4. đối tượng và phạm vi nghiên cứu của ựề tài
2.3.3.Phương pháp nghiên cứu tạo cây Lan A roxburghii(Wall.) Lindl.
hoàn chỉnh
Khi các chồi ựạt chiều cao khoảng 3 - 5cm với khoảng 3 - 4 lá thì chuyển sang giai ựoạn tạo cây hoàn chỉnh. Các thắ nghiệm ựược ựặt trên môi trường nền (MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5g/L thạch, pH 5,5 ). Chúng tôi tiến hành các thắ nghiệm xác ựịnh ảnh hưởng của than hoạt tắnh có hàm lượng (0,5 Ờ 2,0g/L), chất ựiều tiết sinh trưởng αNAA (0,3 - 1,5mg/L)tới giai ựoạn tạo cây hoàn chỉnh.
Các công thức ựược bố trắ theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn với 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại 20 mẫu/CT.
Các thắ nghiệm tiến hành:
Thắ nghiệm 9: Ảnh hưởng của than hoạt tắnh
Than hoạt tắnh ựược bổ sung vào môi trường MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5g/L thạch, pH 5,5, hàm lượng than hoạt tắnh thay ựổi như sau:
CT1(đ/C): Nền (MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5g/L thạch)
CT2: Nền + 0,5g/L than hoạt tắnh CT3: Nền + 1,0g/L than hoạt tắnh CT4: Nền + 1,5g/L than hoạt tắnh CT5: Nền + 2,0g/L than hoạt tắnh
Thắ nghiệm 10: Ảnh hưởng của αNAA
Từ thắ nghiệm 9 chúng tôi tìm ra hàm lượng than hoạt tắnh 1,0g/L là tốt nhất cho khả năng tạo cây hoàn chỉnh. để tìm ra môi trường thắch hợp hơn cho khả năng tạo cây hoàn chỉnh, chúng tôi tiếp tục tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng αNAA bổ sung vào môi trường MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 40
dừa + 6,5g/L thạch + 1,0g/L than hoạt tắnh, pH 5,5 với nồng ựộ αNAA thay ựổi trong mỗi công thức thắ nghiệm là:
CT1(đ/C): Nền (MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5g/L thạch + 1,0g/L than hoạt tắnh) CT2: Nền + 0,3mg/L αNAA CT3: Nền + 0,6mg/L αNAA CT4: Nền + 0,9mg/L αNAA CT5: Nền + 1,2mg/L αNAA CT6: Nền + 1,5mg/L αNAA
điều kiện nuôi cấy: Môi trường ựược vô trùng ở 1210C và 1at trong 20 phút. Cường ựộ ánh sáng: 2400 - 3000 lux, nhiệt ựộ phòng nuôi: 25 20C, số giờ chiếu sáng: 16 giờ/ngày.
Các thắ nghiệm trên ựược thực hiện ở phòng nuôi cấy mô tế bào thực vật của Trung tâm Sinh học Thực nghiệm - Viện Ứng dụng Công nghệ - Bộ Khoa học và Công nghệ.