Phân lập một số hợp chất taxoid từ lá thông đỏ lá dài (taxus wallichiana zucc ) trồng ở lâm đồng, định hướng thiết lập chất đối chiếu

B ăGIÁOăD CăVÀă ÀOăT O IăH CăYăD B ăYăT CăTHĨNHăPH ăH ăCHệăMINH H AăHOĨNGăOANH PHỂNăL PăM TăS ăH PăCH TăTAXOID T ăLỄăTHỌNGă ăLỄăDĨIă(TAXUS WALLICHIANA ZUCC.) TR NGă ă LỂMă NG,ă NHăH NGăTHI TăL PăCH Tă LU NăỄNăTI NăS ăD CăH C THĨNHăPH ăH ăCHệăMINHă- N Mă2020 IăCHI U B ăGIÁOăD CăVÀă ÀOăT O IăH CăYăD B ăYăT CăTHĨNHăPH ăH ăCHệăMINH H AăHOĨNGăOANH PHỂNăL PăM TăS ăH PăCH TăTAXOID T ăLỄăTHỌNGă ăLỄăDĨIă(TAXUS WALLICHIANA ZUCC.) TR NGă ă LỂMă NG,ă NHăH NGăTHI TăL PăCH Tă IăCHI U NGĨNH:ăKI MăNGHI MăTHU C MĩăS :ă62720410 LU NăỄNăTI NăS ăD Ng iăh CăH C ngăd năkhoaăh c:ăPGS.ăTS.ăNGUY NăPH THĨNHăPH ăH ăCHệăMINHă- N Mă2020 NGăDUNG L IăCAMă OAN TơiăxinăcamăđoanăđơyălƠăcơngătrìnhănghiênăc uăc aăriêngătơi.ăCácăs ăli u,ăk tă qu ăđ cătrìnhăbƠyătrongălu năánălƠătrungăth c,ăvƠăch aăt ngăđ căaiăcơngăb ă trongăb tăk ăcơngătrìnhănƠoăkhác Ng iăcamăđoan H aăHoƠngăOanh i M CăL C M CăL C i DANHăM CăCỄC KụăHI U,ăCH ăVI TăT T iii DANHăM CăCỄCăB NG v DANHăM CăCỄCăHỊNH vii DANHăM CăS ă x M ă U CH NGă1.ăT NGăQUANăTÀIăLI U 1.1.ăT NGăQUANăV ăTHỌNGă ăLÁăDÀI 1.2.ăTHÀNHăPH NăHịAăH CăTRONGăTHỌNGă 1.3.ăTÁCăD NGăD CăLụăC AăTHỌNGă 12 19 1.4.ă T NGă QUANă CÁCă NGHIểNă C Uă V ă CHI Tă XU T,ă PHỂNă L Pă VÀă PHỂNăTệCHăCÁCăH PăCH TăTAXOIDăT ăTHỌNGă CH NGă2.ăPH 2.1.ă IăT 21 NGăPHÁPăNGHIểNăC U 33 NGăNGHIểNăC U 33 2.2 DUNGăMỌI,ăHịAăCH T 33 2.3 D NGăC ,ăTRANGăTHI TăB 33 2.4 PH CH NGăPHÁPăNGHIểNăC U 35 NGă3.ăK TăQU ăNGHIểNăC U 46 3.1.ăCHI TăXU T,ăPHỂNăL PăTAXOIDăTRONGăLÁăTHỌNGă 3.2.ăTHI TăL PăCH Tă IăCHI U 69 3.3.ă XỂYă D NGă QUYă TRỊNHă B NGăPH CH ăLÁăDÀI 46 NHă L NGă NGă TH Iă CÁCă TAXOIDă NGăPHÁPăS C KụăL NGăHI UăN NGăCAO 87 NGă4.ăBÀNăLU N 103 ii 4.1.ă CHI Tă XU T,ă PHỂNă L P,ă XÁCă NHăL NHă C Uă TRỎCă VÀă NGăTAXOIDăTRONGăLÁăTHỌNGă 4.2.ăTHI TăL PăCH Tă NHă TệNH,ă ăLÁăDÀI 103 IăCHI U 117 4.3.ă XỂYă D NGă QUYă TRỊNHă NHă L NGă NGă TH Iă M Tă S ă H Pă CH TăTAXOID 118 TệNHăM IăC Aă ăTÀI 124 K TăLU N 125 KI NăNGH 127 DANHăM CăCỌNGăTRỊNHăNGHIểNăC UăLIểNăQUANă NăLU NăỄN 132 TĨIăLI UăTHAMăKH O PH ăL C iii DANHăM CăCÁC KụăHI U, CH ăVI TăT T KỦăhi u,ă ch vi t T ănguyên Ngh aăti ngăVi t t t (M)Hz (Mega)Hertz ACN C C Acetonitrile Ch tăđ iăchi u COSY Correlated Spectroscopy cs c ngăs d doublet nhăđôi dd doublets of doublet nhăđôiăḱp DCM Dichloromethan Distortionless Enhancement by DEPT EtOAc EtOH HMBC (Ph )ăt ngăquană1H ậ 1H Polarization Transfer Ethyl acetate Ethanol Heteronuclear Multiple Bond Correlation High Performance Liquid S că kỦă l ngă hi uă n ngă Chromatography Heteronuclear Single Quantum Correlation cao IR Infrared H ng ngo i J L Coupling constant Liter H ng s gh́p Lít m MeOH Multiplet Methanol HPLC HSQC MPLC MS nh đa Medium Pressure Liquid S căkỦăl ngăápăsu tătrungă Chromatography bình Mass Spectroscopy Kh iăph iv KỦăhi u,ă ch vi t t t T ănguyên Ngh aăti ngăVi t NMR Nuclear Magnetic Resonance C ngăh PDA Photo diode array Dãy diod quang PFP Pentafluorophenyl PE Petrolium ether Pđ PTN SKC Phơnăđo n Phịngăthíănghi m S căkỦăc t SK S căkỦăđ SKLM S c kỦ l p m ng TLTK TT TƠiăli uăthamăkh o Thu căth Tw1 Taxus wallichiana Tw2 Taxus wallichiana UV-Vis Ultraviolet Visible Ultra Performance Liquid Chromatography UPLC 10-DAB 10-deacetylbaccatin 10-DAT 10-deacetyltaxol ng t h t nhân Ether d uăh a Phơnă đo nă 1ă c aă cao thôngăđ ăquaăs căkỦăc tă Phơnă đo n 2ă c a cao thôngăđ ăquaăs căkỦăc t T ăngo iăậ Kh ăki n S că kỦă l ngă siêuă hi uă n ng v DANHăM CăCÁC B NG Trang B ngă1.1 Cácăh păch tăditerpenăphơnăl păt Taxus wallichiana 15 B ngă1.2.ăCácăh păch tătrongătinhăd uă ăláăTaxus wallichiana Zucc 18 B ngă1.3.ăCácăph ngăphápăchi tăxu tătaxoidăvƠăcácădungămơiăđ B ngă1.4.ăCácăph ngăphápăphơnătíchăđ nhăl căs ăd ng 23 ngăcácăh păch tătaxoid 32 B ngă2.1 KỦăhi u,ăth iăgianăvƠăđ aăđi măthuăháiăcácăm uăkh oăsát 33 B ngă3.1.ăK tăqu ăđ nhătínhăthƠnhăph năhóaăh cătrênăcácăd chăchi t 46 B ngă3.2.ăK tăqu ăphơnăl păcácăphơnăđo năgiƠuătaxoidăb ngăs căkỦăc tăc ăđi n 49 B ngă3.3.ă i uăki năs căkỦăHPLCătrongăđánhăgiáăđ ătinhăkhi tăvƠătinhăs chăcácăh pă ch tă(1) (2) 51 B ngă3.4.ă i uăki năs căkỦătrongăphơnăl păvƠăđánhăgiáăđ ătinhăkhi tăh păch tă(3) 52 B ngă3.5.ăSoăsánhăd ăli uăph ă1H-NMR 13C-NMRăc aăh păch t (1) taxinin B 55 B ngă3.6.ăSoăsánhăd ăli uăph ă1H-NMR 13C-NMRăc aăh păch t (2) taxuspin F 58 B ngă 3.7.ă Soă sánhă d ă li uă ph ă 1H-NMR C-NMR c aă h pă ch t (3) 10-deacetyl 13 taxinin B 62 B ngă3.8 Soăsánhăd ăli uăph ă1H-NMR 13C-NMRăc aăh păch tă(4)ăv iătaxuspinăD 65 B ngă3.9.ăSoăsánhăd ăli uăph ă1H-NMR 13C-NMRăc aăh păch t (5) v iătaxchininăB 68 B ngă3.10.ăK tăqu ăkh oăsátăđ ătinhăkhi tăcácăh păch tăb ngăk ăthu tăHPLC 71 B ngă3.11.ăK tăqu ăkh oăsátătínhăphùăh păh ăth ngăc aăph ngăphápăHPLC 71 B ngă3.12.ăK tăqu ăkh oăsátătínhătuy nătính 74 B ngă3.13.ăK tăqu ăkh oăsátăđ ăđúngă(nă=ă9) 77 B ngă3.14.ăăD ăli uăph ăUV-Vis,ăMSăvƠăđi măch y,ăn ngăsu tăquayăc căc aăcácăch tă phân tích 79 B ngă3.15.ăD ăli uăph ăIRăc aăcácăch tăphơnătích 79 B ngă3.16.ăKh oăsátăđ ăl păl iăc aătaxininăB 80 B ngă3.17 Kh oăsátăđ ăl păl iăc aătaxuspin F 81 B ngă3.18 Kh oăsátăđ ăl păl iăc aă10-deacetyl taxinin B 81 vi B ngă3.19 Kh oăsátăđ ăl păl iăc aătaxuspin D 82 B ngă3.20.ăK tăqu ăki mătraăđ ăđ ngănh t lôăc aăcácănguyênăli uăch tăđ iăchi u 83 B ngă3.21.ăK tăqu ăđánhăgiáăb ngăphơnătíchăth ngăkêăANOVAăm tăy uăt 83 B ngă3.22.ăK tăqu ăđánhăgiáăliên PTN b ngăphơnătíchăth ngăkêăANOVAăm tăy uăt 84 B ngă3.23 Xácăđ nhăgiáătr ă năđ nhăc aătaxinin B 85 B ngă3.24 Xácăđ nhăgiáătr ă năđ nhăc aătaxuspinăF 85 B ngă3.25 Xácăđ nhăgiáătr ă năđ nhăc aă10-deacetyl taxinin B 86 B ngă3.26 Xácăđ nhăgiáătr ă năđ nhăc aătaxuspinăD 86 B ngă3.27 Ch ngătrìnhăr aăgi iăgradientăđ nhăl ngăđ ngăth iăcácătaxoid 92 B ngă3.28.ăK tăqu ăkh oăsátătínhătuy nătính,ăgi iăh năphátăhi năvƠăgi iăh năđ nhăl B ngă3.29.ăK tăqu ăkh oăsátătínhăt ng 99 ngăthíchăh ăth ngă(%RSD) 99 B ngă3.30.ăK tăqu ăkh oăsátăđ ăl păl iăvƠăđ ăchínhăxácătrungăgiană(n = 6) 100 B ngă3.31.ăK tăqu ăkh oăsátăđ ăđúngă(n = 9) 100 B ngă3.32 HƠmăl ngătaxoidătrongăm uăth ăTW 101 B ngă4.1.ăSoăsánhăh ăs ădiăchuy năRf c aă2ăpicătrongăphơnăđo năTw1-3ăkh oăsátăv iă3ă h ădungămôiăkhaiătri năSKLM 108 vii DANHăM CăCỄCăHỊNH Trang Hìnhă1.1.ăThơngăđ ăláădƠiăm căt ănhiên Hìnhă1.2.ăThơngăđ ăláădƠiăđ cătr ng Hìnhă1.3.ăViăph uăláăc aăTaxus caespitosa var latifolia Hìnhă1.4.ăCácăd ngăh tăc aăTaxus sp Hìnhă1.5.ăLáăvƠăh tăc aăTaxus contorta var contorta 10 Hìnhă1.6.ăD ngălá Taxus contorta var mucronata cóăláău năcong, t ăBhutan 10 Hình 1.7 Taxus chinensis v iăcácăh tăcóăđ uănh n, t ăQuỦăChơu,ăTrungăQu c 10 Hình 1.8 CƠnhăc aăTaxus chinensis trênănúiăNgaăMi,ăT ăXuyên,ăTrungăQu c 11 Hìnhă1.9.ăCƠnhăc aăTaxus wallichiana t ăKhasia,ă nă 11 Hìnhă1.10.ăLáăc aăT wallichiana var yunnanensis, t ăVơnăNam,ăTrungăQu c 11 Hìnhă1.11.ăLáăc aăT wallichiana var wallichiana ơngăHimalaya 11 Hìnhă1.12.ăKhungătaxoidăc năb n 13 Hìnhă1.13.ăKhungă6/8/6ăc aăh păch tătaxoidătrongăThơngăđ 14 Hìnhă1.14.ăC uătrúcăcácăh păch tătaxoidăcóănit ă ăm chănhánhăC13 14 Hình 1.15 10,15-epoxy-11(151)-abeo-10-deacetylbaccatin III 16 Hình 1.16 Wallifoliol 16 Hìnhă3.1.ăS căkỦăđ ăcácăphơnăđo năphơnăl păh păch tăsauăkhiătri năkhaiăcao MeOH 100%ăđưăx ălỦăquaăc tăc ăđi năSilica-gel 51 Hìnhă3.2.ăT ngăquanăHMBCăvƠăCOSYăc aăh păch tă(1) 56 Hìnhă3.3.ăC uătrúcăhóaăh căc aăh păch tă(1) 56 Hình 3.4 T ngăquanăHMBCăvƠăCOSYăc aăh păch tă(2) 59 Hình 3.5 C uătrúcăhóaăh căc aăh păch tă(2) 59 Hìnhă3.6.ăT ngăquanăHMBCăvƠăCOSYăc aăh păch tă(3) 61 Hình 3.7 C uătrúcăhóaăh căc aăh păch tă(3) 61 PL-89 PL-90 PL-91 PL-92 PL3- Thi tăl păch tăđ iăchi u • Ki mătraănguyênăli u 10-deacetyl taxinine B b ngăph ngăphápăHPLC PL-93 PL-94 • Ki mătraănguyênăli uătaxinineăBăb ngăph ngăphápăHPLC PL-95 PL-96 PL3.2- Phi uăphơnătíchăt iă3ăPTN đ tăGLP PL-97 PL-98 PL-99 PL4- Th m đ nhăquyătrìnhăđ nhăl ngăđ ngăth i PL-100 PL-101 PL-102 PL-103 ... păch t? ?taxoid? ?( 1), ( 2) ( 3) 50 S ăđ ă3.3.ăQuyătrìnhăchi tătáchăvƠăphơnăl păh păch t? ?taxoid? ?( 4) ( 5) 53 M ă U Theoă cácă nhƠă khoaă h c,ă cácă loƠiă Thông? ? đ ă (Taxus sp .)? ? cóă ch aă taxoid? ?... căt ,? ?thông? ?đ ? ?lá? ?dƠiăthu c [1], [2], [3]: Ngành: Thông (Pinophyta) L p: Thông (Pinopsida) B μăTh yătùngă(Taxales) H μăTh yătùngăhay? ?Thông? ?đ ă(Taxaceae) Chi: Taxus Lồi: Taxus wallichiana Zucc. .. năhóaăh c,ăphơnăl p? ?taxoid? ?trongăThơngăđ ? ?lá? ?dƠi? ?(Taxus wallichiana Zucc. )? ?ầă t ăn mă1λ81ă[69], [72].ăD iăđơyălƠăcácănghiênăc uăđ căcôngăb ăg năđơyăv ăphơnă l p? ?taxoid? ?t ăT wallichiana Zucc. : N mă2002,ăMadhusudanan,