Góc nghỉ Đánh giá độ trơn chảy
25 – 30 Chảy rất tốt
31 – 35 Chảy tốt
36 – 40 Chảy khá tốt
40 – 45 Chảy đƣợc
46 – 55 Chảy kém
> 55 Rất kém hoặc không chảy
e) Phân bố kích thước hạt
Cân 50 g bột viên. Dùng các số rây 0, 125, 250, 355, 500 μm. Cài đặt mức độ rung 60, rung liên tục, thời gian 10 phút. Sau đó cân khối lƣợng cốm và tính phần trăm trên từng số rây (Di) theo công thức sau:
Di= mi
∑mi x 100% với i = 0, 125, 250, 355, 500 Trong đó: mi là khối lƣợng của cốm tƣơng ứng với số rây thứ i.
3.3.2.4. Đánh giá các TCCL của viên nén Lá đắng
a) Cảm quan: viên màu nâu, hình caplet, hai mặt lồi, mặt viên nhẵn, cạnh và
thành viên lành lặn
b) Độ cứng
- Lấy 10 viên bất kì trong lơ thuốc.
- Thử độ cứng bằng máy đo độ cứng PHARMATEST TYPE PTB 331E.
Yêu cầu: độ cứng phải ≥ 80N
c) Độ rã
- Thử theo chuyên luận thử độ rã của viên nén và viên nang thông thƣờng nhƣ trong DĐVN V – Phụ lục 11.6;
- Lấy 6 viên bất kì trong lơ thuốc, mỗi viên cho vào một trong 6 ống của bộ cốc thử độ rã;
- Vận hành máy đo độ rã PHARMETEST TYPE PTZ S/DIST 3 với tần số 30 lần trên phút trong 15 phút (900 giây).
Yêu cầu: thời gian rã khơng q 900 giây, khơng cịn cắn thuốc nằm trên mặt lƣới
d) Độ đồng đều khối lượng
Phƣơng pháp: phụ lục 11.3 – DĐVN V
Yêu cầu: ± 5% khối lƣợng trung bình viên, khơng q 2 viên nằm ngoài giới hạn và
khơng có viên nào nằm ngồi khoảng gấp đơi giới hạn.
e) Độ mài mịn
- Cân 10 viên bất kì bằng cân phân tích (mtrƣớc) cho vào trống đo độ mài mòn của máy đo độ mài mòn PHARMATEST PTF E/ER
- Vận hành máy với tốc độ 25 vịng/phút trong 4 phút
- Sau đó lấy viên ra phủi bụi và cân lại các viên một lần nữa bằng cân phân tích (msau).
- Tính phần trăm độ mài mịn theo cơng thức sau:
Độ mài m n mtrƣớc msau
mtrƣớc 100
Yêu cầu: độ mài mòn < 1%
f) Định lượng
- Định lƣợng: Phƣơng pháp HPLC [11], [40], [64], sử dụng luteolin làm chất chỉ
điểm cho viên nén Lá đắng.
Chuẩn bị mẫu
+ Mẫu chuẩn gốc: cân chính xác 10 mg luteolin chuẩn hòa tan với lƣợng vừa đủ MeOH trong bình định mức 50 ml. Hút chính xác 25 ml dung dịch vừa pha pha loãng với lƣợng vừa đủ MeOH trong bình định mức 100 ml. Dung dịch thu đƣợc có nồng độ luteolin khoảng 50 μg/ml.
+ Mẫu chuẩn: hút chính xác 4 ml dung dịch chuẩn gốc pha lỗng với lƣợng vừa đủ MeOH trong bình định mức 25 ml. Dung dịch thu đƣợc có nồng độ luteolin khoảng 8 μg/ml.
+ Mẫu thử: cân chính xác 1250 mg bột viên nén Lá đắng, thêm MeOH vừa đủ trong bình định mức 10 ml, siêu âm 30 0
C trong 15 phút, lắc đều, để lắng 10 phút, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Mẫu thử đƣợc tiêm vào hệ thống HPLC.
Điều kiện sắc ký:
+ Pha động: acetonitril (A) và acid phosphoric 0,2% (B) (4:6), thời gian chạy là 10 phút
+ Cột sắc ký: Phenomenex Gemini C18 (5 mcg x 4,6 x 100 mm) + Đầu dò DAD, bƣớc sóng phát hiện: 347 nm
+ Tốc độ dịng: 1 ml/phút + Thể tích tiêm mẫu: 25 µl + Nhiệt độ cột: 30 ± 1 oC
Hàm lƣợng (μg) luteolin trong 1 viên nén Lá đắng 1 g là:
luteolin ( g) ST SC mC H DC mTB DT mc n 1000 1 1,25
Xluteolin (µg): hàm lƣợng luteolin trong viên nén Lá đắng ST: diện tích pic của mẫu thử
SC: diện tích pic của mẫu chuẩn mC: khối lƣợng cân chất chuẩn (mg) H%: hàm lƣợng chất chuẩn luteolin (%)
mcân: khối lƣợng bột thuốc cân định lƣợng (mg) mTB: khối lƣợng trung bình viên (mg)
DC: độ pha loãng mẫu chuẩn DT: độ pha loãng mẫu thử Yêu cầu: ≥ 50 μg
3.3.2.5. Thực nghiệm kiểm chứng công thức đƣợc lựa chọn
Bào chế 3 lô theo công thức đƣợc chọn và quy trình lơ labo, kiểm tra các tiêu chuẩn chất lƣợng để kiểm chứng tính lặp lại của các TCCL của cơng thức đƣợc chọn.
3.3.2.6. Thẩm định quy trình định lƣợng luteolin trong viên nén Lá đắng bằng phƣơng pháp HPLC
Quy trình định lƣợng [11], [40], [64]
Dung dịch chuẩn gốc: cân chính xác 10 mg luteolin chuẩn hòa tan với lƣợng vừa đủ MeOH trong bình định mức 50 ml. Hút chính xác 25 ml dung dịch vừa pha pha lỗng với lƣợng vừa đủ MeOH trong bình định mức 100 ml. Dung dịch thu đƣợc có nồng độ luteolin khoảng 50 μg/ml.
Điều kiện sắc ký
+ Pha động: acetonitril (A) và acid phosphoric 0,2% (B) (4:6), thời gian chạy là 10 phút
+ Cột sắc ký: Phenomenex Gemini C18 (5 mcg x 4,6 x 100 mm) + Đầu dò DAD, bƣớc sóng phát hiện: 347 nm
+ Tốc độ dịng: 1 ml/phút + Thể tích tiêm mẫu: 25 µl + Nhiệt độ cột: 30 ± 1 oC a) Tính tƣơng thích hệ thống Thực hiện theo mục 3.3.1.6 b) Độ đặc hiệu
- Mẫu placebo: cân chính xác khoảng 625 mg placebo cho vào bình định mức 10 ml, thêm 10 ml methanol, siêu âm trong 15 phút, thêm methanol đến vạch, lọc qua màng 0,45 µm.
- Mẫu chuẩn: sử dụng dung dịch tuyến tính mẫu 100%
- Mẫu thử: cân chính xác 1250 mg bột viên, thêm MeOH vừa đủ trong bình định mức 10 ml, siêu âm 30 0C trong 15 phút, lắc đều, để lắng 10 phút, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Mẫu thử đƣợc tiêm vào hệ thống HPLC.
Triển khai sắc ký: chạy lần lƣợt mẫu placebo, dung dịch chuẩn, dung dịch thử và placebo thêm chuẩn.
Ghi nhận sắc ký đồ của các mẫu.
Hệ số tƣơng đồng ( ) Tth Tchuẩn
Trong đó: Tthử,Tchuẩn lần lƣợt là thời gian lƣu của pic mẫu thử và mẫu chuẩn.
Yêu cầu:
- Sắc ký đồ mẫu thử và mẫu chuẩn: thời gian lƣu của pic chính trong mẫu thử phải tƣơng đƣơng với mẫu chuẩn.
- Sắc ký đồ mẫu placebo khơng có pic trùng với pic của hoạt chất.
- Khi thêm một lƣợng chất chuẩn vào một placebo, diện tích pic của placebo phải tăng lên so với trƣớc khi thêm chất đối chiếu.
c) Tính tuyến tính – khoảng tuyến tính
Thực hiện theo mục 3.3.1.6
d) Độ lặp lại
- Độ lặp lại đƣợc thực hiện bằng cách định lƣợng ít nhất 6 mẫu thử khác nhau. - Xác định độ lệch chuẩn tƣơng đối của hàm lƣợng mẫu thử.
Mẫu thử: cân chính xác 1250 mg bột viên, thêm MeOH vừa đủ trong bình định mức 10 ml, siêu âm 30 0C trong 15 phút, lắc đều, để lắng 10 phút, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Mẫu thử đƣợc tiêm vào hệ thống HPLC. Thực hiện 6 mẫu thử lặp lại. Tính % RSD của 6 mẫu.
Yêu cầu: Giá trị RSD (%) giữa các kết quả định lƣợng phải ≤ 2,0% [38].
e) Độ chính ác trung gian
Tiến hành tƣơng tự nhƣ độ lặp lại nhƣng thực hiện ngày khác và khác kiểm nghiệm viên.
Tính giá trị RSD (%) của các kiểm nghiệm viên
Thống kê so sánh giá trị trung bình giữa 2 kiểm nghiệm viên
Yêu cầu [38]:
- Giá trị RSD (%) của 6 mẫu định lƣợng riêng biệt với mỗi kiểm nghiệm viên ≤ 2,0%
- Giá trị RSD (%) của 12 mẫu định lƣợng riêng biệt với mỗi kiểm nghiệm viên ≤ 2,0%
- 2 kiểm nghiệm viên đồng nhất thống kê
f) Độ đúng
Pha dung dịch placebo đậm đặc: cân chính xác khoảng 7,5 g placebo cho vào bình
định mức 200 ml, thêm MeOH vừa đủ trong bình định mức 200 ml, siêu âm 30 0C trong 15 phút, lắc đều, để lắng 20 phút, lọc qua màng lọc 0,45 µm.
Pha các dung dịch độ đúng: Hút chính xác 5 ml dung dịch Placebo đậm đặc cho
vào bình định mức 10 ml, thêm chính xác thể tích dung dịch chuẩn gốc độ đúng ở tỷ lệ tƣơng ứng Bảng 3.15 bên dƣới. Thêm MeOH vừa đủ đến vạch, siêu âm 30 0C trong 15 phút, lắc đều, để lắng 10 phút. Lọc qua màng 0,45 µm. Mỗi nồng độ thực hiện 3 mẫu, tính tỷ lệ phục hồi của từng mẫu và tính giá trị RSD (%) của 3 mẫu trong cùng nồng độ.