11 Kháng sinh
2.3.2.2.Các phương pháp sử dụng trong quy trình chuyển gen bằng vi tiêm AND vào phôi gà 0 giờ ấp
2.3.2.2.1. Phương pháp rèn kim tiêm
- Sử dụng ống mao quản thủy tinh có đường kính 1 mm để kéo kim.
- Máy kéo kim được đặt chương trình sẵn để kéo được đầu kim tiêm có đường kính 30 – 40 àm.
- Bẻ đầu nhọn để có chiều dài và có độ vát phù hợp.
2.3.2.2.2. Phương pháp tạo phức hợp lipoplex (ADN- liposome)
Khi thực hiện chuyển gen nhờ liposome cần chú ý tới 3 yếu tố quan trọng là: nồng độ ADN, nồng độ LipofectaminTM 2000 và thời gian ủ tế bào với hỗn hợp ADN – liposome. Ba yếu tố này cần được kiểm tra một cách hệ thống để thu được hiệu quả chuyển gen cao nhất, phù hợp với từng dòng tế bào. Quy trình thực hiện tạo phức hợp lipoplex (ADN-liposome) như sau:
- Lắc nhẹ LipofectaminTM 2000 trước khi sử dụng, nhỏ từ từ 2 àl LipofectaminTM 2000 lên bề mặt của 100 àl môi trường Opti-MEMđ (hoặc DMEM hoặc môi trường sinh trưởng khơng có huyết thanh và kháng sinh) đựng sẵn trong ống eppendorf 1,5 ml.
- Ủ 5 phút ở nhiệt độ phòng. (Ghi chú: Không được trộn).
- Sau khi ủ 5 phút, nhỏ 0,8àg ADN lên vị trí nhỏ LipofectaminTM 2000 ở trên.
- Ủ 20 phút ở nhiệt độ phòng để tạo thành phức hệ ADN-Liposome. Dung dịch này có thể xuất hiện khói nhưng điều này khơng ảnh hưởng đến hiệu quả chuyển nhiễm. Ghi chú: Phức hệ ADN-Liposome bền trong 6h ở nhiệt độ phòng. Sau khi ủ 20 phút trộn đều phức hệ ADN-Liposome và dùng để tiêm.
2.3.2.2.3. Phương pháp mở cửa sổ
Tiến hành mở cửa sổ theo phương pháp mở cửa sổ cải tiến đã được nghiên cứu và hoàn thiện trong luận văn cao học của Thạc sỹ Thân Thị Trang Uyên, gồm các bước cụ thể sau:
* Chuẩn bị vỏ đậy cửa sổ
Vỏ đá vôi