- Các kết quả chứng minh mối liên quan giữa việc knockdown duch
a. siRNA (short interference RNA)
dsRNA mạch dài được enzyme Dicer cắt thành những đoạn ngắn hơn khoảng 20-2 nucleotide, được gọi là siRNA (short interference RNA). Các siRNA này sẽ
- 21 -
được tách thành 2 mạch đơn. Một trong 2 mạch của phân tử siRN được gọi là mạch dẫn đầu, mạch này được lựa chọn và sau đó được sát nhập vào phức hợp RISC( RNA- induced silencing complex ) bởi tiểu phần argonaute của RISC, một tiểu phần protein có chức năng úc tác trong phức hợp RISC. Mạch đơn còn lại của siRNA bị tiêu hủy đi. Phức hợp R SC đã gắn mạch dẫn đầu sẽ tiếp cận và gắn với mRNA mục tiêu theo cách bổ sung hoàn toàn, sau đó phân cắt mRNA này.
Hình 7. ơ ế siRNA c a quá trình RNAi
b.miRNA (micro RNA)
Tiền thân của miRNA có dạng cấu trúc kẹp tóc, chứa khoảng 70 Nu, được biến đổi nhờ một phức hợp protein từ một mạch RNA rất dài trong nhân tế bào. Sau khi rời khỏi nhân ra tế bào chất, enzyme Dicer cắt đoạn mạch vòng của cấu trúc này tạo miRN trưởng thành, có cấu trúc giống siRN , cũng là dsRNA gồm 2 mạch đơn. Ch một trong 2 mạch của miRNA sát nhập vào phức hợp RISC. Phức hợp RISC mang miRNA tiếp cận và gắn bổ sung với mRNA mục tiêu. Đến đây, tùy theo mức độ gắn bổ sung với mRNA mục tiêu là gắn hoàn toàn hay ch gắn một phần. Kết quả của quá trình này là sự phân cắt mRNA mục tiêu hay ức chế quá trình dịch mã của mRNA mục
- 22 -
tiêu. Nếu miRNA bổ sung gần như hoàn toàn với trình tự mRN đ ch thì phức hợp RISC-miRNA sẽ phân cắt mRNA mục tiêu, nếu bổ sung một phần, phức hợp này sẽ tham gia ức chế quá trình dịch mã.
Hình 8. ơ ế miRNA c a quá trình RNAi
5.2. Kỹ thuật knock down gen
Dựa vào cơ chế và những đặc t nh nêu trên, RN i được ứng dụng như một kỹ thuật giúp làm Ộim lặngỢ gen mục tiêu, tức là làm cho gen mục tiêu không biểu hiện, còn gọi là kỹ thuật knock down gen, thường được áp dụng ở các đối tượng có tế bào nhân thật.
Có 2 phương pháp của kỹ thuật RNAi hiện đang được sử dụng rộng rãi:
- Phương pháp RN i ngoại sinh: dsRN được tổng hợp in vitro và sau đó được đưa vào tế bào động vật để hoạt động RNAi diễn ra.
- Phương pháp RN i nội sinh: vector biểu hiện có mang 2 trình tự gen ngược chiều nhau được đưa vào tế bào động vật, sau đó, dsRN được tổng hợp trong tế bào và hoạt động RNAi diễn ra.
- 23 -