nghiên cứu tách, điều chế chất chuẩn và xây dựng quy trình phân tích một số hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học

ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐOÀN MẠNH DŨNG NGHIÊN CỨU TÁCH, ĐIỀU CHẾ CHẤT CHUẨN VÀ XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH MỘT SỐ HỢP CHẤT THIÊN NHIÊN CĨ HOẠT TÍNH SINH HỌC LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Huế - Năm 2020 i ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐOÀN MẠNH DŨNG NGHIÊN CỨU TÁCH, ĐIỀU CHẾ CHẤT CHUẨN VÀ XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH MỘT SỐ HỢP CHẤT THIÊN NHIÊN CĨ HOẠT TÍNH SINH HỌC Ngành: Hóa Phân tích Mã số: 44 01 18 LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Đình Luyện PGS TS Nguyễn Hữu Tùng Huế - Năm 2020 ii LỜI CAM ĐOAN Luận án hoàn thành Trường Đại học Khoa học, Đại học Huế, hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Đình Luyện PGS.TS Nguyễn Hữu Tùng Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các kết luận án trung thực, đồng tác giả cho phép sử dụng chưa cơng bố trước Tác giả Đoàn Mạnh Dũng i LỜI CẢM ƠN Luận án hoàn thành hướng dẫn tận tình đầy tâm huyết Thầy Nguyễn Đình Luyện Thầy Nguyễn Hữu Tùng Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến PGS TS Nguyễn Đình Luyện - Trường Đại học Sư phạm – Đại học Huế, PGS.TS Nguyễn Hữu Tùng Trường Đại học Quốc gia Hà Nội người giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi suốt thời gian học tập nghiên cứu Đặc biệt tơi xin tỏ lịng kính trọng với GS TS Trần Đình Thắng – Trường Đại học Vinh, người Thầy dìu dắt, hỗ trợ điều kiện tốt cho đường nghiên cứu khoa học Nhân dịp này, tác giả xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Khoa học, Đại học Huế, Phịng Sau đại học, Khoa Hóa học q thầy cô giáo giảng dạy lớp nghiên cứu sinh tận tình giúp đỡ tơi hồn thành luận án Tác giả xin chân thành cảm ơn bạn đồng nghiệp gần xa giúp đỡ, động viên, khích lệ tác giả suốt trình làm luận án Cuối cùng, tác giả xin dành tình cảm đặc biệt đến gia đình, người thân người bạn tác giả, người mong mỏi, động viên tiếp sức cho tác giả để hoàn thành luận án Tác giả Đoàn Mạnh Dũng ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN I LỜI CẢM ƠN II MỤC LỤC III KÝ HIỆU VIẾT TẮT V DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU VII DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ IX MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học số thuốc 1.1.1 Giới thiệu chung 1.1.2 Các nghiên cứu tách chiết số hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học 1.1.3 Một số loài thuốc chứa hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học 1.2 Các phương pháp phân tích hợp chất thiên nhiên 11 1.2.1 Phương pháp sắc ký khí 11 1.2.2 Phương pháp sắc ký lỏng 12 1.3 Một số nghiên cứu liên quan đến luận án 16 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 22 2.2 Nội dung nghiên cứu 23 2.3 Phương pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Thông tin mẫu 25 2.3.2 Phương pháp chiết tách/phân lập 27 2.3.3 Phương pháp xác định cấu trúc đặc trưng hóa - lý HCTN .29 2.3.4 Phương pháp tinh chế hctn để tạo chất chuẩn 29 2.3.5 Phương pháp đánh giá độ tinh khiết chất chuẩn liệu chất chuẩn 30 2.3.6 Phương pháp phân tích HCTN 30 2.3.7 Phương pháp đánh giá độ tin cậy phương pháp phân tích .32 iii 2.3.8 Phương pháp xử lý số liệu 34 2.4 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 24 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Chiết tách xác định cấu trúc hợp chất thiên nhiên 35 3.1.1 Chiết tách HCTN từ Diệp hạ châu đặc trưng cấu trúc 35 3.1.2 Chiết tách HCTN từ Đan sâm đặc trưng cấu trúc 42 3.1.3 Chiết tách HCTN từ Mật nhân đặc trưng cấu trúc .49 3.2 Tinh chế hợp chất thiên nhiên để tạo chất chuẩn 53 3.2.1 Chất chuẩn hypophyllanthin phyllanthin 54 3.2.2 Chất chuẩn tanshinone I, cryptotanshinone, tanshinone IIA .55 3.2.3 Chất chuẩn eurycomanone 57 3.3 Quy trình phân tích hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học .58 3.4.1 Tính ổn định hệ thống thiết bị 65 3.4.2 Độ đặc hiệu phương pháp phân tích 69 3.4.3 Khoảng tuyến tính 72 3.5 Áp dụng thực tế 79 3.5.1 Kiểm soát chất lượng phương pháp phân tích 79 3.5.2 Hàm lượng hctn mẫu thực tế 86 3.6 Các hợp chất acetogenin chiết tách từ Mãng cầu xiêm 92 3.6.1 Xác định phân đoạn giàu hoạt chất acetogenin 94 3.6.2 Định tính acetogenin phân đoạn AMF-3 95 3.6.3 Định lượng acetogenin phân đoạn AMF-3 97 3.7 Hàm lượng tinh dầu chiết tách từ Riềng đuôi nhọn 98 KẾT LUẬN 105 TÀI LIỆU THAM KHẢO 109 Danh mục cơng trình cơng bố kết nghiên cứu luận án .107 PHỤ LỤC 122 iv KÝ HIỆU VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng Việt ACN ACRS AOAC ASEAN CCĐC Tiếng Anh Acetonitril Chất chuẩn đối chiếu hóa Asean Chemical học ASEAN Reference Substance Hiệp hội nhà khoa Association of Official học Phân tích Hoa Kỳ Analytical Chemists Hiệp hội nước Đông Association of Southeast Nam Á Asian Nations Chất chuẩn đối chiếu CE Điện di mao quản Capillary Electrophoresis DAD Detector chuỗi diot Diot Array Detector Khối phổ - ion hóa phun Electron Spray Ionisation mù electron – Mass Spectrometry ESI-MS EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol FLD Detector huỳnh quang Fluorescence Detector GC Sắc kí khí Gas Chromatography Sắc ký lỏng ghép nối Gas Chromatography – khối phổ Mass Spectrometry GC-MS HCTN Hợp chất thiên nhiên HPLC Sắc kí lỏng hiệu cao High Performance Liquid Chromatography HPLC-MS Sắc kí lỏng - khối phổ High Performance Liquid Chromatography– Mass Spectrometry HTSH Hoạt tính sinh học Bioactive HCTN Hợp chất thiên nhiên Natural compounds v Viết tắt LC-MS/MS Tiếng Việt Tiếng Anh Sắc ký lỏng ghép lần Liquid khối phổ Chromatograph Tandem Mass Spectrometer LOD Giới hạn phát Limit of detection LOQ Giới hạn định lượng Limit of quantity MeOH NMR Methanol Cộng hưởng từ hạt nhân Nuclear Magnetic Resonance NPLC Sắc ký lỏng pha thuận Normal Phase Liquid Chromatography PPPT Phương pháp phân tích Analysis method PTN Phịng thí nghiệm Laboratory Sắc ký lỏng pha đảo Reversed Phase Liquid RPLC Chromatography RSD Độ lệch chuẩn tương đối Relative Standard Deviation SKĐ Sắc kí đồ SPE Chiết pha rắn TCCL TLC Solid Phase Extraction Tiêu chuẩn chất lượng Sắc kí lớp mỏng Thin Chromatography UV-Vis VQG Tử ngoại – khả kiến Vườn quốc gia vi Ultraviolet – Visible Layer DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Một số cơng trình nghiên cứu liên quan đến đề tài nghiên cứu .17 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR PU-1 so sánh với công bố tài liệu 39 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR PU-2 so sánh với công bố tài liệu 41 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR SM-1 so sánh với công bố tài liệu .46 Bảng Dữ liệu phổ NMR SM-2 so sánh với công bố tài liệu .47 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR SM-3 so sánh với công bố tài liệu .48 Bảng 3.6 Dữ liệu phổ NMR EL-1 so sánh với công bố tài liệu 52 Bảng 3.7 Dữ liệu đánh giá độ tinh khiết chất chuẩn hypophyllanthin phyllanthin 54 Bảng 3.8 Dữ liệu đánh giá độ tinh khiết chất chuẩn tanshinone I, cryptotashinone tanshinone IIA 56 Bảng 3.9 Dữ liệu đánh giá độ tinh khiết chất chuẩn eurycomanone 57 Bảng 3.10 Kết khảo sát tính ổn định hệ thống thiết bị LC-MS/MS phân tích đồng thời hypophyllanthin phyllanthin 67 Bảng 3.11 Kết khảo sát độ ổn định hệ thống thiết bị LC-MS/MS phân tích đồng thời tanshinone I, cryptotanshinone tanshinone IIA 68 Bảng 3.12 Kết khảo sát độ ổn định hệ thống thiết bị LC-MS/MS phân tích Eurycomanone 69 Bảng 3.13 Kiểm tra độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS UPLC-DAD phân tích đồng thời hypophyllanthin phyllanthin, phân tích Eurycomanone 80 Bảng 3.14 Kết đánh giá độ lặp lại PP LC-MS/MS UPLC-DAD 81 Bảng 3.15 Kết kiểm tra độ phương pháp LC-MS/MS hypophyllanthin phyllanthin 83 Bảng 3.16 Kết kiểm tra độ phương pháp LC-MS/MS tanshinone I, cryptotanshinone tanshinone IIA 84 Bảng 3.17 Dữ liệu xác định giá trị LOD hợp chất hypophyllanthin, phyllanthin eurycomanone 86 Bảng 3.18 Dữ liệu xác định giá trị LOD hợp chất tanshinone I, cryptotanshinone tanshinone IIA 86 vii Bảng 3.19 Hàm lượng (mg/g) hypophyllanthin phyllanthin mẫu thực phẩm chức bào chế từ Diệp hạ châu 88 Bảng 3.20 Hàm lượng (mg/g) tanshinone I, tanshinone IIA cryptotanshinone mẫu Đan sâm 90 Bảng 3.21 Hàm lượng (mg/g) eurycomanone Mật nhân địa phương khác 91 Bảng 3.22 Phương trình đường thêm chuẩn LOD, LOQ phương pháp phân tích 98 Bảng 3.23 Hàm lượng (%) cấu tử nhóm hợp chất có mặt tinh dầu chiết tách từ phận Riềng đuôi nhọn 102 viii (mg/g) TB+S (mg/g) 0,1197±0,0012 0,119 ± 0,001 RSD(%) 1,0 0,8 1/2RSDH(%) 3,9 1,9 C (μg/mL) Hàm lượng Phyllanthin (*) (mg/g) 0,1648 0,1649 0,1646 4,117 4,216 4,157 0,4153 0,4155 0,4149 0,415 0,425 0,419 TB+S (mg/g) 0,4152±0,0003 0,420 ± 0,005 RSD(%) 0,1 1,2 1/2RSDH(%) 3,2 3,2 TB, S RSD: giống bảng 3.4 Phụ lục C15 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS UPLCDAD xác định Hypophyllanthin Phyllanthin mẫu thuốc DHC-PV Thông số/ Chất Đại lượng UPLC-DAD L1 L2 C (μg/mL) 0,1249 0,1256 0,1258 3,098 0,2993 0,3011 0,3016 (mg/g) L3 L1 0,297 L2 L3 3,139 3,129 0,301 0,300 TB+S (mg/g) 0,3007±0,0012 0,299 ± 0,002 RSD(%) 0,4 0,7 1/2RSDH(%) 3,4 1,9 C (μg/mL) Hàm lượng Phyllanthin LC-MS/MS thống kê Hàm lượng Hypophyllanthin Mẫu DHC-PV (mg/g) 0,4817 0,4820 0,4816 11,984 1,1545 1,1554 1,1543 1,149 12,109 11,869 1,161 1,138 TB+S (mg/g) 1,1547±0,0006 1,149 ± 0,012 RSD(%) 0,1 1,0 1/2RSDH(%) 2,8 2,8 ( TB, S RSD: giống bảng 3.4 153 Phụ lục C16 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS UPLC- DAD xác định Hypophyllanthin Phyllanthin mẫu thuốc DHC-DD5 Thông số/ Đại Chất lượng thống kê C (μg/mL) Hàm lượng Hypophyllanthin (mg/g) L1 UPLC-DAD L2 L3 L1 L2 0,0245 0,0243 0,0244 0,610 0,600 0,0602 0,0596 0,0599 0,06 0,059 L3 0,590 0,058 0,0599±0,0003 0,059 ± 0,001 RSD(%) 0,5 1,7 1/2RSDH(%) 4,3 2,1 Hàm lượng ( LC-MS/MS TB+S (mg/g) C (μg/mL) Phyllanthin Mẫu DHC-DD5 (mg/g) 0,0326 0,0325 0,0332 0,783 0,824 0,0801 0,0799 0,0815 0,077 0,081 0,814 0,080 TB+S (mg/g) 0,0805±0,0009 0,079 ± 0,002 RSD(%) 1,1 2,6 1/2RSDH(%) 4,1 4,1 TB, S RSD: giống bảng 3.4 Phụ lục C17 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS UPLC-DAD xác định Hypophyllanthin Phyllanthin mẫu thuốc DHC-KH Thông số/ Chất Đại lượng LC-MS/MS UPLC-DAD thống kê L1 L2 L3 C (μg/mL) 0,4904 0,4899 0,6602 0,6594 Hàm lượng Hypophyllanthin Mẫu DHC-KH (mg/g) L1 L2 0,4910 12,295 12,258 0,6609 0,662 0,66 TB+S (mg/g) 0,6602±0,0008 0,660 ± 0,001 RSD(%) 0,1 0,2 1/2RSDH(%) 3,0 1,8 154 L3 12,239 0,659 C (μg/mL) Hàm lượng Phyllanthin (*) (mg/g) 1,4158 1,4160 1,4151 1,9058 1,9061 1,9049 35,305 35,510 35,101 1,901 1,912 TB+S (mg/g) 1,9056±0,0006 1,901 ± 0,011 RSD(%) 0,1 0,6 1/2RSDH(%) 2,6 2,6 1,890 TB, S RSD: giống bảng 3.4 Phụ lục C18 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS UPLCDAD xác định Tanshinone I, Tanshinone IIA Cryptotanshinone mẫu Sapa Thông số/ Đại Chất lượng thống L2 L3 C (μg/mL) 0,7997 0,8000 0,8001 2,4606 2,4614 2,4619 (mg/g) L1 L2 L3 2,44 2,46 2,46 TB+S (mg/g) 2,4613±0,0007 2,45±0,01 RSD(%) 0,03 0,5 1/2RSDH(%) 2,47 2,5 Hàm lượng (mg/g) 2,9863 2,9865 2,9865 9,1887 9,1889 9,1891 9,21 9,15 TB+S (mg/g) 9,1889±0,0002 9,18±0,03 RSD(%) 0,002 0,3 1/2RSDH(%) 2,03 2,0 C (μg/mL) Hàm lượng Cryptotanshinone UPLC-DAD L1 C (μg/mL) Tanshinone IIA LC-MS/MS kê Hàm lượng Tanshinone I Mẫu Sapa (mg/g) 1,5126 1,5128 1,5130 4,6543 4,6549 4,6555 4,63 4,66 TB+S (mg/g) 4,6549±0,0006 4,65±0,02 RSD(%) 0,01 0,4 1/2RSDH(%) 2,24 2,2 ( TB, S RSD: giống bảng 3.4 155 9,18 4,67 Phụ lục C19 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS UPLC-DAD xác định Tanshinone I, Tanshinone IIA Cryptotanshinone mẫu Lâm Đồng Thông số/ Đại Chất lượng thống kê C (μg/mL) Hàm lượng Tanshinone I (mg/g) L2 L3 1,4218 1,4212 1,4217 4,4293 4,4275 4,4289 L1 L2 L3 4,43 4,42 4,44 4,4286±0,0009 4,43±0,01 0,02 0,2 1/2RSDH(%) 2,26 2,3 (mg/g) 3,1757 3,1775 3,1775 9,893 9,8991 9,8989 TB+S (mg/g) 9,88 9,8970±0,0035 9,86 0,035 0,3 1/2RSDH(%) 2,0 2,0 Hàm lượng (mg/g) 2,6190 2,6188 2,6192 8,1590 8,1583 8,1595 TB+S (mg/g) 9,91 9,88±0,03 RSD(%) C (μg/mL) ( L1 UPLC-DAD RSD(%) Hàm lượng Cryptotanshinone LC-MS/MS TB+S (mg/g) C (μg/mL) Tanshinone IIA Mẫu Lâm Đồng 8,13 8,1589±0,0006 8,16 8,14 8,14±0,02 RSD(%) 0,01 0,2 1/2RSDH(%) 2,06 2,1 TB, S RSD: giống bảng 3.4 Phụ lục C20 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS UPLC-DAD xác định Tanshinone I, Tanshinone IIA Cryptotanshinone mẫu Hà Giang Thông số/ Chất Đại lượng thống kê Tanshinone I Mẫu Hà Giang C (μg/mL) LC-MS/MS L1 L2 1,0996 156 1,0989 UPLC-DAD L3 1,0991 L1 L2 L3 Hàm lượng (mg/g) 3,5357 3,5335 TB+S (mg/g) 1/2RSDH(%) 2,34 2,3 (mg/g) 4,0510 4,0507 4,0507 13,0257 13,0251 13,0249 12,97 TB+S (mg/g) 13,0252±0,0004 12,95 0,003 0,5 1/2RSDH(%) 1,92 1,9 (mg/g) TB+S (mg/g) 13,06 12,99±0,06 RSD(%) Hàm lượng 3,53 3,53±0,02 0,4 C (μg/mL) (*) 3,5345±0,0011 3,54 0,03 Hàm lượng Cryptotanshinone 3,51 RSD(%) C (μg/mL) Tanshinone IIA 3,5342 1,6173 1,6178 1,6182 5,2002 5,2019 5,2031 5,14 5,2017±0,0015 5,19 5,21 5,19±0,03 RSD(%) 0,03 0,5 1/2RSDH(%) 2,21 2,2 TB, S RSD: giống bảng 3.4 Phụ lục C21 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS UPLC-DAD xác định Tanshinone I, Tanshinone IIA Cryptotanshinone mẫu Mộc Châu Thông số/ Đại Chất lượng thống kê C (μg/mL) Hàm lượng Tanshinone I Tanshinone IIA Mẫu Mộc Châu (mg/g) LC-MS/MS L1 UPLC-DAD L2 L3 0,8887 0,8884 0,8889 2,8853 2,8843 2,8861 TB+S (mg/g) 2,8852±0,0009 L1 2,85 L2 2,91 2,88±0,03 RSD(%) 0,03 1,1 1/2RSDH(%) 2,41 2,4 C (μg/mL) 2,5823 157 2,5826 2,5826 L3 2,87 Hàm lượng (mg/g) 8,3841 TB+S (mg/g) 8,35 8,3844±0,0006 8,45 0,6 1/2RSDH(%) 2,05 2,1 (mg/g) 1,2853 1,2849 1,2850 4,1729 4,1719 4,1722 TB+S (mg/g) 8,38 8,39±0,05 0,008 Hàm lượng (*) 8,3851 RSD(%) C (μg/mL) Cryptotanshinone 8,3839 4,18 4,1723±0,0005 4,14 4,16 4,16±0,02 RSD(%) 0,01 0,5 1/2RSDH(%) 2,28 2,3 TB, S RSD: giống bảng 3.4 Phụ lục C22 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS UPLC-DAD xác định Tanshinone I, Tanshinone IIA Cryptotanshinone mẫu Quảng Tây Thông số/ Đại Chất lượng thống kê C (μg/mL) Hàm lượng Tanshinone I (mg/g) L1 UPLC-DAD L2 L3 0,4978 0,4984 0,4976 1,5555 1,5574 1,5549 L1 L2 L3 1,56 1,54 1,58 1,5559±0,0013 1,56±0,02 RSD(%) 0,08 1,3 1/2RSDH(%) 2,65 2,6 Hàm lượng Cryptotanshinone LC-MS/MS TB+S (mg/g) C (μg/mL) Tanshinone IIA Mẫu Quảng Tây (mg/g) 1,5347 1,5348 1,5348 4,7958 4,7951 4,7964 TB+S (mg/g) 4,7958±0,0007 4,75 4,79 4,78±0,03 RSD(%) 0,014 0,6 1/2RSDH(%) 2,23 2,2 C (μg/mL) 0,9164 158 0,9159 0,9163 4,81 Hàm lượng (mg/g) TB+S (mg/g) (*) 2,8621 2,8636 2,8634 2,86 2,8630±0,0008 2,84 2,86 2,85±0,01 RSD(%) 0,03 0,4 1/2RSDH(%) 2,41 2,4 TB, S RSD: giống bảng 3.4 Phụ lục C23 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS UPLC-DAD xác định Tanshinone I, Tanshinone IIA Cryptotanshinone mẫu Mường Lống Thông số/ Đại Chất lượng thống kê C (μg/mL) Hàm lượng Tanshinone I (mg/g) L2 L3 0,4080 0,4080 0,4087 1,2711 1,2709 1,2732 L1 L2 L3 1,28 1,26 1,25 1,2717±0,0013 1,26±0,02 0,10 1,2 1/2RSDH(%) 2,73 2,7 (mg/g) 1,2288 1,2286 1,2286 3,8279 3,8281 3,8275 TB+S (mg/g) 3,84 3,8278±0,0003 3,78 0,008 0,8 1/2RSDH(%) 2,31 2,3 Hàm lượng (mg/g) TB+S (mg/g) 1,2509 1,2501 1,2505 3,8969 3,8945 3,8955 3,8956±0,0012 3,85 3,91 3,88±0,03 RSD(%) 0,03 0,8 1/2RSDH(%) 2,30 2,3 TB, S RSD: giống bảng 3.4 159 3,81 3,81±0,03 RSD(%) C (μg/mL) ( L1 UPLC-DAD RSD(%) Hàm lượng Cryptotanshinone LC-MS/MS TB+S (mg/g) C (μg/mL) Tanshinone IIA Mẫu Mường Lống 3,89 Phụ lục C24 Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp LC-MS/MS xác định Eurycomanone mẫu Ký hiệu mẫu Vũng Tàu Đăk Nơng Hịa Bình Nghệ An Bắc Giang Hà Giang Thơng số/ Đại lượng Eurycomanone thống kê L1 L2 L3 C (μg/mL) 2,8706 2,8708 2,8706 Hàm lượng (mg/g) 1,8533 1,8534 1,8533 TB+S (mg/g) 1,8533±0,0001 RSD(%) 0,002 1/2RSDH(%) 2,6 C (μg/mL) 0,2623 0,2624 0,2622 Hàm lượng (mg/g) 0,1716 0,1716 0,1715 TB+S (mg/g) 0,1716±0,0001 RSD(%) 0,035 1/2RSDH(%) 3,7 C (μg/mL) 1,2352 1,2354 1,2351 Hàm lượng (mg/g) 0,8015 0,8016 0,8014 TB+S (mg/g) 0,8015±0,0001 RSD(%) 0,003 1/2RSDH(%) 2,9 C (μg/mL) 0,4201 0,4199 0,4202 Hàm lượng (mg/g) 0,2739 0,2738 0,2740 TB+S (mg/g) 0,2739±0,0001 RSD(%) 0,008 1/2RSDH(%) 3,4 C (μg/mL) 4,7814 4,7822 4,7806 Hàm lượng (mg/g) 3,1336 3,1341 3,1331 TB+S (mg/g) 3,1336±0,0005 RSD(%) 0,014 1/2RSDH(%) 2,4 C (μg/mL) 1,3939 160 1,3937 1,3940 Hàm lượng (mg/g) (*) 0,9292 0,9291 TB+S (mg/g) 0,9291±0,0001 RSD(%) 0,009 1/2RSDH(%) 2,9 0,9292 TB, S RSD: giống bảng 3.4 Phụ lục C25 Kết phân tích hàm lượng phyllanthin Mẫu Lá Thân Rễ Hàm lượng phyllanthin đo được, mg/g Lần Lần Lần TB±S RSD(%) 0,0439 0,0050 0,0039 0,0436 0,0048 0,0037 0,0443 0,0054 0,0041 0,0439±0,0004 0,0051±0,0003 0,0039±0,0002 0,8 6,0 5,1 ½ RSDH (%) 4,5 6,3 6,5 Phụ lục C26 Kết phân tích hàm lượng hypophyllanthin Mẫu Lá Thân Rễ Hàm lượng hypophyllanthin đo được, mg/g Lần Lần Lần Trung bình ± SD RSD(%) 0,2748 0,0166 0,0029 0,2744 0,0163 0,0030 0,2751 0,0171 0,0027 0,2748±0,0004 0,0167±0,0004 0,0029±0,0002 0,1 2,4 5,3 161 ½ RSDH (%) 3,4 5,2 6,8 Phụ lục C27 Mẫu DHC-VX DHC-DH DHCPNC DHC-PV DHCDD5 Kết đánh giá độ phương pháp xác định phyllanthin mẫu thuốc nghiên cứu Cx(ug/mL) Thí nghiệm C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) Lần 0.03 Lần Lần 0,1186 0,1477 97 0,1190 0,1475 95 0,0453 0,0745 97 0,1648 0,1935 96 Lần 0.15 Lần Lần 0,1188 0,1476 96 0,1186 0,2656 98 0,1190 0,2672 98 0,0454 0,0739 95 0,0456 0,0743 95 0,0453 0,1949 99 0,1649 0,1941 0,1646 0,1939 0,1648 0,3132 97 97 98 RevTB Lần 1.5 Lần Lần 0,1188 0,2691 100 0,1186 1,6141 99 0,1190 1,6191 100 0,1188 1,6182 100 95-100 0,0454 0,1938 98 0,0456 0,1944 99 0,0453 1,5456 100 0,0454 1,5428 99 0,0456 1,5451 99 95-100 0,1649 0,3132 0,1646 0,3151 0,1648 1,6639 0,1649 1,6643 0,1646 1,6653 98 100 99 99 0,4820 0,5123 101 0,4816 0,5115 99 0,4817 0,6301 98 0,4820 0,6335 101 0,4816 0,6322 100 0,4817 1,9787 99 0,4820 1,9811 99 0,4816 1,9845 100 0,0326 0,0618 0,0325 0,0632 0,0332 0,0620 0,0326 0,1811 0,0325 0,1821 0,0332 0,1835 0,0326 1,5311 0,0325 1,5329 0,0332 1,5342 102 96 99 99 100 99 100 96-100 100 0,4817 0,5102 95 97 (%) 95-101 96-102 100 1,4158 1,4160 1,4151 1,4158 1,4160 1,4151 1,4158 1,4160 1,4151 DHC-KH C(ug/mL) 1,4445 1,4451 1,4449 1,5652 1,5664 1,5661 2,9144 2,9139 2,9164 95-100 Rev(%) 95 97 99 99 100 100 99 99 100 ( Cx: Nồng độ chất chuẩn thêm vào; Co: Nồng độ chất mẫu (µg / mL); C: Nồng độ mẫu sau thêm chuẩn; Rev: Độ thu hồi; RevTB: Độ thu hồi trung bình (n = 9); Điều kiện thí nghiệm giống mục 3.3 162 Phụ lục C28 Kết đánh giá độ phương pháp xác định hypophyllanthin mẫu thuốc nghiên cứu Mẫu DHC-VX DHC-DH DHCPNC DHC-PV DHCDD5 Cx(ug/mL) 0.01 0.05 RevTB 0.5 Thí nghiệm Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần C0(ug/mL) 0,0499 0,0596 97 0,0498 0,0595 97 0,05 0,0598 98 0,0499 0,0988 97 0,0498 0,0976 95 0,05 0,0998 99 0,0499 0,5487 99 0,0498 0,5479 99 0,05 0,5522 100 0,0264 0,0359 95 0,0263 0,0362 99 0,0265 0,0368 103 0,0264 0,0756 98 0,0263 0,0767 100 0,0265 0,0761 99 0,0264 0,5272 100 0,0263 0,5265 100 0,0265 0,5269 100 0,0473 0,0569 0,0481 0,0577 0,0472 0,0573 0,0473 0,0974 0,0481 0,0969 0,0472 0,0971 0,0473 0,5456 0,0481 0,5468 0,0472 0,5475 99 99 C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) 96 96 101 100 97 99 0,1256 0,1359 103 0,1258 0,1355 97 0,1249 0,1746 99 0,1256 0,1751 99 0,1258 0,1763 101 0,1249 0,6232 99 0,1256 0,6244 99 0,1258 0,626 100 0,0245 0,0341 0,0243 0,0338 0,0244 0,0345 0,0245 0,0727 0,0243 0,0755 0,0244 0,0746 0,0245 0,5222 0,0243 0,5219 0,0244 0,5268 100 99 0,491 0,5397 97 0,4904 0,989 99 95 101 0,4904 0,4899 0,491 DHC-KH C(ug/mL) 0,4998 0,4995 0,5011 Rev(%) 94 96 101 ( Cx, Co, C, Rev, RevTB giống Phụ lục C22 96 0,4904 0,5392 97 163 102 0,4899 0,5408 101 99 0,4899 0,9867 99 95-100 95-103 96-101 100 0,1249 0,1346 97 96 (%) 97-103 95-102 100 0,491 0,9901 99 94-101 Phụ lục C29 Kết đánh giá độ phương pháp xác định tanshinone I* Cx(ug/mL) Mẫu Sapa Mộc Châu Guangxi Mường Lống ( RevTB 2.0 Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần (%) C0(ug/mL) 0,7997 1,1012 100 0,8000 1,0941 98 0,8001 1,1109 103 0,7997 1,8211 102 0,8000 1,7809 98 0,8001 1,8321 103 0,7997 2,8751 103 0,8000 2,8112 100 0,8001 2,7501 97 97-103 1,4218 1,7092 1,4212 1,7094 1,4217 1,7139 1,4218 2,4511 1,4212 2,4059 1,4217 2,4121 1,4218 3,4751 1,4212 3,4512 1,4217 3,3501 95-102 95 96 97 102 98 99 102 101 96 1,0996 1,3892 96 1,0989 1,3941 98 1,0991 1,3909 97 1,0996 2,1211 102 1,0989 2,1059 100 1,0991 2,0821 98 1,0996 3,0751 98 1,0989 3,1512 102 1,0991 3,0501 97 96-102 0,8887 1,1792 0,8884 1,1841 0,8889 1,1809 0,8887 1,9211 0,8884 1,9059 0,8889 1,8721 0,8887 2,8751 0,8884 2,9512 0,8889 2,9301 96-103 96 98 97 103 101 98 99 103 102 0,4978 0,7921 98 0,4984 0,7892 96 0,4976 0,7879 96 0,4978 1,5211 102 0,4984 1,5059 100 0,4976 1,4872 98 0,4978 2,4751 98 0,4984 2,5121 100 0,4976 2,5301 101 96-102 0,4080 0,7201 0,4080 0,6992 0,4087 0,7009 0,4080 1,4211 0,4080 1,4059 0,4087 1,4172 0,4080 2,4751 0,4080 2,3901 0,4087 2,4331 97-103 101 99 100 103 99 101 C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) Hà Giang 1.0 Thí nghiệm C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) Lâm Đồng 0.3 C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) 98 97 97 Cx, Co, C, Rev, RevTB giống Phụ lục C22 164 Phụ lục C30 Kết đánh giá độ phương pháp xác định cryptotanshinone Mẫu Sapa Lâm Đồng Hà Giang Mộc Châu Guangxi Mường Lống ( Cx(ug/mL) Thí nghiệm Lần C0(ug/mL) C(ug/mL) 1,5126 2,0021 1,5128 2,0173 1,5130 1,9992 1,5126 3,0511 1,5128 2,9759 1,5130 3,0172 1,5126 4,4751 1,5128 4,5901 1,5130 4,4331 Rev(%) 97 100 97 102 97 100 98 102 97 C0(ug/mL) C(ug/mL) 2,6190 3,1071 2,6188 3,1133 2,6192 3,1072 2,6190 4,0913 2,6188 4,1705 2,6192 4,1004 2,6190 5,5955 2,6188 5,6514 2,6192 5,5331 Rev(%) 97 98 97 98 103 98 99 101 97 C0(ug/mL) C(ug/mL) 1,6173 2,1017 1,6178 2,1343 1,6182 2,1127 1,6173 3,1023 1,6178 3,1695 1,6182 3,1064 1,6173 4,5458 1,6178 4,6574 1,6182 4,5371 Rev(%) 96 103 98 99 103 99 97 101 97 C0(ug/mL) C(ug/mL) 1,2853 1,7722 1,2849 1,8034 1,2850 1,7912 1,2853 2,7628 1,2849 2,7865 1,2850 2,8336 1,2853 4,2544 1,2849 4,1697 1,2850 4,3712 Rev(%) 97 103 101 98 101 103 98 96 102 C0(ug/mL) C(ug/mL) 0,9164 1,4042 0,9159 1,4139 0,9163 1,3996 0,9164 2,4682 0,9159 2,4405 0,9163 2,3963 0,9164 4,0374 0,9159 3,9677 0,9163 3,8379 Rev(%) 97 99 96 103 101 98 104 101 97 C0(ug/mL) C(ug/mL) 1,2509 1,7394 1,2501 1,7391 1,2505 1,7350 1,2509 2,7692 1,2501 2,7185 1,2505 2,7936 1,2509 4,2037 1,2501 4,2647 1,2505 4,3097 Rev(%) 97 97 96 101 97 102 98 100 101 Lần Lần 1,5 Lần Lần RevTB 0,5 Lần Cx, Co, C, Rev, RevTB giống Phụ lục C22 165 Lần 3,0 Lần Lần (%) 97-102 97-101 96-103 96-103 96-103 96-102 Phụ lục C31 Kết đánh giá độ phương pháp xác định tanshinone IIA Cx(ug/mL) Mẫu Thí nghiệm Sapa Lâm Đồng Hà Giang Mộc Châu Mường Lống ( Lần 3,0 RevTB 6,0 Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần (%) 97- C0(ug/mL) C(ug/mL) 2,9863 3,9754 2,9865 3,9639 2,9865 3,9753 2,9863 6,0692 2,9865 5,9155 2,9865 5,9376 2,9863 9,0203 2,9865 9,1264 2,9865 9,0309 Rev(%) 98 97 98 102 97 98 100 102 100 C0(ug/mL) C(ug/mL) 3,1757 4,1504 3,1775 4,1603 3,1775 4,1735 3,1757 6,1959 3,1775 6,1135 3,1775 6,0937 3,1757 9,1020 3,1775 9,2264 3,1775 9,2430 Rev(%) 97 98 99 100 97 97 98 100 101 C0(ug/mL) C(ug/mL) 4,0510 5,0314 4,0507 5,0196 4,0507 5,0435 4,0510 7,0915 4,0507 6,9853 4,0507 7,1032 4,0510 10,1202 4,0507 10,0296 4,0507 10,2243 Rev(%) 98 96 99 101 97 101 101 99 102 C0(ug/mL) C(ug/mL) 2,5823 3,5641 2,5826 3,5609 2,5826 3,5705 2,5823 5,6191 2,5826 5,4985 2,5826 5,6503 2,5823 8,5247 2,5826 8,6297 2,5826 8,7224 97 98 101 97 102 99 100 102 Rev(%) Guangxi 1,0 98 C0(ug/mL) C(ug/mL) 1,5347 2,4991 1,5348 2,4965 1,5348 2,5071 1,5347 4,6019 1,5348 4,4968 1,5348 4,4543 1,5347 7,5284 1,5348 7,6029 1,5348 7,7022 Rev(%) 96 96 97 102 98 97 99 101 102 C0(ug/mL) C(ug/mL) 1,2288 2,1909 1,2286 2,2096 1,2286 2,2237 1,2288 4,2192 1,2286 4,2968 1,2286 4,1904 1,2288 7,2148 1,2286 7,1672 1,2286 7,3012 99 102 98 99 98 101 Rev(%) 96 98 99 Cx, Co, C, Rev, RevTB giống Phụ lục C22 166 102 97101 96102 97102 96102 96102 Phụ lục C32 Kết đánh giá độ phương pháp xác định eurycomanone mẫu nghiên cứu Mẫu Vũng Tàu Đắk Nông Hịa Bình Cx(ug/mL) Thí nghiệm C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) Nghệ An Bắc Giang Hà Giang C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) C0(ug/mL) C(ug/mL) Rev(%) ( 0,5 Lần Lần 2,8706 2,8708 3,3682 3,3688 2,8706 3,3713 Lần 97 99 100 1,0 Lần Lần Lần 2,8706 2,8708 3,8701 3,8684 2,8706 3,8689 2,8706 4,8712 2,8708 4,8721 101 101 100 Lần 99 98 2,0 Lần RevTB Lần 2,8706 4,8701 99 0,2623 0,2624 0,7588 0,7611 99 97 0,2622 0,7601 99 0,2623 0,2624 1,2604 1,2612 99 100 0,2622 1,2626 100 0,2623 2,2634 99 0,2624 2,2615 99 0,2622 2,2623 100 1,2352 1,2354 1,7308 1,7312 1,2351 1,7302 1,2352 1,2354 2,2304 2,2307 1,2351 2,2310 1,2352 3,2354 1,2354 3,2356 1,2351 3,2360 98 101 100 0,4202 1,4179 0,4201 2,4211 0,4199 2,4215 100 100 99 98 99 0,4201 0,4199 0,9178 0,9182 97 99 99 0,4202 0,9174 101 99 98 0,4201 0,4199 1,4187 1,4185 99 98 100 0,4202 2,4221 102 4,7814 4,7822 5,2764 5,277 99 98 4,7806 5,2771 99 4,7814 4,7822 5,7822 5,7812 100 99 4,7806 5,7816 101 4,7814 6,7804 99 4,7822 6,781 101 4,7806 6,7801 99 1,3939 1,3937 1,8891 1,8879 1,394 1,8885 1,3939 1,3937 2,3917 2,392 1,394 2,3924 1,3939 3,3929 1,3937 3,3931 1,394 3,3921 100 98 99 99 98 98 99 Cx, Co, C, Rev, RevTB giống Phụ lục C22 167 98 101 (%) 97101 97100 98101 97102 98101 98101 ... HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐOÀN MẠNH DŨNG NGHIÊN CỨU TÁCH, ĐIỀU CHẾ CHẤT CHUẨN VÀ XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH MỘT SỐ HỢP CHẤT THIÊN NHIÊN CĨ HOẠT TÍNH SINH HỌC Ngành: Hóa Phân tích Mã số: ... Giới thiệu hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học số thuốc 1.1.1 Giới thiệu chung 1.1.2 Các nghiên cứu tách chiết số hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học ... đa dạng sinh học nguồn thiên nhiên sinh tổng hợp hợp chất Hơn nữa, hợp chất có hoạt tính sinh học tìm thấy từ thiên nhiên dùng trực tiếp y học, nhiều hợp chất khác dùng chất dẫn đường phân tử