổ phân tích cấu trúc 17 2.3 Các phương pháp kiểm nghiệm chất lượng sản phẩm 18 2.4 Phương pháp đánh giá độc tính cấp độc tính bán trường diễn 19 1.5 2.4.1 Phương pháp xác định độc tính cấp 19 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu độc tính bán trường diễn 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 Qui trình cơng nghệ tổng hợp atenolol 23 3.1 3.1.1 Thảo luận trình tổng hợp atenolol 23 3.1.2 Qui trình phịng thí nghiệm 31 3.1.3 Qui trình qui mơ pilot 35 3.2 37 Qui trình cơng nghệ tổng hợp metoprolol tartrat 3.2.1 Thảo luận trình tổng hợp metoprolol tartrat 37 3.2.2 Qui trình phịng thí nghiệm 40 3.2.3 Qui trình qui mơ pilot 46 3.3 48 Xác nhận cấu trúc hoạt chất tổng hợp 3.3.1 Phân tích xác định cấu trúc sản phẩm qui trình tổng hợp 48 atenolol 3.3.2 Phân tích xác định cấu trúc sản phẩm qui trình tổng hợp 57 metoprolol tartrat 3.4 Kết Kiểm nghiệm đánh giá chất lượng sản phẩm bước đầu 61 nghiên cứu độ ổn định 3.4.1 Kết kiểm nghiệm chất lượng atenolol 61 3.4.2 Kết kiểm nghiệm chất lượng metoprolol tartrat 62 3.4.3 Bước đầu nghiên cứu độ ổn định nguyên liệu 63 3.5 68 Kết xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn 3.5.1 Độc tính cấp atenolol metoprolol tartrat 68 3.5.2 Độc tính bán trường diễn atenolol 69 3.5.3 Độc tính bán trường diễn metoprolol tartrat 71 3.6 72 Tiêu chuẩn sở sản phẩm 3.6.1 Tiêu chuẩn sở atenolol 72 3.6.2 Tiêu chuẩn sở metoprolol tartrat 73 KẾT LUẬN 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO 76 PHỤ LỤC (Phổ sản phẩm hợp chất trung gian) 80 Phổ atenolol chất trung gian 82 1.1 Phổ axit p-hydroxymandelic 82 1.2 Phổ axit p-hydroxyphenylaxetic 92 1.3 Phổ axit p-hydroxyphenylaxetamid 103 1.4 Phổ atenolol 109 Phổ metoprolol chất trung gian 117 2.1 Phổ phenylethyl methyl ete 117 2.2 Phổ 4-nitro phenylethyl methyl ete 127 2.3 Phổ 4-(2-methoxyethyl)phenylamin 136 2.4 Phổ 4-(2-methoxyethyl)phenol 145 2.5 Phổ metoprolol 154 2.6 Phổ metoprolol tartrat 165 MỞ ĐẦU Bệnh tim mạch bệnh nguy hiểm thường gặp xã hội Trước đây, bệnh thường xuất tuổi già gần bệnh có xu hướng ngày trẻ hoá Bệnh thường xảy đột ngột, diễn biến phức tạp, khó lường dễ dẫn đến tử vong không, để lại di chứng thương tâm Có thể nói, bệnh tim mạch vấn đề to lớn sức khoẻ, xã hội kinh tế Đối với người, bệnh tim mạch rào cản lớn cho nghiệp, giảm khả làm việc, giảm tuổi thọ Đối với xã hội bệnh làm cho chi phí xã hội tăng lên bao gồm chi phí trực tiếp nằm bệnh viện, thuốc men, chi phí cho người chăm sóc chi phí gián tiếp giảm sức lao động xã hội, tăng chi quỹ bảo hiểm xã hội, làm ảnh hưởng đến kinh tế quốc dân Hiện nay, điều trị bệnh tim mạch có bước tiến vượt bậc Ngoài việc sử dụng loại thuốc chữa trị thơng thường, gần xã hội đón nhận tiến khoa học mới, tim mạch học can thiệp, kĩ thuật cho kết tốt, chi phí cịn cao, khó áp dụng cho đối tượng Hơn nữa, tuỳ thuộc vào loại bệnh tim mạch mà cách điều trị có phác đồ khác Trong phổ biến sử dụng loại thuốc để điều trị, cách đơn giản, hiệu áp dụng cho đối tượng Trên giới, thuốc dùng để điều trị bệnh tim mạch phong phú chủng loại Chẳng hạn, liên quan đến bệnh tim mạch huyết áp, có tới bảy nhóm thuốc sử dụng để điều trị sau: 1) Nhóm tác động lên thần kinh trung ương ví dụ metyldopa, clonidin, reserpin 2) Nhóm thuốc có tác dụng lợi tiểu indapamid, amilorid, hydroclorothiazid, furosesemid, spirololacton, triamteren 3) Nhóm thuốc đối kháng canxi (nhóm chẹn kênh canxi) gồm nifedipin, nicardipin, amlodipin, isradipin, verapamil, ditiazem 4) Nhóm thuốc ức chế men chuyển angiotensin gồm catopril, enalapril, bennazepril, quinapril 5) Nhóm thuốc kháng thụ thể angiotensin II gồm losartan, candesartan, valsartan 6) Nhóm chẹn thụ thể α gồm pazosin, alfurosil, terarosin, phentolamin nhóm cuối nhóm 7) Nhóm chẹn thụ thể β gồm atenolol, metoprolol, propanolol, pindolol, nadolol, acebutonol Nhóm thuốc chẹn thụ thể β loại thuốc dược dùng phổ biến điều trị bệnh tim mạch nói chung cao huyết áp nói riêng Cơ chế tác dụng loại thuốc ức chế thụ thể β giao cảm tim, mạch ngoại vi đó, làm chậm nhịp tim hạ huyết áp Trong số thuốc thuộc nhóm atenolol, metoprolol propanolol thuốc dùng rộng rãi chúng có nhiều ưu điểm Hiện nay, hai loại thuốc atenolol metoprolol sử dụng nhiều Việt Nam để điều trị bệnh tim mạch Hầu hết thuốc tim mạch nước ta phải nhập ngoại, giá thành đắt, không chủ động nguồn thuốc, đặc biệt với atenolol metoprolol - loại thuốc điều trị tim mạch bán chạy giới [27] Trong nước có cơng ty bắt đầu quan tâm nghiên cứu bào chế loại thuốc sử dụng ngun liệu nhập Chính Bộ KH&CN tổ chức xây dựng nội dung lựa chọn Trường ĐHKHTN chủ trì thực đề tài “Nghiên cứu tổng hợp atenolol metoprolol làm thuốc điều trị tim mạch“ thuộc chương trình KHCN trọng điểm cấp nhà nước KC10/06-10, thực từ tháng 4/2008 đến tháng năm 2010 Đề tài GS Đặng Như Tại làm chủ nhiệm Xuất xứ đề tài: Đây đề tài mới, lần đầu thực nước Mục tiêu đề tài: (theo đặt hàng Bộ KH&CN) Xây dựng quy trình tổng hợp tinh chế atenolol qui mơ pilot Xây dựng quy trình tổng hợp tinh chế metoprolol tartrat qui mô pilot Xây dựng tiêu chuẩn sở cho hai sản phẩm atenolol metoprolol tartrat tương đương tiêu chuẩn Dược điển Anh BP 2005 Đánh giá độ ổn định xác định tuổi thọ sản phẩm atenolol metoprolol tartrat Đánh giá độc tính cấp bán cấp sản phẩm atenolol metoprolol tartrat Mẫu số Bảng Kết kiểm nghiệm mẫu theo thời gian lão hóa cấp tốc Stt Tên tiêu Yêu cầu Kết tháng Tính chất Bột màu trắng Độ màu sắc Dung dịch 2,0% phải dung dịch có màu khơng đậm màu mẫu N8 pH Từ 6,0 đến 7,0 Góc quay cực riêng o tháng Đạt tháng Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt (6,7) Đạt (6,7) o +7,0 đến +10,0 tính theo chế phẩm khô Đạt (+ 9,6o) Đạt (+ 9,4o) Tạp chất liên quan - Sắc ký lớp mỏng - sắc ký lỏng Khơng có tạp vượt q 0,5% phép tạp vượt 0,2% Không có tạp vượt 0,3% tổng tạp không 0,5% Định lượng Chế phẩm phải chứa từ 99,0% đến 101,0% metoprolol tartrat, tính theo chế phẩm khô Đạt (+ 8,4o) Đạt (6,7) Đạt Đạt Đạt (không có (khơng (khơng có vết tạp) có vết vết tạp) tạp) Đạt Đạt (99,5%) Khơng đạt Khơng đạt (có (có píc píc tạp q tạp q 0,3%, xuất 0,3%) tạp C nhỏ 0,3%) Đạt (99,2%) Đạt (99,9%) Mẫu số Bảng Kết kiểm nghiệm mẫu theo thời gian lão hóa cấp tốc Stt Tên tiêu Yêu cầu Kết tháng Tính chất Bột màu trắng Độ màu sắc Dung dịch 2,0% phải dung dịch có màu khơng đậm q màu mẫu N8 pH Từ 6,0 đến 7,0 Đạt tháng 3 tháng Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt (6,6) Đạt (6,4) 65 Đạt (6,5) Tạp chất liên quan - Sắc ký lớp mỏng Khơng có tạp vượt q 0,5% phép tạp vượt 0,2% - sắc ký lỏng Khơng có tạp vượt 0,3% tổng tạp không 0,5% Định lượng Chế phẩm phải chứa từ 99,0% đến 101,0% metoprolol tartrat, tính theo chế phẩm làm khơ Đạt Đạt Đạt (khơng có (khơng (khơng có vết tạp) có vết vết tạp) tạp) Đạt Đạt (99,6%) Khơng đạt Khơng đạt (có (có píc píc tạp q tạp 0,3%, xuất 0,3%) tạp C nhỏ 0,3%) Đạt (99,0%) Đạt (100,0%) Mẫu số Bảng 10 Kết kiểm nghiệm mẫu theo thời gian lão hóa cấp tốc Stt Tên tiêu Yêu cầu Kết tháng Đạt Tính chất Bột màu trắng Độ màu sắc Dung dịch 2,0% phải dung dịch có màu khơng đậm màu mẫu N8 pH Góc quay cực riêng tháng tháng Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Tạp chất liên quan Từ 6,0 đến 7,0 Đạt (6,7) Đạt (6,7) +7,0o đến +10,0o tính theo chế phẩm khô - Sắc ký lớp mỏng - sắc ký lỏng Khơng có tạp vượt q 0,5% phép tạp vượt 0,2% Không có tạp vượt q 0,3% tổng tạp khơng 0,5% Định lượng Chế phẩm phải chứa từ 99,0% đến 101,0% metoprolol tartrat 66 Đạt (6,7) Đạt (+ 9,9o) Đạt (+ 9,9o) Đạt (+ 7,8o) Đạt Đạt Đạt (khơng có vết (khơng (khơng có tạp) có vết vết tạp) tạp) Đạt Khơng đạt (có píc tạp q 0,3%) Khơng đạt (có píc tạp q 0,3%, xuất tạp C nhỏ 0,3%) Đạt (99,8%) Đạt (99,2%) Đạt (99,7,0%) Kết phân tích mẫu nguyên liệu metoprolol tatrat lão hoá cấp tốc với điều kiện nhiệt độ: 40oC ± 2oC độ ẩm: 75% ± 5% cho thấy tiêu thử đạt yêu cầu trừ tiêu tạp chất liên quan xác định phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Sau tháng có tạp đơn khơng đạt u cầu, sau tháng có tạp đơn khơng đạt yêu cầu xuất thêm tạp C Có qui luật biến đổi hàm lượng xác định chuẩn độ Đó hàm lượng sau 03 tháng có xu hướng giảm sau tháng lại tăng lên đạt yêu cầu Có thể giải thích tương tăng hàm lượng xác định xuất tạp C Qua kết thu cho thấy ảnh hưởng nhiệt độ độ ẩm, mẫu metoprolol tartrat thử nghiệm lão hóa cấp gia tốc có sinh tạp chất sau tháng Đây tượng thí nghiệm đáng ý, để đưa kết luận xác thời hạn bảo quản nguyên liệu cần phải tiến hành nghiên cứu độ ổn định điều kiện thực b) Thử nghiệm để điều kiện thực (điều kiện bảo quản) Điều kiện thử nghiệm: Nguyên liệu bảo quản lọ thủy tinh kín (lọ thủy tinh miệng rộng, nút nhám, thể tích 200 ml), bao gói túi nhựa PE màu đen để phòng làm việc Thời điểm tổng hợp 3/2009, thời điểm kiểm tra tháng năm 2010 (thời gian năm tháng tính từ ngày sản xuất Kết kiểm nghiệm 02 mẫu cho kết sau: (xem phiếu kiểm nghiệm phụ lục) 67 Bảng 11 Kết kiểm nghiệm 02 mẫu metoprolol tartrat bảo quản điều kiện PTN Stt Tên tiêu Yêu cầu Mẫu M1* M2 * +7,0o đến +10,0o tính theo chế phẩm làm khơ Đạt (+ 7,7o) Đạt (+7,4o) - Sắc ký lớp mỏng Phải đạt theo qui định Đạt Đạt - Sắc ký lỏng Phải đạt theo qui định Đạt Đạt Định lượng Chế phẩm phải chứa từ 99,0% đến 101,0% metoprolol tartrat, tính theo chế phẩm làm khô Đạt (100,2%) Đạt (100,5%) Góc quay riêng Tạp chất liên quan cực * Xem phiếu kiểm nghiệm phụ lục Như kết luận mẫu bảo quản điều kiện thực với thời gian năm tháng Các mẫu đề tài tiếp tục lưu giữ để đánh giá độ ổn định cách xác 3.5 Kết xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn Độc tính cấp, độc tính bán trường diễn atenolol metoprolol tartrat gửi xác định Bộ môn Dược lý - Đại học Y Hà Nội Kết trình bày Báo cáo chi tiết kết thử nghiệm giới thiệu phụ lục 3.5.1 Độc tính cấp atenolol metoprolol tartrat 3.5.1.1 Độc tính cấp atenolol Thử độc tính cấp atenolol chuột nhắt trắng theo đường uống, kết cho thấy: 68 Liều dung nạp tối đa: 4,0 g/ kg cân nặng chuột Liều tối thiểu gây chết: 4,5g/ kg cân nặng chuột Triệu chứng nhiễm độc chủ yếu: mệt, nằm im hoạt động, khơng ăn uống, khó thở Chưa xác định LD50 atenolol chuột nhắt trắng theo đường uống (do cho uống đến liều cao chưa tìm liều thấp gây chết 100% chuột nghiên cứu) 3.5.1.2 Độc tính cấp metoprolol tartrat Thử độc tính cấp metoprolol tartrat chuột nhắt trắng theo đường uống, kết cho thấy: Liều dung nạp tối đa: 375 mg/ kg cân nặng chuột Liều tối thiểu gây chết: 562,5 mg/ kg cân nặng chuột Triệu chứng nhiễm độc chủ yếu: mệt, nằm im hoạt động, khơng ăn uống, sau co giật mạnh dẫn đến chết LD50 metoprolol tartrat chuột nhắt trắng theo đường uống là: LD50 = 1310, 84 ± 265, 17 (mg/ kg) 3.5.2 Độc tính bán trường diễn atenolol Nhận xét kết thử nghiệm Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn atenolol cho thấy: Trên hai lô thỏ, lô uống atenolol liều 6mg/kg/ngày (liều có tác dụng tương đương liều dự kiến người) lô uống liều cao gấp lần (18mg/kg/ngày) liên tục tuần: - Cả hai liều thuốc thử không làm ảnh hưởng xấu đến tình trạng chung, mức độ tăng trọng lượng thỏ - Không làm thay đổi kết xét nghiệm đánh giá chức tạo máu (số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng bạch cầu, cơng thức bạch cầu số lượng tiểu cầu) 69 - Không làm thay đổi kết xét nghiệm đánh giá chức gan (hoạt độ AST, ALT, nồng độ bilirubin tồn phần, protein cholesterol máu thỏ) - Khơng làm thay đổi kết xét nghiệm creatinin máu thỏ - Không gây tổn thương rõ rệt mặt hình thái quan sát đại thể quan thỏ - Cấu trúc vi thể gan, thận thỏ: + Gan: hai lô uống thuốc thử có biểu thối hóa tế bào gan, mức độ thối hóa tỷ lệ thuận với liều thuốc thử dùng Ở lơ thỏ uống atenolol liều có tác dụng tương đương liều dự kiến người (6mg/kg/ngày), cấu trúc gan bình thường(1/3) có thối hóa tế bào gan mức độ vừa (2/3), lô uống liều cao gấp lần (18mg/kg/ngày) có hình ảnh thối hóa vừa (1/3) thối hóa nặng tế bào gan (2/3) + Thận: lô uống liều 6mg/kg/ngày, cấu trúc vi thể thận bình thường (1/3) có thối hóa số tế bào ống lượn gần (2/3) Lô uống liều cao gấp lần (18mg/kg/ngày) có thối hóa nhẹ tế bào ống lượn gần KẾT LUẬN VỀ ĐỘC TÍNH CỦA ATENOLOL Mẫu thuốc thử atenolol cho thỏ uống liều 6mg/kg/ngày (tương đương với liều dự kiến dùng người) liều cao gấp lần (18mg/kg/ngày) tuần liền không làm ảnh hưởng đến tình trạng chung, cân nặng, xét nghiệm đánh giá chức tạo máu, chức gan thận thỏ, hình ảnh mơ bệnh học cho thấy hai lơ uống thuốc thử có biểu thối hóa tế bào gan từ trung bình tới nặng, mức độ thối hóa tỷ lệ thuận với liều thuốc thử dùng (nhưng gan có khả bù trừ cao nên chưa thấy làm thay đổi xét nghiệm đánh giá chức gan) thối hóa nhẹ tế bào ống lượn gần 70 Từ kết thử độc tính bán trường diễn atenolol thỏ theo đường uống, liều dự kiến dùng người 100 mg/ngày, tương đương 2mg/kg/ngày chấp nhận Tuy nhiên, phải khuyến cáo dùng liều thấp có tác dụng, khơng dùng liều cao khơng dùng người mắc bệnh gan Phải xét nghiệm đánh giá chức gan, thận trước dùng thuốc định kỳ theo dõi chức gan thận q trình dùng thuốc 3.5.3 Độc tính bán trường diễn metoprolol tartrat Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn metoprolol tartrat cho thấy: Trên hai lô thỏ, lô uống metoprolol tartrat liều 15mg/kg/ngày (liều có tác dụng tương đương liều dự kiến người) lô uống liều cao gấp lần (45mg/kg/ngày) liên tục tuần: - Cả hai liều thuốc thử khơng làm ảnh hưởng xấu đến tình trạng chung, mức độ tăng trọng lượng thỏ - Không làm thay đổi kết xét nghiệm đánh giá chức tạo máu (số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu số lượng tiểu cầu) - Không làm thay đổi kết xét nghiệm đánh giá chức gan (hoạt độ AST, ALT, nồng độ bilirubin toàn phần, protein cholesterol máu thỏ) - Không làm thay đổi kết xét nghiệm creatinin máu thỏ - Không gây tổn thương rõ rệt mặt hình thái quan sát đại thể quan thỏ - Cấu trúc vi thể gan, thận thỏ: 71 + Gan: hai lơ uống thuốc thử, 2/3 mẫu bệnh phẩm có cấu trúc gan bình thường, có 1/3 mẫu bệnh phẩm có thối hóa hạt nhẹ tế bào gan Tuy nhiên, thỏ lô chứng thấy bào tương số tế bào gan vùng trung tâm có dạng hạt nhỏ + Thận: lô uống metoprolol tartrat liều 15mg/kg/ngày, tất mẫu bệnh phẩm có hình thái cầu thận bình thường, có 1/3 mẫu bệnh phẩm có số ổ xâm nhập viêm kẽ thận có thối hóa nhẹ số tế bào ống lượn gần Nhưng lô thỏ uống liều cao (45mg/kg/ngày) hình ảnh mơ học thận hồn tồn bình thường, tất mẫu bệnh phẩm không thấy tổn thương KẾT LUẬN VỀ ĐỘC TÍNH CỦA METOPROLOL TARTRAT Mẫu thuốc thử metoprolol tartrat khơng gây độc tính bán trường diễn thỏ cho thỏ uống liều 15mg/kg/ngày (liều có tác dụng tương đương liều dự kiến dùng người) liều cao gấp lần (45 mg/kg/ngày) tuần liên tục Tất số theo dõi tình trạng chung, cân nặng, chức tạo máu, chức gan, chức thận mô bệnh học gan, thận nằm giới hạn bình thường, khơng có khác biệt rõ rệt so với lơ chứng Từ kết thử độc tính bán trường diễn metoprolol tartrat thỏ theo đường uống, liều dự kiến dùng người trung bình 250 mg/ngày (từ 100 - 400mg/ ngày), tương đương mg/kg/ngày chấp nhận Tuy nhiên, phải định kỳ theo dõi chức gan thận trình dùng thuốc 3.6 Tiêu chuẩn sở sản phẩm 3.6.1 Tiêu chuẩn sở atenolol 3.6.1.1 Cơ sở xây dựng tiêu chuẩn sở 72 - Dựa vào Tiêu chuẩn dược điển Anh năm 2005 (BP2005) - Dựa vào Dược điển Việt Nam IV năm 2010 - Dựa kết thực đề tài Tiêu chuẩn chúng tơi xây dựng hồn tồn phù hợp với BP2005 3.6.1.2 Tiêu chuẩn sở Tiêu chuẩn sở cho Atenolol đề tài xây dựng ban hành theo định số 2466/QĐ-KHCN ngày 27 tháng năm 2010 Hiệu trưởng Trường Đại học KHTN ký Toàn văn Tiêu chuẩn TCCS 01:2010 “Atenolol – Yêu cầu kỹ thuật phương pháp thử “ chúng tơi trình bày phụ lục 3.6.2 Tiêu chuẩn sở metoprolol tartrat 3.6.2.1 Cơ sở xây dựng tiêu chuẩn sở cho metoprolol tartrat - Dựa vào Tiêu chuẩn dược điển Anh năm 2007 (BP2005) - Dựa vào Dược điển Việt Nam IV năm 2010 - Dựa kết thực đề tài Tiêu chuẩn xây dựng hoàn toàn phù hợp với BP2005 3.6.2.2 Tiêu chuẩn sở metoprolol tartrat Tiêu chuẩn sở cho Atenolol đề tài xây dựng ban hành theo định số 2466/QĐ-KHCN ngày 27 tháng năm 2010 Hiệu trưởng Trường Đại học KHTN ký Toàn văn Tiêu chuẩn TCCS 02:2010 “Metoprolol tartrat – Yêu cầu kỹ thuật phương pháp thử “ chúng tơi trình bày phụ lục 73 KẾT LUẬN Đề tài xây dựng quy trình cơng nghệ tổng hợp atenolol qui mô pilot với thông số chủ yếu sau: Nguyên liệu đầu phenol, công suất 108 gam/ mẻ Hiệu suất: Tổng hợp p-hydroxyphenylacetamid 45 %, hiệu suất tổng hợp atenolol (tính theo p-hydroxyphenylacetamid) 52 % Đề tài xây dựng quy trình cơng nghệ tổng hợp metoprolol tartrat qui mô pilot với thong số chủ yếu sau: Nguyên liệu đầu phenyletanol, công suất: 110 gam / mẻ Hiệu suất: tổng hợp 4-(2methoxyethyl) phenol 37 %, hiệu suất tổng hợp metoprolol tartrat: (tính theo 4-(2-methoxyethyl)phenol) 55% Đã phân tích xác định cấu trúc chất phương pháp phổ thích hợp Chất lượng sản phẩm đề tài kiểm nghiệm Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương đánh giá đạt theo BP2005 Đã nghiên cứu xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn atenolol metoprolol tartrat động vật thực nghiệm: - Độc tính cấp atenolol chuột nhắt trắng theo đường uống: Liều dung nạp tối đa 4,0 g/ kg cân nặng chuột, liều tối thiểu gây chết 4,5g/ kg cân nặng chuột, chưa xác định LD50 atenolol chuột nhắt trắng theo đường uống - Độc tính cấp metoprolol tartrat chuột nhắt trắng theo đường uống: Liều dung nạp tối đa 375 mg/ kg, liều tối thiểu gây chết 562,5 mg/ kg, LD50 = 1310, 84 ± 265, 17 (mg/ kg) - Độc tính bán trường diễn atenolol: Atenolol liều uống mg/kg/ngày 18 mg/kg/ngày tuần liền khơng ảnh hưởng đến tình trạng chung, cân nặng, đến kết xét nghiệm chức 74 tạo máu, chức gan thận thỏ Trên hình ảnh mơ bệnh học cho thấy có biểu thối hóa tế bào gan từ trung bình tới nặng thối hóa nhẹ tế bào ống lượn gần - Độc tính bán trường diễn metoprolol tartrat Metoprolol tartrat khơng gây độc tính bán trường diễn thỏ cho thỏ uống liều 15mg/kg/ngày liều cao gấp lần (45 mg/kg/ngày) tuần liên tục Đã bước đầu nghiên cứu độ ổn định sản phẩm metoprolol atenolol Mẫu metoprolol tartrat sau thời gian bảo quản thực tế năm tháng đạt theo tiêu BP2005 Đã biên soạn tiêu chuẩn sở cho atenolol metoprolol tartrat Nhận xét chung: đề tài hoàn thành nội dung đặt với chất lượng đảm bảo 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO British Pharmacopoeia, 2005, Vol 1, Atenolol British pharmacopoeia, 2005, Vol 2, Metoprolol tartrate, p.1329 John Durrwachter, at al., Process for preparing phenethanol ethers by the reduction of corresponding phenylglyoxal acetals, US 5.124.489, 1992 Palmer, at al., Manufacturing process of metoprolol, US 6.252.113, 2001 Loosen Pierre C., at al., Werkwijze voor het selectief alkyleren van een alifatische alcohol tegenover een fenolverbinding, BE 09.300.854, 1995 Durrwachter John R., Process for preparing phenethanol ethers, WO 95/00467, 1995 and US 5.602.285, 1997 Michel Baron, Procede de preparation du (methoxy-2-ethyl)-4-phenol, FR 2487339, 1982 Michel Baron, at al., Procede perfectionne de preparation du (methoxy-2ethyl)-4-phenol, FR 2487337, 1982 H Umesha Shetty, et al., Stereospecific synthesis of specifically deuterated metoprolol enantiomers from chiral starting materials, Journal of labelled compounds and radiopharmaceuticals, Vol XXVII, No 10, 1989 10 Rao Alla Venkata Rama, at al., An improved process for the synthesis of 4-(2-ankoxy ethyl)phenyl, IN 177748, 1997 11 Jiang Biao, at all., Process for preparing 4-(2-ankoxyethyl)phenol by phase-transfer catalysis, CN 1291605, 2001 12 Young, et al., Composition and method containing optically pure (S) metoprolol, US 5.362.757, 1994 and WO 92/16197 13 Oranias Olsina, at al., Procemediento industrial para la obtencion de una ariloxypropoanolamina, ES 2.011.584, 1990 76 14 Arnold C Ott, Leonard A Mattano and Gerald H Coleman (1946) Preparation of hydroxyphenylalkanoic by the Willgerodt reaction J Am Chem Soc Vol 68, pp 2633 - 2634 15 Arthur Michael Barrett et al, US patent 3663,607, 1972 16 Martin A Schwartz, Michael Zoda, Baburao Vishnuvajjala and Ismail Mami (1976) A convenient synthesis of o-and p-hydroxy substituted phenylacetonitriles and phenethylamines J Org Chem , Vol 41, No 14, pp 2502 - 2503 17 Marayil Ravindranathan, Nagabusanam Kalyanam and Swaminathan Sivaram (1982) Neutral Regioselective copper-catalyzed hydration of some nitriles to amides J Org Chem 47, pp 4812 - 4813 18 H.S Bevinakatti and A.A Banerji (1991) Practical chemoenzymatic synthesis of both enantiomers of propranolol, J Org Chem , 56, pp 5372 - 5375 19 H.S Bevinakatti and A.A Banerji (1992) Lipase catalysis in organic solvents Application to the synthesis of (R)- and (S)-atenolol .J Org Chem., 57, pp 6003 -6005 20 Fabio Donzeli et al (1996) On the stereochemistry of the Baeyer- Villiger degradation of arylalkylketones structurally related to raspberry ketone by Beauveria bassiana Tetrahedron Asymmetry, Vol 7, No, 11, pp 3129 - 3134 21 Joseph Akisanya, Adrian W Parkins and Jonathan W Steed (1998) A synthesis of atenolol using a nitrile hydration catalyst, Organic Process Research and Development, pp 274 -276 22 Kazuhiro Kitaori, et al (1999) CsF in organic synthesis Regioselective Nucleophilic Reaction of Phenol with Oxiranes Leading to Enantiopure βBlockers Tetrahedron, 55, pp 14381 - 14390 77 23 Крысин А.П., Егорова Т.Г., Кобрин В.С., Просенко А.Е., Способ получения 4-(2-аминоэтил)фенола, Пат РФ 2218326 (2003) 25 Pierre C Loosen, Anny M L Malengreau-Dekoker, Jacqueline Marchand-Brynaert, Léon A Ghosez, Selective Alkylation of an Aliphatic Hydroxyl Group in Presence of a Phenolic Hydroxyl Group, BE 1007421, 1995 26 Mitsuo Sekine; Takeshi Nakanishi, Regioselective O-Methylation of Hydroxyl Groups Via 1,3-Benzodithiol-2-Yl Ether Intermediates, Natural Product letters, 1(1), 25-8, 1992 27 Yusufs, Wittes, Friedman L (1998) Overview of resulfs of randomized Clinical trials in heart disease II Unstable angina, heart failure, primary prevention with aspirin and risk factor modification JAMA 260, 2259 2263 28 Joseph Akisanya and at al., A Synthesis of atenolol using a nitrile hydration catalyst, Organic process research and development, 1998 , 2, 274-276 29 Daniel Lednicer, Lester A Mitscher, The organic chemistry of drug synthesis, Vol 2, p 109, a Wiley- Interscience Publication, 1980 30 Bộ Y tế, Dược thư quốc gia Việt Nam, lần xuất thứ nhất, Hà Nội 2002, tr 160 690; Dược Điển Việt Nam IV, năm 2010, Hội đồng dược điển, Bộ Y tế, 2010 31 Bộ Y tế - Nước Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt – Nam (1996): Quy định nghiên cứu dược lý thuốc y học cổ truyền dân tộc, Quyết định 371/BYT-QĐ 32 Abraham W.B (1978): Techniques of animal and clinical toxicology, Med pub Chicago, pp 55 - 68 78 33 OECD (2002): Drug safety evaluation, Shayne C GAD 34 Turner A (1965): Screening methods in pharmacology, Academic Press, NewYork and London, pp 60 - 68 35 WHO (1993): Research guidelines for evaluating the safety and efficacy of herbal medicines, Manila, Philippin, pp 35 – 41 36 Trần Tử An, Kiểm nghiệm dược phẩm, NXB Y học, Hà Nội -2005 79 ... TỔNG QUAN 1.1 Bệnh tim mạch loại Thuốc tim mạch chủ yếu 1.2 Thuốc chẹn thụ thể beta - Atenolol metoprolol tartrat 1.3 Các phương pháp tổng hợp atenolol metoprolol tartrat 10 1.4 Phương pháp tổng. .. Việt Nam để điều trị bệnh tim mạch Hầu hết thuốc tim mạch nước ta phải nhập ngoại, giá thành đắt, không chủ động nguồn thuốc, đặc biệt với atenolol metoprolol - loại thuốc điều trị tim mạch bán... nghệ tổng hợp metoprolol tartrat 3.2.1 Thảo luận trình tổng hợp metoprolol Để tổng hợp metoprolol quan trọng tổng hợp chất trung gian 4-(2metoxietyl)-phenol Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu tổng