3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
2.3.4. Xác định serotype kháng nguyên Ovi khuẩn E.coli bằng phản
ngưng kết nhanh trên phiến kính
Sau khi kiểm tra các đặc tính sinh vật hóa học của các chủng E. coli
phân lập được, chúng tôi tiến hành xác định serotype bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính. Vì kháng nguyên O của vi khuẩn E. coli có rất nhiều serotype bởi vậyngười ta thường sản xuất các nhóm kháng huyết thanh O, mỗi nhóm gồm một số serotype, đồng thời cùng sản xuất các kháng huyết thanh đơn giá. Muốnxác định serotype vi khuẩn E. coli phải tiến hành xác định nhóm với kháng huyết thanh nhóm, sau đó mới xác định serotype với kháng huyết thanh đơngiá thuộc nhóm kháng huyết thanh đa giá đã ngưng kết.
* Cách tiến hành: Trên một phiến kính sạch, nhỏ hai giọt nước muối sinh lý ở hai đầu. Dùng que cấy vô trùng lấy một khuẩn lạc E. coli cần xác định serotype mọc trên thạch máu hoà tan vào hai giọt nước muối sinh lý ở haiđầu của phiến kính.
Dùng que cấy vô trùng lấy kháng huyết thanh đa giá nhóm trộn vào một bên huyễn dịch vi khuẩn, trộn đều. Còn huyễn dịch vi khuẩn bên kia không trộn huyết thanh đa giá nhóm (đối chứng âm). Để yên từ 1-2 phút nhiệt độ phòng, đọc kết quả phản ứng.
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
+ Phản ứng dương tính: khi trong giọt huyễn dịch kháng huyết thanh và vi khuẩn có những hạt ngưng kết, mức độ ngưng kết được đánh giá từ 1+ đến 4+.
+ Phản ứng âm tính: Phần huyễn dịch vi khuẩn và kháng huyết thanh vẫn đục đều không có hạt ngưng kết xuất hiện bên đối chứng âm.
Chọn những lạc có ngưng kết với kháng huyết thanh đơn giá nhóm, tiến hành làm ngưng kết với từng kháng huyết thanh đơn giá thuộc nhóm như đã tiến hành với nhóm đa giá. Nừu một vi khuẩn ngưng kết chéo với nhiều nhóm, hoặc nhiều kháng thể đơn giá thì phải pha loãng kháng huyết thanh thành các độ pha loãng khác nhau theo cấp số 2(1/2; 1/4, 1/8.... 1/64) rồi làm phản ứng với từng độ pha loãng. Serotype nào ngưng kết ở hiệu giá pha loãng kháng huyết thanh coa nhất đó là serotype của vi khuẩn.