Các kỹ thuật đ−ợc áp dụng là ph−ơng pháp cơ học [49],[51], hoá học [84], sinh hoá, hay gần đây nhất là tia laser [41],[72] để thực hiện thao tác trên màng ZP. Với kỹ thuật trên, AH có thể thực hiện bằng cách làm mỏng màng Zona, tạo một lỗ thủng trên màng zona hay loại bỏ hoàn toàn màng zona. Nghiên cứu cho thấy cả bốn ph−ơng pháp đều có độ an toàn và hiệu quả nh− nhau trong việc hỗ trợ phôi thoát màng. Tuy nhiên với những −u nh−ợc điểm của từng ph−ơng pháp, hiện nay hai ph−ơng pháp đ−ợc áp dụng nhiều nhất là: Acid tyrode và laser [59],[72],[89].
1.5.4.1. Ph−ơng pháp sử dung acid Tyrode: Trong ph−ơng pháp này, màng Zona pelluciđa d−ới tác dụng của dung dịch có độ pH thấp sẽ bị bào mòn. Acid này có độ pH 2,2-2,6 đã đ−ợc sử dụng từ nhiều thập niên qua cho mục đích này[72]. Tuy nhiên kích th−ớc của lỗ thủng th−ờng khó kiểm soát vì phụ thuộc vào số l−ợng acid bơm ra, sự khác biệt về đặc tính của màng zona của từng phôi cũng đòi hỏi kinh nghiệm của ng−ời thao tác. Lợi điểm của acid tyrode là chi phí đầu t− thấp, cơ động. Do đó acid vẫn đ−ợc sử dụng rộng rãi tại các labo TTTON lớn trên thế gới và khu vực để hỗ trợ thoát màng. Sự an toàn của việc sử dụng acid trong hỗ trợ màng cũng đã đ−ợc chứng minh. SAI và cộng sự năm 2006 cho thấy trẻ sinh ra từ các chu kỳ hỗ trợ thoát màng bằng acid có tỷ lệ bất th−ờng nhiễm sắc thể t−ơng đ−ơng so với nhóm chứng [89].
1.5.4.2. Ph−ơng pháp sử dụng Laser: Việc sử dụng tia laser trong hỗ trợ phôi thoát màng đã đ−ợc triển khai ngay từ những năm cuối thập niên 80 .Tuy nhiên chỉ đến khi hệ thống laser không tiếp xúc trực tiếp ra đời và nhất là khi tổ chức D−ợc phẩm và thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) chính thức công nhận
laser đ−ợc sử dụng trong TTTON thì việc ứng dụng và lắp đặt hệ thống laser cho hỗ trợ thoát màng ngày càng trở nên dễ dàng và hiệu quả hơn. Với những −u điểm nh− có độ chính xác cao, thời gian thực hiện ngắn, có thể ứng dụng trong một số kỹ thuật khác và quan trọng là không cần đòi hỏi nhiều kinh nghiệm ở ng−ời thực hiện, laser ngày càng đ−ợc sử dụng phổ biến [38],[59],[72].