: Chiều mũi tên chỉ hướng tra mẫu 1 phôi, bổ sung puromycin với nồng độ
5 Trở lại bước 2 3 chu kì
6 72 7 phút
7 4 60 phút
2.3.3.9. Phương pháp điện di kiểm tra sự có mặt của ADN ngoại lai
Ở mơi trường trung tính, ADN mang điện tích âm. Do vậy, trong một
điện trường đều, ADN sẽ di chuyển từ cực âm sang cực dương. Agarose là gel thông dụng cho phân tách ADN có kích thước 0.5-20kb. Ethidium bromide cho vào gel sẽ gắn vào base và phát huỳnh quang dưới tia UV nên làm hiện rừ cỏc băng ADN.
- Chuẩn bị Gel Agarose: cho 1,5 g agarose vào trong 100 ml dung dịch đệm
TBE 1X. Đun sơi cho agarose tan hồn tồn. Để nguội xuống khoảng 50oC rồi đổ dung dịch agarose vào khay đã cài sẵn lược. Sau khoảng 1h khi gel đó
đụng, gỡ lược ra và đặt bản gel vào bể điện di. Đổ đệm TBE vào bể để dung dịch ngập mặt gel từ 1 - 2 mm.
- Tra mẫu ADN: lấy 10 àl sản phẩm PCR tra vào các giếng trong bản gel.
Chạy điện di ở hiệu điện thế 70 V, trong khoảng thời gian 45 phút. Quan sát sự di chuyển của màu để biết khi nào cần dừng điện di. Sau đó, tiếp tục chạy ở hiệu điện thế 90 V trong 10 phút để các băng ADN có kích thước gần nhau tách nhau hoàn toàn.
- Nhuộm ADN bằng Ethidium Bromide (EtBr): bản gel được nhẹ nhàng lấy ra
khỏi khuôn và cho vào ngâm trong dung dịch EtBr nồng độ 2 l trong khoảng 10 phút. Sau đó lấy bản gel ra tráng nước rồi quan sát và chụp ảnh.
2.4. THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU
Đề tài được thực hiện từ tháng 10/2008 đến tháng 11/2009, tại các địa điểm sau:
Phịng Cơng nghệ tế bào động vật, Trung tâm Nghiên cứu khoa học sự sống, Khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội.
Trung tâm Nghiên cứu gia cầm Thụy Phương – Viện Chăn nuôi Quốc gia.
Khoa Sinh học – Trường Đại học Sư phạm Hà Nội.
CHƯƠNG III: