a. Định lượng nitơ tổng số (theo phương pháp Kjeldhal) - Giai đoạn 1: Vô cơ hoá mẫu nghiên cứu.
+ Cân mẫu nguyên liệu Hà thủ ô đỏ đã được nghiền, chuyển mẫu vào bình Kjeldhal.
+ Công phá mẫu: Sau khi cho mẫu vào bình Kjeldhal, thêm vài giọt nước cất không chứa nitơ để thấm ướt mẫu và một lượng H2SO4 đậm đặc (0,1g mẫu khô cho 1ml H2SO4 đậm đặc). Đậy kín bình để yên trong 30 phút hoặc qua đêm. Thay nút bình bằng phễu thuỷ tinh để khí độc CO2, SO2 thoát ra ngoài từ từ, tránh gây ô nhiễm
môi trường. Đặt bình Kjeldhal nghiêng 450C trên hệ thống đốt mẫu trong tủ hút. Đun nhẹ trong 30 phút, tăng dần nhiệt độ để dung môi sôi đều, không nên nâng quá cao (1000C) làm dung dịch bắn ra ngoài. Trong quá trình đun, dung dịch chuyển từ màu đen sang màu nâu sẫm. Lấy bình ra để nguội, thêm 3 – 4 giọt HClO4 để xúc tác cho phản ứng vô cơ hoá diễn ra nhanh hơn. Đun tiếp, màu dung dịch chuyển sang màu nâu cánh gián đến màu vàng nhạt, cuối cùng được dung dịch trắng trong.
+ Pha loãng dung dịch đã vô cơ hoá: Để nguội bình Kjeldhal, sau đó chuyển dung dịch sang bình định mức 100ml, thêm nước cất đến vạch.
- Giai đoạn 2: Cất amoniac.
- Bình cất mẫu: Hút 20ml dịch mẫu cho vào bình cất 2-3 giọt chỉ thị taxiro, khi dung dịch chuyển sang màu tím đỏ cho thêm vào dung dịch NaOH 33% đến khi dung dịch chuyển sang màu vàng xanh thì dừng lại.
- Bình hứng mẫu: Cho vào mỗi bình 25ml axít boric 2.5% và 2-3 giọt chỉ thị taxiro.
Tiến hành cất trên máy Microkjeldhal.
Hàm lượng nitơ tổng số có trong nguyên liệu được tính theo công thức: (a - b) . 0,142. V . 104
NTS = v . m . (100 - W)
Trong đó: NTS: Hàm lượng nitơ tổng số, %
a: Lượng H2SO4 0,01N được dùng ở bình thí nghiệm b: Lượng H2SO4 0,01N được dùng ở bình đối chứng
V: Số ml dung dịch mẫu pha loãng, 100ml v: Số ml dung dịch mẫu đem cất NH3, 10 ml
m: Khối lượng mẫu đem phân tích, g W: Độ ẩm của nguyên liệu Hà thủ ô đỏ, % b. Định lượng nitơ phi protein
Lấy phần dịch đã tách protein cho vào bình Kjeldhal, thêm vào đó 5ml H2SO4 đặc (98%) và 100mg hỗn hợp xúc tác K2SO4/CuSO4 (tỷ lệ 3:1), vô cơ hoá mẫu, cất NH3, chuẩn độ và tính toán tương tự như xác định hàm lượng nitơ tổng số, thu được hàm lượng nitơ phi protein ở trong mẫu (Npp).
Hàm lượng nitơ protein được tính theo công thức sau: NP = NTS - NPP
Trong đó:
NP: Hàm lượng nitơ protein, % NTS: Hàm lượng nitơ tổng số, % NPP: Hàm lượng nitơ phi protein, % d. Xác định hàm lượng protein
Thông thường đối với protein thực vật, nitơ chiếm tỷ lệ lớn hơn so với protein động vật (≈16,8). Nên hệ số protein thực vật được tính như sau:
100
H = = 5,95 16,8
Hàm lượng protein của mẫu Hà thủ ô đỏ được tính như sau: P = NP . 5,95
Trong đó:
P: Hàm lượng protein của nguyên liệu Hà thủ ô đỏ, % NP: Hàm lượng nitơ protein, %