11 Nhiệt độ cơ thể 36-37 0 C (ở
2.7Khảo sát dãy nồng độ của Nosema bombycis lên ấu trùng sâu ăn tạp tuổi 4 bằng phƣơng pháp Droplet feeding (nhỏ giọt)
bằng phƣơng pháp Droplet feeding (nhỏ giọt)
2.5.1 Phƣơng tiện
- Nguồn Nosema bombycis: Thu thập và phân lập từ những mẫu bướm của sâu ăn tạp bị nhiễm ngoài tự nhiên khi thu bằng bẫy pheromone, sau đó ly tâm và làm tinh sạch với percoll theo quy trình của Iwano, 2008. Trữ mẫu trong 0.85% NaCl ở nhiệt độ lạnh 40
C. Sử dụng những chủng Nosema bombycis đã được định danh.
- Nguồn sâu: Sâu ăn tạp được thu thập ngoài đồng, nuôi trong điều kiện phòng thí nghiệm với thức ăn nhân tạo cải tiến do bộ môn Bảo vệ Thực Vật sản xuất (Trần Văn Hai và ctv, 2008). Trải qua một vài thế hệ sau đó kiểm tra và chọn những thế hệ sâu ăn tạp sạch không bị nhiễm các loại bệnh khác như virus, vi khuẩn để làm thí nghiệm.
2.5.2 Phƣơng pháp thí nghiệm
- Thí nghiệm được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên với 5 dãy nồng độ của Nosema bombycis (105
, 106, 107, 108 và 109 bào tử/ml) và nghiệm thức đối chứng, mỗi nghiệm thức với 4 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại gồm 24 ấu trùng sâu ăn tạp. Sử dụng phương pháp cho ăn nhỏ giọt (Hughes và Wood, 1981; Hughes et al., 1986; Kunimi và Nakai, 2000) đối với mỗi ấu trùng sâu ăn tạp cho ăn 1µl (sâu tuổi 1, tuổi 2) và 2µl (tuổi 4) dung dịch bào tử Nosema bombycis và 10% nước màu (red food color).
Ghi nhận chỉ tiêu:
- Tỷ lệ (%) sâu chết ở các ngày sau khi chủng.
- Tính độ hữu hiệu (%) theo công thức Abbott (1925).
- Kiểm tra khả năng hóa nhộng và vũ hóa của ấu trùng sâu ăn tạp đối với những cá thể sâu còn sống sót.
2.6 Khảo sát dãy nồng độ của Nosema bombycis lên ấu trùng sâu ăn tạp tuổi 2 bằng phƣơng pháp Droplet feeding (nhỏ giọt) bằng phƣơng pháp Droplet feeding (nhỏ giọt)
Cách bố trí tương tự thí nghiệm 3
2.7 Khảo sát dãy nồng độ của Nosema bombycis lên ấu trùng sâu ăn tạp tuổi 4 bằng phƣơng pháp Droplet feeding (nhỏ giọt) bằng phƣơng pháp Droplet feeding (nhỏ giọt)
Cách bố trí tương tự như mục 2.5