3. Yêu cầu nghiên cứu
3.4.4.Ảnh hưởng của nồng độ Acetosyringon (AS)
Trong tự nhiên, các tế bào thực vật khi bị tổn thương sẽ tiết ra các hợp chất dẫn dụ vi khuẩn như: Acetosyringone, hydroxy-acetosyringone. Dưới tác dụng của các hợp chất này, vi khuẩn A.tumefaciens nhận biết rồi bám vào thành tế bào chủ và chuyển T- DNA vào tế bào thực vật. Cũng chính các hợp chất này, với vai trò cảm ứng giúp cho các gen vùng vir trên Ti-plasmid hoạt động và tăng cường biểu hiện [132].
Trong thí nghiệm này chúng tôi đã nghiên cứu ảnh hưởng của AS đến khả năng xâm nhiễm của Agrobacterium vào nốt lá mầm đậu tương. Nốt lá mầm sau khi tách được lây nhiễm và nuôi cấy cộng sinh trên môi trường đồng nuôi cấy có bổ sung
Acetosyringone ở các nồng độ khác nhau (0, 50, 100, 150, 200, 250, 300mg/l).
Kết quả trình bày ở bảng 3.3 cho thấy các nốt lá mầm sau khi lây nhiễm và đồng nuôi cấy trong môi trường không có AS (AS-0mg/l) hiệu quả biến nạp gen rất thấp (0,91%). Việc bổ sung AS vào môi trường đã có tác động rõ rệt đến khả năng xâm nhiễm của vi khuẩn Agrobacterium vào mô thực vật, tần số biểu hiện gen tạm thời dao động từ 1,0 – 2,69%. Trong đó, ở nồng độ AS 200mg/l cho hiệu quả biến nạp gen cao hơn các nồng độ khác (2,69%). Khi tăng hoặc giảm nồng độ AS cho thấy
hiệu quả biến nạp có biểu hiện giảm xuống (bảng). Điều này có thể do ở nồng độ thích hợp, AS với vai trò cảm ứng sẽ giúp cho các vùng gen Vir trên Ti-plasmid hoạt động và tăng cường biểu hiện. Khi nồng độ AS trong môi trường thấp sẽ không kích thích được các gen vùng Vir quá trình chuyển T-DNA. Ngược lại, nếu quá cao sẽ ức chế sự hoạt động của vùng gen này làm cho cơ chế chuyển vùng T-DNA vào tế bào thực vật kém hiệu quả.
Bảng 3.7. Ảnh hƣởng của nồng độ AS đến khả năng biến nạp gen Nồng độ AS (mg/l) Tổng số chồi quan sát Số chồi biểu hiện gfp
Hiệu quả biến nạp (%) 0 219 2 0,91 50 201 2 1,00 100 214 3 1,40 150 211 3 1,42 200 223 6 2,69 250 208 5 2,40 300 216 4 1,85