Lấy máu tĩnh mạch vào buổi sáng sau 8h ÷ 10h nhịn đói.
2.2.3.1. Định lượng glucose máu (G):
∗ Phương pháp định lượng: Enzym so màu trên máy phân tích tự động Hitachi.
∗ Nguyên lý: Glucose trong huyết thanh bị oxy hóa dưới tác dụng của glucose oxydase (GOD) tạo thành gluconic acid và H2O2;
H2O2 kết hợp với phenol và antipyrin dưới tác dụng của peroxidase tạo phức chất màu đỏ, đậm độ màu tỷ lệ thuận với nồng độ glucose.
GOD
Glucose + O2 ⎯⎯→ Glucosenic acid + H2O2 GOD
H2O2 + 4 amino antipyrin + phenol ⎯⎯→ Quinoneimin + 4 H2O Đo mật độ quang của phức hợp ở bước sóng 546nm.
Mật độ quang đo được tỉ lệ với nồng độ glucose trong bệnh phẩm
∗ Giá trị bình thường từ 3,9 - 6,4 mmol/l
2.2.3.2. Định lượng insulin máu (I)
∗ Phương pháp định lượng: Insulin máu được định lượng theo phương pháp miễn dịch điện hóa phát quang trên máy xét nghiệm “Miễn dịch tự động-ELESYS - 2010” tại khoa sinh hóa Bệnh viện Bạch Mai.
∗ Nguyên lý: Phản ứng kết hợp kháng nguyên kháng thể.
∗ Tiến hành: Insulin trong bệnh phẩm được ủ với biotinylated- kháng thể insulin đặc hiệu đơn dòng (monoclonal insulin-specipic antibody) và kháng thể insulin đặc hiệu đơn dòng được đánh dấu bằng ruthenium, phản ứng tạo thành phức hợp kháng nguyên – kháng thể (sandwich complex). Sau đó phức hợp này lại được ủ tiếp với các vi phần tử (microparticles) được bao bọc bởi streptavidin. Phức hợp tạo thành được bao bọc bởi dung dịch đặc qua sự tương tác của biotin và streptavidin. Phức hợp phản ứng được đưa vào buồng đo, tại đây, các vi phân tử được bao bọc có từ tính thoát lên trên bề mặt của điện cực, các chất không được bao bọc được loại bỏ bằng ProCell. Áp điện thế với điện cực gây phản ứng phát quang bằng phản ứng hóa học và kết quả được đo đạc bằng bộ nhân quang.
2.2.3.3. Định lượng HbA1C
∗ Định lượng hemoglobin glycosyl (HbA1c) bằng phương pháp miễn dịch độ đục theo nguyên tắc: HbA1c phản ứng với kháng thể kháng HbA1c tạo thành một phức hợp miễn dịch có thể hòa tan được. Sau đó những
polyhapten (4 kháng nguyên) từ thuốc thử R2 sẽ gắn với những kháng thể dư thừa. Phức hợp kết dính có độ đục tạo thành được đo bằng quang kế ở bước sóng 570nm. Nồng độ HbA1c (g/l) được máy tự động tính dựa trên đường biểu diễn logarit – log của độ hấp phụ của bốn nồng độ chuẩn.
Định lượng hemoglobin (Hb) bằng kỹ thuật đo quang ở bước sóng 570nm. Tính tỷ lệ theo công thức:
+ 2.76
∗ giá trị bình thường < 6.5%
2.2.3.4. Định lượng các thành phần lipid máu: Cholesterol toàn phần, Triglycerid, HDL-C, LDL-C.
• Cholesterol toàn phần:
∗ Phương pháp định lượng: Theo phương pháp enzyme so màu dựa trên nguyên tắc: Cholesterol esters trong mẫu bị thủy phân bởi Cholesterol esterase thành cholesterol và acid béo. Cholesterol bị oxy hóa tiếp để tạo thành cholesterol-3-one và hydrogen peroxide (H2O2). Hydrogen peroxide kết hợp với 4-aminoantipirine và phenol với sự xúc tác của peroxydase (POD) thành sản phẩm có mầu đỏ là quinoneimine, được đo ở bước sóng 540/600nm. Màu đỏ của sản phẩm tỷ lệ với nồng độ CT trong mẫu bệnh phẩm.
∗ Bình thường: < 5,2 mmol/L; Tăng: ≥ 5,2 mmol/L HbA1c (g/dl) × 100 % HbA1c = 0,82 ×
• Triglycerid
∗ Phương pháp định lượng: Theo phương pháp enzyme so màu. Triglycerid được thủy phân dưới tác dụng của enzym lipoprotein lipase tạo glycerol. Phosphoryl hóa glycerol dưới tác dụng của enzym glycerokinase tạo glycerol 3- Phosphat sau đó dưới tác dụng của enzyme glycerol 3- Phosphoxydase oxydase và enzyme peoroxidase cùng sự có mặt của chất tạo màu aminoantipyrin tạo sản phẩm màu hồng. Mật độ quang của sản phẩm tỷ lệ với nồng độ Triglycerid trong bệnh phẩm và được đo ở bước sóng 540nm.
LP lipase
LP ⎯⎯⎯⎯⎯⎯→ Glycerol + acid béo Glycerol kinase
Glycerol + ATP ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯→ Glycerol -3- phosphat + ADP Glycerol -3- phosphat oxydase
Glycerol -3- phosphate + O2 ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯→ Dihydroxyaceton phosphate + H2O2
Peroxidase
H2O2+ Aminoantipyrin + 4 chlorophenol ⎯⎯⎯⎯⎯⎯→ Quinoneimine + HCL + 4 H2O
∗ Bình thường: < 1,7 mmol/L ; Tăng: ≥ 1,7 mmol/L.
• HDL-C (High density lipoprotein cholesterol)
∗ Phương pháp định lượng: Enzym so màu.
- Kỹ thuật: Dùng các kháng thể đặc hiệu để kết tủa LDL-C, VLDL và chylomicrons. Phần HDL-C còn lại trong mẫu bị thủy phân bởi cholesterol esterase (CHE) thành cholesterol và acid béo. Cholesterol bị oxy hóa tiếp để tạo thành Cholesterol -3-one và hydrogen peroxide (H2O2). H2O2 kết hợp với 4- aminoantipirine và F- DAOS với sự xúc tác của peroxydase (POD) thành
sản phẩm có mầu xanh, được đo ở bước sóng 600nm. Màu xanh có tỷ lệ với nồng độ HDL-C có trong mẫu bệnh phẩm.
∗ Bình thường: > 1,0 mmol/L; Giảm: ≤ 1,0 mmol/L.
• LDL-C (low density lipoprotein cholesterol):
LDL-C được tính theo công thức : LDL-C (mmol/L) = CT− TG/2,2 −
HDL-C (Với điều kiện TG < 4,6 mmol/L)
∗ Bình thường: < 3,1 mmol/L ; Tăng: ≥ 3,1 mmol/L
Bảng 2.3. Phân loại rối loạn Lipid máu theo khuyến cáo của Hội tim mạch Việt Nam (2006)
Các thông số Bình thường Có rối loạn
Cholesterol < 5,2 mmol/L ≥ 5,2 mmol/L Triglycerid < 1,7 mmol/L ≥ 1,7 mmol/L
HDL-C > 1,0 mmol/L ≤ 1,0 mmol/L
LDL-C < 3,1 mmol/L ≥ 3,1 mmol/L