Trong thí nghiệm này, chọn tỷ lệ cám gạo: trấu: bã đậu nành theo tỷ lệ 2:1:1 và độ ẩm 55%. Bằng cách thêm nước cất và môi trường có nồng độ dinh dưỡng X1 và điều chỉnh pH của chúng để có được môi trường nuôi cấy có độ ẩm 55% và có pH 5. Các bước tiếp theo thực hiện như mục 3.3.6. Cấy dịch huyền phù bào tử A. niger với mật độ 0,8*108 bào tử/g vào các môi trường chuẩn bị ở trên.
Đem nuôi cấy trong các tủ sấy với các nhiệt độ như sau: 300C, 350C, 400C, 450C, 500C và 550C. Thu dịch chiết enzyme từ canh trường sau 28 giờ nuôi cấy, đem xác định hoạt tính và hàm lượng enzyme amyase thu được. Kết quả phân tích phương sai ANOVA cho thấy sự khác nhau giữa các nghiệm thức là có ý nghĩa.
Đồ thị 4.4 Biểu diễn hoạt tính amylase và hàm lượng protein từ canh trường nuôi cấy
A. niger với các nhiệt độ nuôi cấy khác nhau.
Ở môi trường nuôi cấy trong nhiệt độ 350C cho kết quả hàm lượng protein và hoạt tính amylase cao nhất (631,443 UI/g CT và 55,386 mg/g), và ở nhiệt độ nuôi cấy 300C canh trường cho hàm lượng protein và hoạt tính amylase cũng khá cao (580,875 UI/g CT và 52,449 mg/g). Vậy nhiệt độ tối ưu cho sự tổng hợp amylase ở A. niger là từ 30 – 350C. Khoảng nhiệt độ này thích ứng với sự tăng trưởng và phát triển của nấm mốc do đó, nấm mốc tổng hợp enzyme tốt nhất và đạt giá trị cực đại. Còn ở nhiệt độ từ 40 – 550C do nấm mốc không thích nghi được nên khả năng phát triển kém dẫn đến khả năng tổng hợp enzyme thấp. Có thể do nhiệt độ trên 400C là quá cao và chúng ảnh hưởng đến quá trình sinh trưởng và phát triển của nấm mốc A. niger.
Toàn bộ chu kì sinh trưởng của nấm mốc trên cám có thể chia thành 3 thời kì. Đầu tiên là thời kì trương mầm của đính bào tử. Trong thời kì này phải duy trì nhiệt độ trong khoảng 30 - 320C. Tiếp đến là thời kì sinh trưởng nhanh của hệ sợi. Ở giai đoạn này, nấm mốc hô hấp rất mạnh và sinh ra một lượng nhiệt rất lớn. Kết quả là trong lớp sợi nấm đang mọc nhiệt độ tăng lên đến 37 - 400C. Vì vậy trong lúc này cần chú ý để giảm nhiệt độ phòng giúp sợi nấm mọc đều và đẹp. Cuối cùng là thời kì tạo amylase mạnh mẽ. Trong thời kì này các quá trình trao đổi chất dần dần yếu đi, sự tỏa nhiệt giảm mạnh, các enzyme amylase được tổng hợp mạnh mẽ. Trong giai đoạn này, nên hạ nhiệt độ thấp hơn nhiệt độ của giai đoạn đầu từ 3 - 40C. Nhìn chung, nhiệt độ thích hợp để nấm sợi sinh trưởng và tổng hợp amylase trên môi trường rắn nằm trong khoảng từ 28 – 350C.