- 8 0 ả g 3.3 : Kết ả t ử ng m SA t ên k áng ết t n t đượ vớ nồng độ
1. Nội dung có trong đề cương nhưng kh ngtr nh bày trong kết quả thực nghiệm của đề tài (nội dung 6.2)
nghiệm của đề tài (nội dung 6.2)
So với nội dung dự kiến trong đề cương, chúng tôi tự đánh giá đã thực hiện hoàn ch nh (có vượt mức) các nội dung đề ra. Tuy nhiên, trong quá trình thực hiện, dựa trên các kết quả thực nghiệm thu được của các nội dung trước, chúng tôi đã có một số thay đổi nhỏ trong nội dung 6.2 để các kết quả của đề tài có ý nghĩa hơn. Chúng tôi in ph p được giải trình cụ thể như sau:
Trong nội dung 6.2, theo đề cương nghiên cứu, chúng tôi đã dự kiến biểu hiện định hướng mô cánh và chân ruồi và phân tắch kiểu hình để hướng đến việc sử dụng trong mô hình sàng lọc thuốc trong các đề tài nghiên cứu kế tiếp.
Trên thực tế, chúng tôi đã cho biểu hiện định hướng mô cánh, chân ruồi. Kết quả thực nghiệm cho thấy ruồi knock-down dUCH tại mô tiền phân sinh cánh gây các kiểu hình teo cánh ruồi (Bảng 3.2, hình 6.3)
- 96 -
. Tuy các kiểu hình này rất rõ và dễ quan sát, nhưng khi cánh ruồi bị teo, ruồi thường dễ bị d nh vào môi trường và chết, gây ảnh hưởng cho các sàng lọc, nghiên cứu sau đó. Do vậy, chúng tôi đã không tiếp tục sử dụng mô hình này mà chuyển sang biểu hiện tại mô mắt. Trong tương lai, cùng với việc chứng minh vai trò của protein UCH-L1 trong bệnh Parkinson thông qua mô hình ruồi giấm, chúng tôi có thể hướng đến việc sử dụng kiểu hình mắt nhám có thể biết được mức độ tác động của thuốc lên kiểu hình gây ra do knock-down dUCH trong mô mắt ruồi. Từ đó có thể sàng lọc được các thuốc ứng viên có khả năng ức chế tác động của sự knock-down dUCH, giảm tác động trên tế bào thần kinh sản sinh dopamine.
Cũng trong nội dung 6.2, theo đề cương nghiên cứu, chúng tôi hướng đến việc nghiên cứu vai trò của UCH- đới với sự tắch tụ alpha-synuclein. Chúng tôi đã bước đầu thực hiện nội dung này và kết quả cho thấy knock-down dUCH có phần gây gia tăng sự tắch tụ alpha-synuclein trong đĩa tiền phân sinh mắt ruồi (Hình 6. . Tuy nhiên, để có thể có được các kết quả nghiên cứu sâu hơn về mối liên quan giữa kiểu hình giảm khả năng vận động của ruồi chuyển gene và các chất liên quan đến con đường sinh tổng hợp dopamine trong não ruồi, trong khoảng giới hạn về thời gian và kinh phắ của đề tài, chúng tôi đã tiến hành thực hiện phân tắch ảnh hưởng knock-down dUCH lên tế bào thần kinh sản sinh dopamine (như kết quả đã trình bày ở trên hình 6.2)
Hình 6.4: Khả sát tá động knock-down dUCH lên sự tắch tụ alpha-synuclein trong mô tiền phân sinh mắt ruồi
- 97 -
2. Các nội dung thực hiện thêm so với nội dung đề cương
Chúng t i đã thực hiện thêm 4 nội dung so với đề cương, nhằm có được các kết quả thực nghiệm logic, tiết kiệm thời gian, nguyên nhiện vật liệu. Các nội dung đã thực hiện thêm so với đề cương được liệt kê như sau:
1. Nội dung khảo sát tác động của các đoạn RNS sợi đôi đã thiết kế trên mô hình tế bào nuôi cấy bằng kỹ thuật real-time PCR và Western Blot (kết quả hình 2. và 2. 2 . Đây là hai kết quả tuy không có trong đề cươg nghiên cứu nhưng trong quá trình thực hiện đề tài, chúng tôi thấy thực sự cần thiết nhằm tiết kiệm chi ph và tăng hiệu quả công việc. Trên thực tế, sau khi thiết kế các đoạn RNA sợi đôi, có thế tiến hành thực hiện các cấu trúc plasmid và vi tiêm vào ruồi ngay. Nhưng, trong đề tài này, chúng tôi đã tiến hành kiểm chứng trên tế bào. Nếu các thiết kế của chúng tôi đúng, chúng tôi mới tiếp tục thực hiện các bước vi tiêm.
2. Thực hiện kiểm chứng kháng thể kháng dUCh tạo được trên mô hình ruồi chuyển gen biểu hiện vượt mức dUCH (kết quả hình 3.13). Trên thực tế, các kết quả Elisa kết hợp với kết quả Western Bolt trên protein tái tổ hợp và prtein tổng từ tế bào E. coli biều hiện dUCH cũng như protein tổng từ ruồi giấm cho phép chúng tôi kh ng định độ chuyên biệt của kháng tể được tạo thành. Tuy nhiên, tận dụng lợi thế về việc sở hữu các dòng ruồi biểu hiện vượt mức dUCH (kết quả của đề tài nghiện cứu thuộc quỹ Nafosted), chúng tôi quyết định tiến hành biểu hiện vượt mức dUCH trong mô mắt ruồi và sử dụng kháng thể kháng dUCH để phát hiện mức dộ biểu hiện của protein dUCH. Kết quả này cho phép kết luận thêm về độ đặc hiệu cũng như khả năng sử dụng kháng thể thu được trong các nghiên cứu dòi hỏi độ nhạy cho phép phân biệt mức độ biểu hiện của các protein mục tiêu.
3. Chúng tôi đã thực hiện knock-down dUCH trong mô tiền phân sinh mắt ruồi nhằm xây dựng mô hình sàng lọc chất ức chế tác động của knock-down dUCH trong mục tiêu sàng lọc thuốc say này (hình . và .2 . Đây là nội dung thực hiện thay thế nội dung knock-down tại mô cánh và chân ruồi đã thực hiện một phần (như đã trình bày ở trên).
4. Chúng tôi đã tiến hành khởi đầu các nghiên cứu tác động của việc knock-down dUCH trong mô não ruồi và các phân tắch ảnh hưởng trên các yếu tố trong con
- 98 -
đường sinh tổng hợp dopamine tại tế bào thần kinh sản sinh dopamine (hình 6.2). Đây là kết quả hoàn toàn mới và có ý nghĩa khoa học. liên quan trực tiếp đến định hướng nghiên cứu và sử dụng mô hình ruồi chuyển gene trong sàng lọc thuốc sau này.
Trên đây là một số giải trình về các nội dung thực hiện khác biệt so với đề cương nghiên cứu. Các thay đổi hoàn toàn dựa trên các kết quả thực nghiệm thu được và định hướng của đề tài cũng như các thông tin mới liên quan đến đề tài được cập nhật trong qua trình nghiên cứu so với thời điểm viết đề cương. X t về số lượng nội dung công việc, so với đề cương, chúng tôi ch có một thay đổi nhỏ trong nội dung 6.2. Chúng tôi đã thực hiện nội dung này, tuy nhiên không trình bày nội dung này trong báo cáo nghiệm thu. Thay vì thế, chúng tôi đã tiến hành một số nội dung khác để đề tài được logic và có ý nghĩa khoa học hơn. Do vậy, chúng tôi xin phép trình bày các kết quả thay thế này trong báo cáo nghiệm thu. K nh mong được sự chấp thuận của hội đồng.
- 99 -
CHƯƠNG IV: