4. đối tượng và phạm vi nghiên cứu của ựề tài
2.3.1. Phương pháp lấy mẫu, khử trùng và nuôi cấy tạo vật liệu khởi ựầu
2.2.3. Nghiên cứu tạo cây Lan A. roxburghii (Wall.) Lindl. hoàn chỉnh 2.2.4. Nghiên cứu ựưa cây Lan A. roxburghii (Wall.) Lindl. ra vườn ươm
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.1. Phương pháp lấy mẫu, khử trùng và nuôi cấy tạo vật liệu khởi ựầu Lan A. roxburghii (Wall.) Lindl. Lan A. roxburghii (Wall.) Lindl.
- Các chồi và thân ựược lấy từ cây mẹ khỏe mạnh, sạch bệnh ựược rửa sạch, cắt thành từng ựoạn dài 2 Ờ 3 cm. Các mẫu ựược lau bằng cồn 70o, sau ựó khử trùng bằng oxy già(15% H2O2), hypochlorite-Na (3% NaOCl) và rửa lại nhiều lần bằng nước cất vô trùng rồi cấy trên môi trường Murashige & Skoog (MS)
- Các công thức ựược bố trắ theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn với 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại 30 mẫu/CT
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 35
Thắ nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của chất khử trùng H2O2 và NaOCl tới
tỷ lệ sống vô trùng của mẫu cấy
Bảng 2.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của chất khử trùng H2O2 và NaOCl
Công thức
Thời gian và nồng ựộ xử lý nước oxy già
(H2O2 ) Công thức Thời gian và nồng ựộ xử lý (NaOCl) CT1 15% H2O2+ 5 phút CT1 3% NaOCl + 5 phút CT2 15% H2O2+ 10 phút CT2 3 % NaOCl + 10 phút CT3 15% H2O2+ 15 phút CT3 3 % NaOCl + 15 phút CT4 15% H2O2+ 20 phút CT4 3 % NaOCl + 20 phút CT5 15% H2O2+ 25 phút CT5 3 % NaOCl + 25 phút CT6 3 % NaOCl + 30 phút Môi trường MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5 g/L thạch
Thắ nghiệm 2: Ảnh hưởng của môi trường khoáng khác nhau ựến khả năng
tạo chồi từ mẫu cấy ban ựầu
Bảng 2.2. Ảnh hưởng của môi trường khoáng khác nhau ựến khả năng tạo chồi từ mẫu cấy ban ựầu
Công thức Môi trường khoáng cơ
bản Chất bổ sung
1 Murashige & Skoog (MS)
2 Vacin Went (VW)
3 Robert Ernst (RE)
20g ựường + 100ml nước dừa + 6,5g thạch trong 1lắt môi
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 36
Tất cả các công thức ựều bổ sung (20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5 g/L thạch)
Thắ nghiệm 3: Ảnh hưởng của chất ựiều tiết sinh trưởng BA ựến khả năng tạo
chồi từ mẫu cấy ban ựầu
CT1(đ/C): Nền (MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5 g/L thạch) CT2: Nền + 0,5mg/L BA CT3: Nền + 1,0mg/L BA CT4: Nền + 1,5mg/L BA CT5: Nền + 2,0mg/L BA CT6: Nền + 2,5mg/L BA CT7: Nền + 3,0mg/L BA