- Nhóm nghiên cứu:
2.3.2. Quy trình tách chiết DNA từ máu ngoại
- Máu tươi chống đông EDTA cần được tách trong vòng 24 giờ.
- Cho 0,5ml máu tươi toàn phần đã chống đông vào ống eppendorf 1,5 ml sau đó cho thêm vào 0,5 ml dung dịch lysis buffer rồi để trờn đỏ 10 phút.
- Ly tâm 8000 v/p trong 10 phút ở 40C, bỏ dịch và thu cặn. Lặp lại quá trình này 4 lần.
- Cho 0,5ml dung dịch K vào, ly tâm 8000 v/p trong 10 phút ở 40C, loại bỏ dịch và thu cặn.
- Cho 0,5ml lysis buffer, 12,5àl SDS 10%, 10 àl Protease K, ủ ở 560
C từ 2-3 giờ.
- Cho 0,5 ml Phenol : Chloroform : Isoamyl, ly tâm 10000 v/p trong 10 phút ở 40C , hỗn hợp được chia làm 3 phần:
Lớp dung dịch phía trên có chứa DNA
Lớp ở giữa là cặn tế bào
Lớp dưới cùng là dịch chiết
Hút lấy phần dịch chứa DNA phía trên cùng và tiến hành lặp lại bước trên một lần nữa sẽ đảm bảo không còn tạp chất trong mẫu,
- Cho 0,5 ml chloroform: Isoamyl, ly tâm mẫu ở 10000 v/p trong 10 phút ở 40C. Hút lấy phần dịch trên cùng và tiến hành lặp lại 1 lần nữa.
- Tủa DNA bằng 1ml cồn tuyệt đối, cho thêm 50 μl Na acetat, để lạnh qua đêm ở -20°C.
- Ly tâm 13000 v/p trong 20 phút ở 40C, đổ dịch trên, thu tủa
- Rửa tủa bằng cồn 70°. Tủa DNA được hoà tan bằng 50 ml nước tinh khiết hoặc TE.
Phân tử DNA thu được sẽ được kiểm tra độ tinh sạch bằng phương pháp đo mật độ quang ở bước sóng 260/280 nm.