Nghiên cứu bào chế viên nén chứa cao lá đắng (vernonia amygdalina del ) định hướng điều trị bệnh tăng huyết áp

TRƢỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA DƢỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN CHỨA CAO LÁ ĐẮNG (VERNONIA AMYGDALINA DEL.) ĐỊNH HƢỚNG ĐIỀU TRỊ BỆNH TĂNG HUYẾT ÁP ĐỒNG NAI, THÁNG 07/2022 TRƢỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA DƢỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN CHỨA CAO LÁ ĐẮNG (VERNONIA AMYGDALINA DEL.) ĐỊNH HƢỚNG ĐIỀU TRỊ BỆNH TĂNG HUYẾT ÁP ĐỒNG NAI, THÁNG 07/2022 i TĨM TẮT Khóa luận tốt nghiệp Dƣợc sĩ Đại học – Năm học: 2021 – 2022 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN CHỨA CAO LÁ ĐẮNG (Vernonia amygdalina Del.) ĐỊNH HƢỚNG ĐIỀU TRỊ BỆNH TĂNG HUYẾT ÁP Giảng viên hƣớng dẫn: Đặt vấn đề Cây Lá đắng (Vernonia amygdalina Del.), họ Cúc (Asteraceae) dễ trồng, phân bố rộng rãi nƣớc ta với trữ lƣợng lớn Tác dụng hạ huyết áp đắng đƣợc tác giả Nguyễn Lê Hoài Tâm (2021) nghiên cứu trƣớc Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: Lá Lá đắng đƣợc thu hái xã Ân Hảo Đơng, huyện Hồi Ân, tỉnh Bình Định vào tháng năm 2022 Phương pháp nghiên cứu: Chiết xuất tiêu chuẩn hóa cao Lá đắng: Chiết nóng dung môi nƣớc cất 100 0C Khảo sát tá dƣợc điều chế cao khô Lá đắng Nghiên cứu bào chế viên nén chứa cao Lá đắng: Khảo sát cơng thức phịng thí nghiệm, lựa chọn công thức tốt Kết quả: Chiết xuất tiêu chuẩn hóa cao Lá đắng: Từ 50 g Lá đắng chiết đƣợc 21,5 g cao khô Lá đắng, hiệu suất chiết 22,2%, độ ẩm 3,48% Sử dụng tá dƣợc điều chế cao khô avicel PH 102 tỷ lệ dƣợc liệu : tá dƣợc = : Nghiên cứu bào chế viên nén chứa cao Lá đắng: chọn công thức tốt với thành phần gồm natri croscarmellose tỷ lệ 15%, tá dƣợc độn avicel PH-102, magie stearate tỷ lệ 2% aerosil tỷ lệ 2% Đề nghị: Do thời gian có hạn, chúng tơi đề nghị: - Tối ƣu hóa chiết cao Lá đắng giàu cynarosid - Sử dụng cynarosid làm chất điểm cho dƣợc liệu Lá đắng - Tối ƣu hóa cơng thức bào chế viên nén Lá đắng - Nghiên cứu độ ổn định đánh giá thêm số tiêu viên nén ii MỤC LỤC TÓM TẮT i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH viii LỜI CẢM ƠN ix Chƣơng ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY LÁ ĐẮNG 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Danh pháp 2.1.3 Đặc điểm thực vật .4 2.1.4 Thành phần hóa học 2.1.5 Tác dụng dƣợc lý .7 2.1.6 Độc tính cấp Lá đắng 2.2 TỔNG QUAN VỀ BỆNH TĂNG HUYẾT ÁP 2.2.1 Định nghĩa 2.2.2 Tình hình bệnh tăng huyết áp giới Việt Nam 10 2.2.3 Điều trị 11 2.3 TỔNG QUAN VỀ LUTEOLIN 12 2.3.1 Tính chất lý – hóa 12 2.3.2 Tác dụng dƣợc lý 13 2.4 TỔNG QUAN VỀ THUỐC VIÊN NÉN 13 2.4.1 Định nghĩa .13 2.4.2 Phƣơng pháp dập thẳng 14 2.4.3 Tá dƣợc 15 Chƣơng PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 21 iii 3.2 NGUYÊN VẬT LIỆU – TRANG THIẾT BỊ 21 3.2.1 Nguyên vật liệu .21 3.2.2 Trang thiết bị 22 3.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.3.1 Chiết xuất tiêu chuẩn hóa cao Lá đắng 23 3.3.2 Nghiên cứu công thức bào chế viên nén chứa cao Lá đắng quy mơ phịng thí nghiệm 30 3.3.3 Nghiên cứu bào chế viên nén chứa cao đắng quy mô 2000 viên .42 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 46 4.1 KẾT QUẢ 46 4.1.1 Chiết xuất tiêu chuẩn hóa cao Lá đắng 46 4.1.2 Nghiên cứu công thức bào chế viên nén chứa cao Lá đắng quy mơ phịng thí nghiệm 59 4.1.3 Nghiên cứu bào chế viên nén chứa cao Lá đắng quy mô 2000 viên 67 4.2 BÀN LUẬN .70 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .72 5.1 KẾT LUẬN 72 5.2 ĐỀ NGHỊ 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt ACE ACEI ALT ARB Tiếng Anh Tiếng Việt Angiotensin-converting Enzym enzyme angiotensin (men chuyển) Angiotensin-converting Alanin amino transaferase II dạng Thuốc ức chế men chuyển enzyme inhibitor Angiotensin chuyển Alanin amino transaferase receptor Thuốc chẹn thụ thể AT1 blocker angiotensin II AS Asymmetric factor Hệ số kéo đuôi AST Aspartate aminotransferase Aspartate aminotransferase BB Beta-blocker Thuốc chẹn thụ thể β CCB Calcium channel blocker Thuốc chẹn kênh calci CCl4 Carbon tetracloride Carbon tetraclorid 10 CQA Critical Quality Attribute 11 DĐVN V 12 MeOH Methanol Methanol 13 EtOAc Ethyl acetate Ethyl acetat 14 EtOH Ethanol Cồn 15 HPLC 16 KHV Kính hiển vi Kính hiển vi 17 K Capacity factor Hệ số dung lƣợng 18 ppm (italic) Parts per million Phần triệu 19 QTPP Quality target product profile 20 RAA Renin-Angiotensin- Thuộc tính chất lƣợng trọng yếu Dƣợc điển Việt Nam V High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao Hồ sơ chất lƣợng mục tiêu sản phẩm Renin-Angiotensin- v Aldosterone Aldosteron 21 RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối 22 RS Resolution Độ phân giải 23 TCCL Tiêu chuẩn chất lƣợng 24 THA Tăng huyết áp 25 VSMC Vascular Smooth Muscle Cell Tế bào trơn mạch máu 26 S Peak Area Diện tích pic 27 SALP Alkalin phosphatase Alkalin phosphatase 28 SKLM Sắc ký lớp mỏng 29 STT Số thứ tự 30 ROS Reactive oxygen species Gốc tự 31 WHO Word Health Organization Tổ chức Y tế thới giới vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Phân độ tăng huyết áp theo Hội tim mạch học Việt Nam (2021) 10 Bảng 3.1 Danh sách tá dƣợc đƣợc sử dụng .21 Bảng 3.2 Danh sách hóa chất thuốc thử dƣợc sử dụng .21 Bảng 3.3 Danh sách trang thiết bị 22 Bảng 3.4 Đặc điểm chất lƣợng mong muốn cao Lá đắng 23 Bảng 3.5 Quy trình chiết xuất dƣợc liệu Lá đắng 23 Bảng 3.6 Khảo sát tỷ lệ dƣợc liệu : tá dƣợc điều chế cao Lá đắng 24 Bảng 3.7 Pha dung dịch chuẩn 28 Bảng 3.8 Pha dung dịch độ – cao khô Lá đắng 29 Bảng 3.9 Đặc điểm chất lƣợng mong muốn viên nén Lá đắng 30 Bảng 3.10 Đề nghị công thức viên nén Lá đắng 31 Bảng 3.11 Công thức thực nghiệm lô labo (300 viên) 33 Bảng 3.12 Khối lƣợng thực tế 12 công thức lô 300 viên .34 Bảng 3.13 Đánh giá số Carr số Hausner 36 Bảng 3.14 Đánh giá độ trơn chảy bột viên theo góc nghỉ .37 Bảng 3.15 Pha dung dịch độ 42 Bảng 3.16 Kế hoạch lấy mẫu 44 Bảng 3.17 Đánh giá kết lô 2000 viên so với lô labo 45 Bảng 4.1 Kết khảo sát tá dƣợc điều chế cao khô 46 Bảng 4.2 Kết kiểm nghiệm cao khô Lá đắng chiết từ 6500 g dƣợc liệu 51 Bảng 4.3 Kết tính tƣơng thích hệ thống 51 Bảng 4.4 Kết độ đặc hiệu – cao khô Lá đắng 52 Bảng 4.5 Kết tính tuyến tính .53 Bảng 4.6 Kết độ lặp lại – cao khô Lá đắng .55 Bảng 4.7 Kết độ xác trung gian – cao khô Lá đắng 56 Bảng 4.8 Kết thống kê kiểm nghiệm viên – cao khô Lá đắng .56 Bảng 4.9 Kết kiểm tra tiêu độ – cao khô Lá đắng .57 vii Bảng 4.10 Kết thẩm định quy trình định lƣợng Luteolin cao khô Lá đắng phƣơng pháp HPLC 58 Bảng 4.11 Kết thực nghiệm thực nghiệm thăm dò biến độc lập 59 Bảng 4.12 Thành phần công thức tốt .60 Bảng 4.13 Đánh giá bột viên sau giai đoạn trộn hoàn tất 60 Bảng 4.14 Đánh giá viên nén Lá đắng sau giai đoạn dập viên 61 Bảng 4.15 Kết lô lặp lại công thức chọn 61 Bảng 4.16 Kết độ đặc hiệu – viên nén Lá đắng 62 Bảng 4.17 Kết độ lặp lại – viên nén Lá đắng 63 Bảng 4.18 Kết độ xác trung gian – viên nén Lá đắng .64 Bảng 4.19 Kết thống kê kiểm nghiệm viên – viên nén Lá đắng 64 Bảng 4.20 Kết kiểm tra tiêu độ – viên nén Lá đắng 65 Bảng 4.21 Kết thẩm định quy trình định lƣợng Luteolin viên nén Lá đắng phƣơng pháp HPLC 66 Bảng 4.22 Thành phần công thức viên nén Lá đắng – cỡ lô 2000 viên .67 Bảng 4.23 Kết đánh giá bột viên nén Lá đắng sau giai đoạn trộn hoàn tất – cỡ lô 2000 viên .67 Bảng 4.24 Kết đánh giá viên nén Lá đắng – cỡ lô 2000 viên 68 Bảng 4.25 Kết đánh giá lô 2000 viên so với lô labo 69 viii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Sơ đồ phân loại thực vật học Lá đắng Hình 2.2 Một số flavonoid phân lập đƣợc Lá đắng Hình 2.3 Một số sesquiterpen lacton phân lập đƣợc Lá đắng Hình 2.4 Cơng thức cấu tạo luteolin 13 Hình 2.5 Sơ đồ giai đoạn sản xuất viên nén phƣơng pháp dập thẳng 15 Hình 2.6 Ảnh quét KHV điện tử cellulose vi tinh thể (Avicel PH-102) .17 Hình 2.7 Ảnh quét KHV điện tử natri croscarmellose 17 Hình 2.8 Ảnh quét kính hiển vi điện tử PVP K30 .18 Hình 2.9 Ảnh quét KHV điện tử Aerosil 19 Hình 2.10 Ảnh quét KHV điện tử magie stearate 19 Hình 3.1 Sơ đồ giai đoạn bào chế viên nén Lá đắng .35 Hình 3.2 Sơ đồ sản xuất viên nén Lá đắng quy mô 2000 viên .44 Hình 4.1 Thể chất cao khô sau phối hợp với tá dƣợc tỷ lệ khác 47 Hình 4.2 Kết sắc ký lớp mỏng cao khô Lá đắng sau điều chế 49 Hình 4.3 Kết định tính luteolin cao khô SKLM .50 Hình 4.4 Sắc ký đồ mẫu trắng – mẫu chuẩn – mẫu thử – mẫu thử thêm chuẩn cao khô Lá đắng 52 Hình 4.5 Sắc ký đồ dung môi pha mẫu 53 Hình 4.6 Khảo sát tính tuyến tính luteolin 54 Hình 4.7 Sắc ký đồ mẫu placebo – mẫu chuẩn – mẫu thử – mẫu placebo thêm chuẩn viên nén Lá đắng 62 Hình 4.8 Sắc ký đồ placebo – viên nén Lá đắng .62 Hình 4.9 Viên nén Lá đắng lô labo lô 2000 viên 68 PL18 PHỤ LỤC ĐỘ LẶP LẠI – VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG PHỤ LỤC 7.1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐỘ LẶP LẠI – VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG STT Khối lƣợng cân (mg) Diện tích pic Hàm lƣợng (μg) 12505 691,639 56,776 12507 694,103 56,969 12502 680,355 55,863 12503 685,340 56,268 12505 688,487 56,517 12501 683,989 56,166 TB 56,536 SD 0,4070592 RSD% 0,72 PL19 PHỤ LỤC 7.2 SẮC KÝ ĐỒ KHẢO SÁT ĐỘ LẶP LẠI – VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG Mẫu Mẫu Mẫu PL20 Mẫu Mẫu Mẫu PL21 PHỤ LỤC ĐỘ CHÍNH XÁC TRUNG GIAN – VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG PHỤ LỤC 8.1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐỘ CHÍNH XÁC TRUNG GIAN VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG STT Khối lƣợng cân (mg) Diện tích pic Hàm lƣợng (μg) 12505 685,611 56,284 12504 683,332 56,101 12505 681,278 55,928 12502 674,801 55,410 12507 700,562 57,502 12504 679,269 55,768 TB 56,166 SD 0,730158 RSD 1,30 Kiểm nghiệm viên Trần Thị Thu Hiền Phạm Huỳnh Thanh Bảo Trung bình hàm lƣợng (μg) 56,536 56,166 %RSD (n = 6) 0,72 1,30 Trung bình hàm lƣợng (μg) (2KNV) % RSD (n = 12) 56,296 0,08 PL22 PHỤ LỤC 8.2 SẮC KÝ ĐỒ KHẢO SÁT ĐỘ CHÍNH XÁC TRUNG GIAN VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG Mẫu Mẫu Mẫu PL23 Mẫu Mẫu Mẫu PL24 PHỤ LỤC 8.3 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ANOVA MỘT YẾU TỐ - VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Count 6 SS 0.203296 3.426493 3.629789 Sum 338.5558 336.9938 df 10 11 Average 56.42596 56.16564 Variance 0.1672459 0.5180527 MS 0.203296 0.342649 F 0.5933059 P-value 0.458954 F crit 4.964603 PL25 PHỤ LỤC ĐỘ ĐÚNG – VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG PHỤ LỤC 9.1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐỘ ĐÚNG VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG Nồng Mức nồng độ Nồng Bình độ định chuẩn Diện mức thêm tích pic 10 ml vào 100% 125% Tỷ lệ chuẩn hồi tìm phục TB SD RSD % thấy (μg/ml) 75% độ 1A 5,7474 544,00 5,7659 100,32 1B 5,7474 544,20 5,7681 100,36 1C 5,7474 552,70 5,8582 101,93 2A 7,6632 726,10 7,6961 100,43 2B 7,6632 717,70 7,6070 99,27 2C 7,6632 728,00 7,7162 100,69 3A 9,579 911,00 9,6558 100,80 3B 9,579 905,80 9,6007 100,23 3C 9,579 905,80 9,6007 100,23 100,87 0,746438 0,74 100,13 0,620806 0,62 100,42 0,271134 0,27 PL26 PHỤ LỤC 9.2 SẮC KÝ ĐỒ KHẢO SÁT ĐỘ ĐÚNG – VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG Placebo thêm chuẩn 75%-Mẫu Placebo thêm chuẩn 75%-Mẫu Placebo thêm chuẩn 75%-Mẫu PL27 Placebo thêm chuẩn 100%-Mẫu Placebo thêm chuẩn 100%-Mẫu Placebo thêm chuẩn 100%-Mẫu PL28 Placebo thêm chuẩn 125%-Mẫu Placebo thêm chuẩn 125%-Mẫu Placebo thêm chuẩn 125%-Mẫu PL29 PHỤ LỤC 10 THỰC NGHIỆM KIỂM CHỨNG LÔ VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG PHỊNG THÍ NGHIỆM PHỤ LỤC 10.1 MẪU CHUẨN LUTEOLIN PHỤ LỤC 10.2 LÔ Mẫu Mẫu PL30 PHỤ LỤC 10.3 LÔ Mẫu Mẫu PL31 PHỤ LỤC 10.4 LÔ Mẫu Mẫu PL32 PHỤ LỤC 11 VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG – LÔ 2000 VIÊN PHỤ LỤC 11.1 SẮC KÝ ĐỒ CHUẨN LUTEOLIN PHỤ LỤC 11.2 SẮC KÝ ĐỒ VIÊN NÉN LÁ ĐẮNG Mẫu Mẫu ... 2022 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN CHỨA CAO LÁ ĐẮNG (Vernonia amygdalina Del. ) ĐỊNH HƢỚNG ĐIỀU TRỊ BỆNH TĂNG HUYẾT ÁP Giảng viên hƣớng dẫn: Đặt vấn đề Cây Lá đắng (Vernonia amygdalina Del. ), họ... tài: ? ?Nghiên cứu bào chế viên nén chứa cao Lá đắng (Vernonia amygdalina Del. ) định hƣớng điều trị bệnh tăng huyết áp? ?? đƣợc thực với mục tiêu sau: Chiết xuất tiêu chuẩn hóa cao Lá đắng; Nghiên cứu. .. LẠC HỒNG KHOA DƢỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN CHỨA CAO LÁ ĐẮNG (VERNONIA AMYGDALINA DEL. ) ĐỊNH HƢỚNG ĐIỀU TRỊ BỆNH TĂNG HUYẾT ÁP ĐỒNG NAI, THÁNG 07/2022 i