(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam

(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu mối liên quan giữa 3 Alen HLA lớp I với nguy cơ phản ứng có hại trên da nghiêm trọng của Allopurinol ở người Kinh Việt Nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM TRẦN THU HÀ NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN QUAN GIỮA ALEN HLA LỚP I VỚI NGUY CƠ PHẢN ỨNG CÓ HẠI TRÊN DA NGHIÊM TRỌNG CỦA ALLOPURINOL Ở NGƯỜI KINH VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM TRẦN THU HÀ NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN QUAN GIỮA ALEN HLA LỚP I VỚI NGUY CƠ PHẢN ỨNG CÓ HẠI TRÊN DA NGHIÊM TRỌNG CỦA ALLOPURINOL Ở NGƯỜI KINH VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA SINH DƯỢC MÃ SỐ: 62720408 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Phùng Thanh Hương PGS TS Trần Quang Bình HÀ NỘI, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi Phạm Trần Thu Hà, nghiên cứu sinh niên khóa 2017 chuyên ngành Hóa sinh dược, Trường Đại học Dược Hà Nội, xin cam đoan: Luận án trực tiếp thực hướng dẫn PGS TS Phùng Thanh Hương, Bộ mơn Hóa sinh, Trường Đại học Dược Hà Nội PGS TS Trần Quang Bình, Khoa Dinh dưỡng Bệnh không lây nhiễm, Viện Dinh dưỡng Quốc gia Luận án không trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin luận án xác, khách quan, chấp thuận xác nhận sở nơi luận án triển khai thu thập số liệu Các kết công bố chung cán hướng dẫn đồng tác giả cho phép sử dụng luận án Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2022 Nghiên cứu sinh Phạm Trần Thu Hà i LỜI CẢM ƠN Trong hành trình năm làm nghiên cứu sinh, tơi nhận giúp đỡ tận tâm chân thành nhiều thầy cô, anh chị em, bạn bè, đồng nghiệp thành viên gia đình Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS TS Phùng Thanh Hương, Bộ mơn Hóa sinh, Trường Đại học Dược Hà Nội PGS TS Trần Quang Bình, Khoa Dinh dưỡng Bệnh không lây nhiễm, Viện Dinh dưỡng Quốc gia - hai người thầy tận tâm hướng dẫn khích lệ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tinh thần trách nhiệm, kiến thức nhiệt tâm học trò thầy cô gương động lực để không ngừng cố gắng, nỗ lực vượt qua giai đoạn khó khăn để hồn thành luận án Tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới toàn thể thầy cơ, kỹ thuật viên Bộ mơn Hóa sinh đồng hành hỗ trợ từ cịn học viên cao học Bộ mơn tới ngày hôm Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Dược Hà Nội, PGS TS Đỗ Hồng Quảng thầy Phịng Sau đại học đồng hành giúp đỡ q trình tơi học tập trường Tơi xin trân trọng cảm ơn Bộ Y tế cấp kinh phí cho Đề tài cấp Bộ Y tế “Khảo sát tần suất số alen HLA lớp I cộng đồng người Kinh Việt Nam nhóm bệnh nhân sử dụng allopurinol” để tơi có hội thực luận án tiến sĩ Tôi chân thành cảm ơn PGS TS Nguyễn Hoàng Anh anh/chị/em Trung tâm Quốc gia Thông tin thuốc Theo dõi phản ứng có hại thuốc nhiệt tình hỗ trợ q trình xây dựng triển khai đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS TS Rosita Gabbianelli, TS Donatella Fedeli, TS Laura Bordoni hết lòng hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi để tơi làm quen với cơng việc phịng thí nghiệm thời gian tơi học tập trao đổi Đại học Camerino, Ý ii Tôi xin cảm ơn Ban giám hiệu, Hội sinh viên Trường Đại học Dược Hà Nội, Trường Đại học Hà Tĩnh, Trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh hết lòng giúp đỡ giai đoạn thu mẫu cộng đồng Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể bác sĩ, điều dưỡng Trung tâm Dị ứng – Miễn dịch Lâm sàng, Bệnh viện Bạch Mai tập thể bác sĩ bác sĩ, y tá, điều dưỡng Bệnh viện Đa khoa tỉnh Thái Bình tập thể cán Trung tâm kiểm soát bệnh tật tỉnh Thái Bình tạo điều kiện thuận lợi, nhiệt tình tham gia q trình thu mẫu bệnh nhân Tơi xin chân thành cảm ơn người tình nguyện cộng đồng bệnh nhân chấp thuận tham gia nghiên cứu sẵn lịng chia sẻ thơng tin để tơi có liệu nghiên cứu giá trị Tôi xin trân trọng cảm ơn ý kiến đóng góp chân thành đầy tính xây dựng TS Lê Nhật Minh, TS Nguyễn Hải Hà, TS Nguyễn Thị Đông, BS Trần Ngọc Phương Mai tập thể cán Khoa dinh dưỡng Bệnh không lây nhiễm, Viện Dinh dưỡng Quốc gia; tập thể cán Phòng sinh học phân tử ứng dụng, Trung tâm Nghiên cứu Y sinh học, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương Những ý kiến đóng góp quý báu giúp tơi triển khai hồn thiện luận án Tôi xin chân thành cảm ơn DS CKII Nguyễn Thế Tin, TS Mai Lệ Hoa tồn thể chú, anh chị em đồng nghiệp Trung tâm đào tạo liên tục – Trường Đại học Đại Nam tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ suốt q trình làm nghiên cứu Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tất thành viên đồng hành từ ngày đầu triển khai đề tài nhiều người thầm lặng đồng hành giúp đỡ mà kể hết tên Sau cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến bố mẹ, người thân, bạn bè chỗ dựa tinh thần vững cho suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ix DANH MỤC CÁC BẢNG xiii DANH MỤC CÁC HÌNH xv ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Phản ứng có hại da nghiêm trọng thuốc 1.1.1 Khái niệm chung 1.1.2 Các týp SCARs đáng ý 1.1.2.1 Hội chứng Stevens–Johnson hoại tử biểu bì nhiễm độc 1.1.2.2 Hội chứng mẫn thuốc 1.1.2.3 Ban mụn mủ toàn thân cấp tính 1.1.3 Dịch tễ phản ứng có hại da nghiêm trọng allopurinol 1.1.4 Cơ chế phân tử SCARs allopurinol 1.2 Tổng quan alen HLA lớp I 10 1.2.1 Giới thiệu chung siêu họ gen HLA 10 1.2.2 Danh pháp alen HLA 11 1.2.3 Đặc điểm siêu họ gen HLA 13 1.2.4 Vị trí, cấu trúc gen HLA lớp I 15 1.2.4.1 Vị trí gen HLA lớp I 15 1.2.4.2 Cấu trúc – chức gen HLA lớp I 15 1.3 Các nghiên cứu alen HLA lớp I có liên quan với nguy SCARs allopurinol 18 1.3.1 Các nghiên cứu giới 18 1.3.2 Các nghiên cứu Việt Nam 21 1.4 Các phương pháp phát alen HLA lớp I liên quan tới SCARs allopurinol 24 iv 1.4.1 Các phương pháp phát alen HLA lớp I liên quan tới nguy SCARs allopurinol giới 24 1.4.2 Các phương pháp phát alen HLA lớp I liên quan tới nguy SCARs allopurinol Việt Nam 28 1.4.3 Phương pháp phát alen HLA lớp I luận án 29 1.4.3.1 Phương pháp phát alen HLA-A*33:03 HLA-C*03:02 29 1.4.3.2 Phương pháp phát alen HLA-B*58:01 32 Chương ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Đối tượng nghiên cứu 33 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu xây dựng, tối ưu hóa thẩm định quy trình phát alen HLA lớp I 33 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu cộng đồng người Kinh Việt Nam 34 2.1.3 Đối tượng nghiên cứu bệnh nhân sử dụng allopurinol 35 2.1.3.1 Nhóm bệnh nhân dung nạp với allopurinol 35 2.1.3.2 Nhóm bệnh nhân bị SCARs allopurinol 36 2.2 Nguyên liệu, trang thiết bị dùng nghiên cứu 37 2.2.1 Nguyên liệu, hóa chất, vật tư tiêu hao dùng nghiên cứu 37 2.2.2 Thiết bị dùng nghiên cứu 37 2.3 Phương pháp nghiên cứu 38 2.3.1.Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 38 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu giải mục tiêu “Xây dựng thẩm định quy trình phát alen HLA-A*33:03, HLA-B*58:01 HLA-C*03:02” 39 2.3.2.1 Phương pháp tách chiết ADN 39 2.3.2.2 Phương pháp xây dựng quy trình phát alen HLA-A*33:03 39 2.3.2.3 Phương pháp xây dựng quy trình phát alen HLA-B*58:01 42 2.3.2.4 Phương pháp xây dựng quy trình phát alen HLA-C*03:02 43 2.3.2.5 Phương pháp thẩm định quy trình xây dựng 45 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu giải mục tiêu “Xác định tần suất alen HLA-A*33:03, HLA-B*58:01 HLA-C*03:02 cộng đồng người Kinh Việt Nam”…………… 46 v 2.3.3.1 Phương pháp nghiên cứu chung 46 2.3.3.2 Phương pháp thu mẫu 46 2.3.3.3 Phương pháp phát alen HLA lớp I tính tần suất alen 47 2.3.4 Phương pháp nghiên cứu giải mục tiêu “Đánh giá mối liên quan alen HLA-A*33:03, HLA-B*58:01 HLA-C*03:02 với nguy phản ứng có hại da nghiêm trọng dùng allopurinol bệnh nhân người Kinh Việt Nam”…………… 48 2.3.4.1 Phương pháp nghiên cứu chung 48 2.3.4.2 Phương pháp thu mẫu 50 2.3.4.3 Phương pháp phát alen HLA lớp I 52 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 52 2.5 Đạo đức nghiên cứu 53 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 54 3.1 Kết mục tiêu “Xây dựng thẩm định quy trình phát alen HLA-A*33:03, HLA-B*58:01, HLA-C*03:02” 54 3.1.1 Kết xây dựng thẩm định quy trình phát alen HLA-A*33:03 54 3.1.1.1 Kết thiết kế mồi xây dựng bước PCR quy trình phát alen HLA-A*33:03… 54 3.1.1.2 Kết khảo sát điều kiện hoạt động cặp mồi HLAAB1F/HLAAB1R sử dụng cho phản ứng PCR bước 57 3.1.1.3 Kết khảo sát điều kiện hoạt động cặp mồi sử dụng cho phản ứng PCR bước 59 3.1.1.4 Kết thử nghiệm quy trình nested AS – PCR phát alen HLA-A*33:03 với mẫu chứng 63 3.1.1.5 Kết thẩm định quy trình phát alen HLA-A*33:03 phương pháp giải trình tự Sanger 64 3.1.2 Kết xây dựng thẩm định quy trình phát alen HLA-B*58:01 65 3.1.2.1 Kết lựa chọn mồi 65 3.1.2.2 Kết khảo sát điều kiện hoạt động cặp mồi 67 vi 3.1.2.3 Kết thử nghiệm quy trình SSP – PCR phát alen HLA-B*58:01 với mẫu chứng… 71 3.1.2.4 Kết thẩm định quy trình phát alen HLA-B*58:01 phương pháp giải trình tự Sanger 72 3.1.3 Kết xây dựng thẩm định quy trình phát alen HLA-C*03:02 72 3.1.3.1 Kết thiết kế mồi xây dựng bước PCR quy trình phát alen HLA-C*03:02… 72 3.1.3.2 Kết khảo sát điều kiện hoạt động cặp mồi HLACB1F/HLACB1R sử dụng cho phản ứng PCR bước 76 3.1.3.3 Kết khảo sát điều kiện hoạt động cặp mồi sử dụng cho phản ứng PCR bước 78 3.1.3.4 Kết thử nghiệm quy trình nested AS – PCR phát alen HLA-C*03:02 với mẫu chứng 83 3.1.3.5 Kết thẩm định quy trình phát alen HLA-C*03:02 phương pháp giải trình tự Sanger 84 3.2 Kết mục tiêu “Xác định tần suất alen HLA-A*33:03, HLAB*58:01, HLA-C*03:02 cộng đồng người Kinh Việt Nam” 85 3.2.1 Kết tóm tắt đặc điểm nhóm cộng đồng người Kinh Việt Nam 85 3.2.2 Kết tần suất cá thể mang alen, tần suất alen đặc điểm phân bố alen giới miền 86 3.2.3 Kết tần suất cá thể mang alen tần suất tổ hợp alen 89 3.3 Kết mục tiêu “Đánh giá mối liên quan alen HLA-A*33:03, HLA-B*58:01, HLA-C*03:02 với nguy phản ứng có hại da nghiêm trọng dùng allopurinol bệnh nhân người Kinh Việt Nam” 90 3.3.1 Kết tóm tắt đặc điểm nhóm SCARs allopurinol nhóm dung nạp với allopurinol 90 3.3.2 Kết so sánh tần suất cá thể mang alen tần suất alen nhóm nghiên cứu… 95 3.3.3 Kết đánh giá mối liên quan alen với nguy SCARs allopurinol… 99 vii 3.3.4 Kết đánh giá mối liên quan yếu tố không di truyền di truyền liên quan tới nguy SCARs allopurinol 102 Chương BÀN LUẬN 109 4.1 Về kết mục tiêu “Xây dựng thẩm định quy trình phát alen HLA-A*33:03, HLA-B*58:01 HLA-C*03:02” 109 4.1.1 Về quy trình phát alen HLA-A*33:03 109 4.1.2 Về quy trình phát alen HLA-B*58:01 114 4.1.3 Về quy trình phát alen HLA-C*03:02 117 4.2 Về kết mục tiêu “Xác định tần suất alen HLA-A*33:03, HLAB*58:01 HLA-C*03:02 cộng đồng người Kinh Việt Nam” 121 4.3 Về kết mục tiêu “Đánh giá mối liên quan alen HLA-A*33:03, HLA-B*58:01 HLA-C*03:02 với nguy phản ứng có hại da nghiêm trọng dùng allopurinol bệnh nhân người Kinh Việt Nam” 126 4.3.1 Về tần suất alen HLA-A*33:03, HLA-B*58:01 HLA-C*03:02 nhóm dung nạp với allopurinol nhóm SCARs allopurinol 126 4.3.2 Về mối liên quan alen/tổ hợp alen HLA lớp I với nguy SCARs allopurinol 129 4.3.3 Về mối liên yếu tố di truyền yếu tố không di truyền khác với nguy SCARs allpurinol 132 4.3.4 Về mức độ ảnh hưởng yếu tố di truyền chức thận với nguy SCARs allopurinol 137 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 142 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ 145 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC viii ... Phương pháp nghiên cứu gi? ?i mục tiêu “Đánh giá m? ?i liên quan alen HLA- A *33 : 03, HLA- B*58:01 HLA- C* 03: 02 v? ?i nguy phản ứng có h? ?i da nghiêm trọng dùng allopurinol bệnh nhân ngư? ?i Kinh Việt Nam? ??……………... giá m? ?i liên quan alen HLA- A *33 : 03, HLA- B*58:01 HLA- C* 03: 02 v? ?i nguy phản ứng có h? ?i da nghiêm trọng dùng allopurinol bệnh nhân ngư? ?i Kinh Việt Nam? ?? 126 4 .3. 1 Về tần suất alen HLA- A *33 : 03, ... tổ hợp alen 89 3. 3 Kết mục tiêu “Đánh giá m? ?i liên quan alen HLA- A *33 : 03, HLA- B*58:01, HLA- C* 03: 02 v? ?i nguy phản ứng có h? ?i da nghiêm trọng dùng allopurinol bệnh nhân ngư? ?i Kinh Việt Nam? ??