B. Màng tinh trùng bị tổn thương bởi chất tẩy nhẹ ADN ngoại lai đi vào tinh trùng một cách tự do Các tinh trùng này được sử dụng để thụ tinh in vitro.
1.5.PUROMYCIN VÀ ỨNG DỤNG SÀNG LỌC TẾ BÀO CHUYỂN GEN
Puromycin là một loại kháng sinh được sử dụng trong nghiên cứu sinh học tế bào với mục đích chọn lọc tế bào đã biến đổi nhờ kĩ thuật di truyền.
Hình 1. 19: Cấu tạo hóa học của Puromycin và cơ chế tác động của nó tới q
trình dịch mã: A. So sánh cấu trúc của puromycin với phức hệ tysosyl- tARN. B. Mơ hình hoạt động của puromycin. [59]
Puromycin kìm hãm sự sinh trưởng của rất nhiều tế bào Prokaryote và Eukaryote bằng cách can thiệp vào q trình tổng hợp protein. Sự có mặt của Puromycin sẽ gây kết thúc sớm chuỗi polipeptide khi quá trình dịch mã đang
diễn ra trên ribosome. Một thành phần của Puromycin giống với đầu tận cùng 3’ của tARN vận chuyển axit amin vì thế nó có khả năng liên kết vào vị trí A của ribosome và làm ngừng q trình dịch mã, giải phóng chuỗi polypeptide ngắn hơn bình thường (hình 1.19). Cơ chế chính xác của q trình này cho đến nay vẫn chưa biết rõ nhưng vị trí 3’ chứa một liên kết amide thay cho liên kết este bình thường của tARN. Liên kết amide này làm cho phân tử khó bị thuỷ phân, từ đó khiến cho ribosome dừng hoạt động [54].
Trong sinh học tế bào, puromycin là nhân tố chọn lọc trong hệ thống nuôi cấy tế bào, cho phép chọn lọc và duy trì những tế bào biểu hiện gen kháng Puromycin. Liều lượng thích hợp để chọn lọc trong ni cấy tế bào là trong khoảng từ 10 - 100 g/ml. Mặc dù ở nồng độ thấp như 1 g/ml nó đó có thể gây chết tới 99% tế bào khơng có khả năng kháng puromycin chỉ sau 2 ngày sàng lọc [59],[65].