4. đối tượng và phạm vi nghiên cứu của ựề tài
2.3.2. Phương pháp nghiên cứu nhân nhanh chồi cây Lan A roxburgh
(Wall.) Lindl.
Các chồi in vitro thu ựược trong nuôi cấy ban ựầu chuyển sang môi trường nhân nhanh chồi MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5g/L thạch pH 5,5 và bổ sung các chất kắch thắch sinh trưởng Kinetin (Kin), Thidiazuron (TDZ), Benzyladenine acid (BA), Naphtyl axetic axit (αNAA) nồng ựộ dao ựộng từ 0,1 Ờ 3,0mg/L tùy theo mục ựắch thắ nghiệm. Ngoài ra trong môi trường nuôi cấy còn bổ sung hợp chất hữu cơ tự nhiên như dịch nghiền khoai tây...
Các công thức ựược bố trắ theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn với 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại 30 mẫu/CT.
Các thắ nghiệm tiến hành:
Thắ nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng của Kin ựến khả năng nhân nhanh chồi
Lan A. roxburghii (Wall.) Lindl.
CT1(đ/C): Nền (MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5 g/L thạch)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 37 CT2: Nền + 0,5mg/L Kin CT3: Nền + 1,0mg/L Kin ` CT4: Nền + 1,5mg/L Kin CT5: Nền + 2,0mg/L Kin CT6: Nền + 2,5mg/L Kin
Thắ nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hưởng của TDZ ựến khả năng nhân nhanh
chồi Lan A. roxburghii (Wall.) Lindl.
CT1(đ/C): Nền (MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5g/L thạch) CT2: Nền + 0,2mg/L TDZ CT3: Nền + 0,4mg/L TDZ CT4: Nền + 0,6mg/L TDZ CT5: Nền + 0,8mg/L TDZ CT6: Nền + 1,0mg/L TDZ
Thắ nghiệm 6: Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp (TDZ + IBA) ựến khả năng
nhân nhanh chồi Lan A. roxburghii (Wall.) Lindl.
đề tài tìm hiểu ảnh hưởng của Auxin ựến quá trình phát sinh chồi có sự tương tác với TDZ. đề tài tiến hành bổ sung IBA với các nồng ựộ khác nhau vào môi trường là MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5 g/L thạch + 0,6 mg/L TDZ, pH 5,5 (môi trường này xác ựịnh là môi trường có hệ số nhân chồi cao nhất ở thắ nghiệm trên), nồng ựộ IBA thay ựổi là:
CT1(đ/C ): Nền (MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5g/L thạch + 0,6mg/L TDZ )
CT2: Nền + 0,5mg/L IBA CT3: Nền + 1,0mg/L IBA CT4: Nền + 1,5mg/L IBA CT5: Nền + 2,0mg/L IBA
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 38
Thắ nghiệm 7: Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp (BA + αNAA) ựến khả
năng nhân nhanh chồi Lan A. roxburghii (Wall.) Lindl.
Từ môi trường tốt nhất ở thắ nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng của BA ựến khả năng tạo chồi từ mẫu cấy ban ựầu, ựề tài tiến hành bổ sung αNAA ở các nồng ựộ thay ựổi như sau:
CT1(đ/C): Nền (MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5g/L thạch + 2,0 mg/L BA)
CT2: Nền + 0,5mg/L αNAA CT3: Nền + 1,0mg/L αNAA CT4: Nền + 1,5mg/L αNAA CT5: Nền + 2,0mg/L αNAA
Thắ nghiệm 8: Nghiên cứu ảnh hưởng của dịch nghiền khoai tây ựến khả năng
nhân nhanh chồi Lan A. roxburghii (Wall.) Lindl.
Từ các thắ nghiệm trên, chúng tôi ựã thu ựược môi trường MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5g/L thạch + 2,0mg/L BA + 1,0mg/L αNAA, pH 5,5 là tốt nhất cho khả năng nhân nhanh chồi. Tuy nhiên, ựể tìm ra môi trường thắch hợp hơn cho nhân nhanh chồi. Chúng tôi tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng phối hợp của dịch nghiền khoai tây với tổ hợp BA và αNAA. Với dịch nghiền khoai tây ựược bổ sung vào môi trường với hàm lượng thay ựổi là:
CT1(đ/C): Nền (MS + 20g/L ựường + 100ml/L nước dừa + 6,5g/L thạch + 2,0mg/L BA + 1,0mg/L αNAA)
CT2: Nền + 20g/L dịch nghiền khoai tây CT3: Nền + 40g/L dịch nghiền khoai tây CT4: Nền + 60g/L dịch nghiền khoai tây CT5: Nền + 80g/L dịch nghiền khoai tây CT6: Nền + 100g/L dịch nghiền khoai tây
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 39