PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TAXOID TỪ LÁ THÔNG ĐỎ LÁ DÀI (TAXUS WALLICHIANA ZUCC.) TRỒNG Ở LÂM ĐỒNG, ĐỊNH HƯỚNG THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH HỨA HỒNG OANH PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TAXOID TỪ LÁ THÔNG ĐỎ LÁ DÀI (TAXUS WALLICHIANA ZUCC.) TRỒNG Ở LÂM ĐỒNG, ĐỊNH HƯỚNG THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2020 ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH HỨA HOÀNG OANH PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TAXOID TỪ LÁ THÔNG ĐỎ LÁ DÀI (TAXUS WALLICHIANA ZUCC.) TRỒNG Ở LÂM ĐỒNG, ĐỊNH HƯỚNG THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC MÃ SỐ: 62720410 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS NGUYỄN PHƯƠNG DUNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết trình bày luận án trung thực, chưa công bố cơng trình khác Người cam đoan Hứa Hoàng Oanh iv MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vii DANH MỤC SƠ ĐỒ x MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ THÔNG ĐỎ LÁ DÀI 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG THÔNG ĐỎ 12 1.3 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA THÔNG ĐỎ 19 1.4 TỔNG QUAN CÁC NGHIÊN CỨU VỀ CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ PHÂN TÍCH CÁC HỢP CHẤT TAXOID TỪ THÔNG ĐỎ .21 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 33 2.2 DUNG MƠI, HĨA CHẤT 33 2.3 DỤNG CỤ, TRANG THIẾT BỊ 33 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 46 3.1 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP TAXOID TRONG LÁ THÔNG ĐỎ LÁ DÀI 46 3.2 THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU 69 3.3 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI CÁC TAXOID BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 87 CHƯƠNG BÀN LUẬN 103 v 4.1 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG TAXOID TRONG LÁ THÔNG ĐỎ LÁ DÀI .103 4.2 THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU 117 4.3 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI MỘT SỐ HỢP CHẤT TAXOID 118 TÍNH MỚI CỦA ĐỀ TÀI 124 KẾT LUẬN 125 KIẾN NGHỊ 127 DANH MỤC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 132 TÀI LIỆU THAM KHẢO .1 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết Từ nguyên tắt (M)Hz (Mega)Hertz ACN Acetonitrile CĐC Chất đối chiếu COSY Correlated Spectroscopy cs cộng d doublet dd doublets of doublet Đỉnh đôi kép DCM Dichloromethan Distortionless Enhancement by DEPT Ethyl acetate EtOH Ethanol Heteronuclear Multiple Bond HPLC HSQC IR (Phổ) tương quan 1H – 1H Đỉnh đôi Polarization Transfer EtOAc HMBC Nghĩa tiếng Việt Correlation Sắc ký lỏng hiệu High Performance Liquid cao Chromatography Heteronuclear Single Quantum Correlation Infrared Hồng ngoại J Coupling constant Hằng số ghép L Liter Lít m Multiplet Đỉnh đa MeOH Methanol MPLC MS Medium Pressure Liquid Sắc ký lỏng áp suất trung Chromatography Mass Spectroscopy bình Khối phổ Ký hiệu, Từ nguyên Nghĩa tiếng Việt chữ viết tắt NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân PDA Photo diode array Dãy diod quang PFP Pentafluorophenyl PE Petrolium ether Pđ Phân đoạn Ether dầu hỏa PTN Phịng thí nghiệm SKC S ắc ký cột SKĐ Sắc ký đồ SKLM Sắc ký lớp mỏng TLTK Tài liệu tham khảo TT Thuốc thử Tw1 Taxus wallichiana Tw2 Taxus wallichiana UV-Vis UPLC 10- DAB 10-DAT Phân đoạn cao thông đỏ qua sắc ký cột Phân đoạn cao thông đỏ qua sắc ký cột Ultraviolet Visible Tử ngoại – Khả kiến Ultra Performance Liquid Sắc ký lỏng siêu hiệu Chromatography 10-deacetylbaccatin 10-deacetyltaxol DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Các hợp chất diterpen phân lập từ Taxus wallichiana 15 Bảng 1.2 Các hợp chất tinh dầu Taxus wallichiana Zucc 18 Bảng 1.3 Các phương pháp chiết xuất taxoid dung môi sử dụng 23 Bảng 1.4 Các phương pháp phân tích định lượng hợp chất taxoid 32 Bảng 2.1 Ký hiệu, thời gian địa điểm thu hái mẫu khảo sát .33 Bảng 3.1 Kết định tính thành phần hóa học dịch chiết 46 Bảng 3.2 Kết phân lập phân đoạn giàu taxoid sắc ký cột cổ điển 49 Bảng 3.3 Điều kiện sắc ký HPLC đánh giá độ tinh khiết tinh hợp chất (1) (2) 51 Bảng 3.4 Điều kiện sắc ký phân lập đánh giá độ tinh khiết hợp chất (3) 52 Bảng 3.5 So sánh liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất (1) taxinin B 55 Bảng 3.6 So sánh liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất (2) taxuspin F .58 Bảng 3.7 So sánh liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất (3) 10-deacetyl taxinin B 62 Bảng 3.8 So sánh liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất (4) với taxuspin D 65 Bảng 3.9 So sánh liệu phổ1H-NMR 13C-NMR hợp chất (5) với taxchinin B.68 Bảng 3.10 Kết khảo sát độ tinh khiết hợp chất kỹ thuật HPLC 71 Bảng 3.11 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống phương pháp HPLC 71 Bảng 3.12 Kết khảo sát tính tuyến tính 74 Bảng 3.13 Kết khảo sát độ (n = 9) 77 Bảng 3.14 Dữ liệu phổ UV-Vis, MS điểm chảy, suất quay cực chất phân tích 79 Bảng 3.15 Dữ liệu phổ IR chất phân tích 79 Bảng 3.16 Khảo sát độ lặp lại taxinin B 80 Bảng 3.17 Khảo sát độ lặp lại taxuspin F 81 Bảng 3.18 Khảo sát độ lặp lại 10-deacetyl taxinin B 81 Bảng 3.19 Khảo sát độ lặp lại taxuspin D 82 Bảng 3.20 Kết kiểm tra độ đồng lô nguyên liệu chất đối chiếu .83 Bảng 3.21 Kết đánh giá phân tích thống kê ANOVA yếu tố .83 Bảng 22 Kết đánh giá liên PTN phân tích thống kê ANOVA yếu tố 84 Bảng 3.23 Xác định giá trị ấn định taxinin B 85 Bảng 3.24 Xác định giá trị ấn định taxuspin F 85 Bảng 3.25 Xác định giá trị ấn định 10-deacetyl taxinin B .86 Bảng 3.26 Xác định giá trị ấn định taxuspin D .86 Bảng 3.27 Chương trình rửa giải gradient định lượng đồng thời taxoid 92 Bảng 28 Kết khảo sát tính tuyến tính, giới hạn phát giới hạn định lượng 99 Bảng 3.29 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống (%RSD) 99 Bảng 3.30 Kết khảo sát độ lặp lại độ xác trung gian (n = 6) .100 Bảng 3.31 Kết khảo sát độ (n = 9) 100 Bảng 3.32 Hàm lượng taxoid mẫu thử TW 101 Bảng 4.1 So sánh hệ số di chuyển Rf pic phân đoạn Tw1-3 khảo sát với hệ dung môi khai triển SKLM 108 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Thơng đỏ dài mọc tự nhiên Hình 1.2 Thơng đỏ dài trồng Hình 1.3 Vi phẫu Taxus caespitosa var latifolia Hình 1.4 Các dạng hạt Taxus sp Hình 1.5 Lá hạt Taxus contorta var contorta Hình 1.6 Dạng Taxus contorta var mucronata có uốn cong, từ Bhutan Hình 1.7 Taxus chinensis với hạt có đầu nhọn, từ Quý Châu, Trung Quốc Hình 1.8 Cành Taxus chinensis núi Nga Mi, Tứ Xuyên, Trung Quốc Hình 1.9 Cành Taxus wallichiana từ Khasia, Ấn Độ Hình 1.10 Lá T wallichiana var yunnanensis, từ Vân Nam, Trung Quốc Hình 1.11 Lá T wallichiana var wallichiana Đơng Himalaya Hình 1.12 Khung taxoid Hình 1.13 Khung 6/8/6 hợp chất taxoid Thông đỏ PL3- Thiết lập chất đối chiếu • Kiểm tra nguyên liệu 10-deacetyl taxinine B phương pháp HPLC • Kiểm tra nguyên liệu taxinine B phương pháp HPLC PL3.2- Phiếu phân tích PTN đạt GLP PL4- Thẩm định quy trình định lượng đồng thời ... chất n-Eicosan, docosan, n-pentacosan Santolina trien 1-Hepten-3-ol, (E )-2 -hexenol, n-hexenol, n-heptan-2-ol, n-heptanol, (E )-2 -octen-1-ol, (Z )- 2-octen-1-ol, 1- octanol, (E)-verbenol, (E )-2 -nonenol,... 2- 19-debenzoyl-19IV, 5-deacetyl- 1- hydroxybaccatin I, 2-deacetoxytaxinin B, 5αO-(3′-dimethylamino-3′phenylpropionyl) taxinin M Gỗ 7-O-Acetyltaxin A, 2α-acetoxy-2′β-deacetylaustrospicatin, 1-hydroxy2-deacetoxy-5-decinnamoyl-taxinin... taxayuntin, 2α-acetoxybrevifoliol, 5α,7β,10β,13α-tetrahydroxy-2,9,15triacetoxy-11(1 5-1 )-abeotaxa-4(20),11-dien, 5α,9α,10β,13? ?- tetraacetoxy-15-hydroxy-11(1 5-1 )-abeotaxa-4(20),11-dien, I, 7,9-dideacetyltaxayuntin,