3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
2.3.2. Phương pháp phân lập vi khuẩn E.coli trên môi trường nuôi cấy
(Phương pháp nuôi cấy, phân lập và xác định tính chất sinh vật, hoá học, yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E. coli theo phuơng pháp thường quy của Bộ môn Vi trùng Trung tâm chẩn đoán thú y Trung ương)
Sơ đồ 2.1: Các bước tiến hành thí nghiệm
Chọn khuẩn lạc
Mẫu phân, bệnh phẩm từ lợn nghi mắc bệnh
Môi trường thạch máu MacConkey
Phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính
Thạch máu Giám định vi khuẩn E. coli Phản ứng PCR Phát hiện các yếu tố gây bệnh Xác định Serotype kháng nguyên Thử kháng sinh đồ
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ - Cách lấy mẫu bệnh phẩm:
+ Mẫu phân: Dùng tăm bông vô trùng lấy phân trực tiếp từ trực tràng của lợn nghi nhiễm E. coli, cho vào lọ có chứa môi trường bảo quản, giữ trong thùng bảo ôn và gửi nhanh về phòng thí nghiệm.
+ Mẫu phủ tạng: Sau khi mổ khám, cắt một phần tổ chức tim, gan, lách, hạch ruột, phổi cho vào từng lọ riêng biệt, đậy kín, bảo quản trong thùng bảo ôn và gửi nhanh về phòng xét nghiệm.
+ Mẫu máu: Dùng bơm tiêm lấy 03 ml máu từ vịnh tĩnh mạch cổ sau khi đã sát trùng cẩn thận, chia vào 02 ống Eppendorf, đậy kín, để yên cho đến khi máu đông, cho vào thùng bảo ôn và gửi nhanh về phòng thí nghiệm. Tất cả các loại mẫu đều được ghi chép đầy đủ các thông tin trên phiếu bệnh phẩm và nhãn bệnh phẩm, đảm bảo giống nhau giữa nhãn và phiếu bệnh phẩm.
- Cách xử lý bệnh phẩm: Cắt một mẫu bệnh phẩm phía trong, dùng panh kẹp vô trùng ria cấy trực tiếp lên thạch đĩa hoặc đem nghiền bệnh phẩm thành huyễn dịch với nước sinh lý theo tỷ lệ1/10 rồi dùng ống hút cấy vào thạch máu, thạch thường, thạch MacConkey, bồi dưỡng tủ ấm 370
C trong 24 giờ. Trên môi trường thạch MacConkey khuẩn lạc màu hồng, tròn, nhỏ, rìa gọn hơi lồi, không nhầy, đường kính khuẩn lạc 1,5 - 2 mm. Sau đó chọn những khuẩn lạc thuần điển hình, đứng riêng rẽ cấy chuyển sang thạch máu và nước thịt giữ giống để tiến hành giám định kiểm tra.