Đối với mẫu đất: đất là cơ chất thuận lợi nhất đối với sự phát triển của các lồi vi sinh vật, chọn những vùng đất trồng khơ ráo, khơng lấy mẫu khi đất bị ướt trên cùng một vùng chia thành các lơ khác nhau để thu mẫu. Mẫu khơng được lấy ở những vùng đất đã được bĩn phân hữu cơ hoặc phân trộn trong vịng 6 tháng hay những vùng đất vừa bị đốt cháy. Mẫu được thu ở những độ sâu khác nhau
của những vùng đất canh tác nơng nghiệp từ những địa điểm khác nhau.
Mẫu
Cho vào mơi trường RCM,
bổ sung sodium thioglycolate và parafin Ủ trong bể ổn nhiệt 70oC, 10 phút Tăng sinh
Ủ trong bể ổn nhiệt 70oC, 10 phút Trải đĩa
Phân lập Ủ 3 - 5 ngày, 37 oC
Lặp lại 2 – 3 lần Kiểm tra hoạt tính catalase, nhuộm Gram Kiểm tra sinh acetone, nhuộm bào tử
Làm thuần
Kiểm tra khả năng sinh butanol
Bảo quản giống Định danh Hình 3.1 Quy trình phân lập và định danh Clostridium sinh butanol
Dùng xẻng rửa sạch, lau cồn để lấy mẫu đất ở nhiều độ sâu khác nhau.
Đầu tiên ta cần loại bỏ lớp đất bề mặt dày 2 – 3cm trên cùng tránh bị nhiễm bởi các vi sinh vật bên ngồi, sau đĩ lấy những tảng nguyên vẹn theo độ sâu của lớp đất nghiên cứu, chiều dài của tảng đất bằng chiều dày của tảng đất muốn lấy.
Trên diện tích 1 hecta lấy từ 2–5 mẫu/ lơ/hecta, tại mỗi vị trí lấy thêm một mẫu phụ dự trữ. Các mẫu đất được trộn đều, sau đĩ lấy khoảng 100g đất cho vào túi plastic sạch và khơ, ghi nhận các thơng tin về địa điểm thu mẫu, ngày thu mẫu.
Đối với mẫu bùn: dùng xẻng sạch gạt bỏ lớp bùn trên mặt và thu nhận lớp dưới khoảng 100g, cho vào vào túi plastic sạch và khơ, ghi nhận các thơng tin về địa điểm thu mẫu, ngày thu mẫu.
Đối với mẫu phân động vật: mẫu lấy phải khơ ráo, khơng lấy mẫu bị ướt. Dùng xẻng rửa sạch, lau cồn để lấy mẫu. Đối với mẫu phân thu nhận bằng cách lấy từ 2 – 5 mẫu ở các khu vực (hoặc trang trại) khác nhau. Các mẫu phân được trộn đều sau đĩ lấy khoảng 10g cho vào túi plastic sạch và khơ, ghi nhận các thơng tin về địa điểm thu mẫu, ngày thu mẫu.
Các mẫu được phơi khơ trong 1 tuần, lưu ý, đối với mẫu phân phải phơi
thật khơ nếu khơng sẽ cĩ mùi khĩ chịu và khĩ thao tác, mẫu được tán nhỏû và được ria qua rây (lỗ cĩ kích thước 2mm). Mẫu bùn khơng cần phơi khơ mà được sử dụng trực tiếp để phân lập.
Mẫu sau đĩ được chia nhỏ thành 10g đối với mẫu đất, bùn, 5g đối với mẫu phân và bảo quản ở nhiệt độ phịng trong các túi plastic nhỏ.
Huyền phù 1g mẫu vào 10ml nước cất thành dung dịch đồng nhất sau 20 phút tiến hành xác định pH mẫu [39].