- Nhóm nghiên cứu:
2.2.1. Dụng cụ: Phải được vô trùng tuyệt đối (hấp ướt 120°C trong 20 phút)
- Máy Gene Amp PCR System 9700 (USA), - Tủ lạnh sâu: -30°C; -80°C (SANYO), - Máy điện di: Mupid (Nhật Bản),
- Máy soi gel và chụp ảnh tự động thạch đã điện di: (Dolphin Chemi Wealtec, USA),
- Máy quang phổ kế Thermo Electron Corporation của hãng Biomate, - Máy điện di mao quản Agilent 2100 Bioanalyzer,
- Máy ly tâm lạnh Beckman (USA) và ly tâm để bàn Eppendorf (Đức), - Lò vi sóng (Samsung),
- Tủ nuôi cấy có chế độ lắc,
- Máy đọc trình tự gen 3100-Avant Genetic Analyzer của hãng ABI-PRISM - Tủ ấm,
- Pipet, đầu cụn cỏc loại,
- Eppendorf 1,5 ml, ống phalcol. - Cóng đo sạch.
- Chai nuôi cấy tế bào: diện tích mặt đáy 25 cm2, nhãn hiệu Nunc.
2.2.2. Hóa chất
* Hoá chất dùng để tách chiết DNA:
- Dung dịch lysis buffer, - Dung dịch K,
- Dung dịch SDS 10%, - Proteinase K (10 mg/l),
- Dung dịch phenol : chloroform : isoamyl với tỷ lệ 25:24:1, - Dung dịch chloroform : isoamyl với tỷ lệ 24:1,
- Ethanol 100% và ethanol 70%, - Sodium acetate 3M, pH=5,2,
- Dung dịch hòa tan DNA sau khi tách.
Dung dịch Lysis buffer
Hoá chất Nồng độ working Lượng hút
(tổng 500ml)
Saccarose 0,3M 51,3 g
Trisbase HCl (pH= 7,5) 0,01M 0,785 g
MgCl2 0,005M 0,2375 g
Trixton X-100 1% (v/v) 5ml (cho sau)
Chỉnh pH =7,5 bằng HCl, dẫn nước đến 500ml
Dung dịch K
Hoá chất Nồng độ working Lượng hút
(tổng 200ml)
NaCl 0,075M 0,8775g
EDTA 0,024M 1,7868g
* Hóa chất tách chiết RNA tổng số (Wako):
+ Isogen, Isopropanol, + Ethanol 70%,
+ DEPC - water.
* Hóa chất tổng hợp cDNA (Invitrogen):
+ Random primer, + dNTP 10mM, + PCR buffer 5X,
+ DTT 0,1M (proteinase inhibitor), + HPRI (RNAase inhibitor),
+ MMLV-RT (enzym tổng hợp ngược).
* Hóa chất chạy PCR (Invitrogen):
+ 10 X buffer, + dNTP mix, + Taq polymerase,
+ Các cặp mồi (xuôi và ngược).
* Hoá chất nhân dòng gen:
+ Vector tạo dòng,
+ Môi trường nuôi cấy khuẩn lạc, + X-gal, ITPG,
+ Kháng sinh.
* Hoá chất để đọc trình tự:
+ Big dye, cột lọc.
* Hóa chất nuôi cấy tế bào ối:
+ Môi trường nuôi cấy AmnioMax của hóng Gibco, + Huyết thanh bê, trypsin 2,5%,