Chương 4 BÀN LUẬN
4.5. Ảnh hưởng lờn hệ vi khuẩn chớ đường ruột
- Về vi khuẩn BB12: Tỷ lệ mẫu phõn của trẻ cú BB12(+) ở nhúm synbiotic 1 và nhúm synbiotic 2 là 81,3% và 77,8% ở thời điểm sau 3 thỏng can thiệp; sau 6 thỏng là 43,8% và 66,7%, cao hơn hẳn so với nhúm chứng và nhúm chỉ bổ sung prebiotic. Mặc dự tại thời điểm điều tra ban đầu cỏc mẫu phõn đều cú kết quả (-) đối với vi khuẩn này. Sự khỏc biệt này cú ý nghĩa thống kờ với p<0,001. Mẫu phõn của trẻ được đỏnh giỏ là (+) khi số lượng vi khuẩn BB12 ≥ 105 CFU/g phõn khụ. Tại thời điểm T3, số lượng trung bỡnh về BB12 trong phõn của trẻ ở tất cả cỏc nhúm đều tăng lờn; trong đú cao nhất là ở nhúm synbiotic 1 và synbiotic 2, là cỏc nhúm bổ sung probiotic BB12, so với nhúm chứng và nhúm prebiotic (56,5.106 và 13,3.106 so với 0,11.106 và 0,57.103). Sự khỏc biệt này cú ý nghĩa thống kờ với p<0,01. Sau 6 thỏng can thiệp, ở nhúm chứng và nhúm prebiotic khụng phỏt hiện thấy BB12 trong phõn của trẻ, trong khi đú số lượng trung bỡnh về BB12 trong phõn của trẻ ở nhúm synbiotic 1 và synbiotic 2, là những nhúm được bổ sung BB12 cú số lượng cao hơn hẳn so với cả 2 nhúm kia (1,47.107 và 1,85.107 so với 0) với p<0,01. Kết quả nghiờn cứu này cho thấy, nếu trẻ được uống bổ sung sữa cú probiotic thỡ B. lactis BB12 cú khả năng sống và phỏt triển trong đường ruột của trẻ. (Bảng 3.22; 3.23; biểu đồ 3.9)
- Về tổng số vi khuẩn: tổng số vi khuẩn cú xu hướng thấp nhất ở nhúm prebiotic
tại thời điểm T3 so với cỏc nhúm cũn lại, tuy nhiờn sự khỏc biệt này khụng cú ý nghĩa thống kờ với p>0,05. Sau 6 thỏng can thiệp, tổng số vi khuẩn đó giảm đi ở tất cả cỏc nhúm nghiờn cứu, thấp nhất ở nhúm synbiotic 1 so với nhúm chứng và nhúm prebiotic và nhúm synbiotic 2, sự khỏc biệt này cú ý nghĩa thống kờ với p <0,01 (1,70.1010 so với6,49.1010 ; 5,96.1010 và 5,06.1010 ) (Bảng 3.23).
- Về vi khuẩn lactobacilli & Bifidobacteria: Số lượng trung bỡnh của lactobacilli
trong phõn của trẻ ở nhúm prebiotic và synbiotic 1 cú xu hướng cao hơn so với nhúm chứng sau 3 thỏng can thiệp (2,88.107 và2,87.107 so với 1,79.107 ở nhúm chứng) và đến 6 thỏng thỡ cao nhất lại ở nhúm chứng. Tuy nhiờn sự khỏc biệt này
khụng cú ý nghĩa thống kờ (p>0,05). Cũn đối với Bifidobacteria, sau 3 thỏng can
thiệp thỡ số lượng trung bỡnh Bifidobacteria trong phõn của trẻ ở nhúm synbiotic 1 cú xu hướng cao hơn so với nhúm chứng và cỏc nhúm cũn lại (2,09.1010 so với 1,64.1010, 1,59.1010, 1,64.1010), tuy nhiờn sau 6 thỏng can thiệp thỡ số lượng trung bỡnh Bifidobacteria ở nhúm synbiotic 1 lại thấp hơn hẳn so với nhúm chứng với p<0,05. Tỷ lệ vi khuẩn cú lợi Lactobacilli & Bifidobacteria trờn tổng số vi khuẩn trong phõn sau can thiệp đó tăng lờn ở cả 4 nhúm nghiờn cứu, trong đú tăng cao nhất ở nhúm synbiotic 1, rồi đến nhúm chứng và nhúm synbiotic 2 đối với
Lactobacilli và nhúm synbiotic 2 đến nhúm chứng và nhúm synbiotic 1 đối với
Bifidobacteria,(Bảng 3.23 và biểu đồ 3.10; 3.11; 3.12 & 3.13).
- Về Bacteroides và E.coli: Cũng như tổng số vi khuẩn, sau 3 thỏng can thiệp số lượng trung bỡnh Bacteroides và E.coli ở nhúm prebiotic thấp hơn so với 3 nhúm cũn lại, tuy khụng cú ý nghĩa thống kờ (0,59.109 so với 0,96.109, 4,13.109 và 1,58.109 đối với bacteroides; 1,94.108 so với 6,38.108,4,55.108 và8,36.108 đối với
E.coli). Tuy nhiờn đến cuối can thiệp thỡ số lượng trung bỡnh của Bacteroides và E.coli lại thấp nhất ở nhúm synbiotic 1 (0,66.108 so với 7,60.108, 5,81.108 và 2,44.108 đối với bacteroides) và (0,24.108 so với 7,57.108,10,4.108 và0,69.108 đối với E. Coli). Tuy nhiờn cỏc sự khỏc biệt này cũng khụng cú ý nghĩa thống kờ (p>0,05). Như vậy đến cuối can thiệp (sau 6 thỏng thỡ số lượng trung bỡnh của tổng số vi khuẩn, Bacteroides và E.coli là thấp nhất ở nhúm synbiotic 1. Tỷ lệ vi khuẩn bacteroide trờn tổng số vi khuẩn trong phõn sau can thiệp đó được giảm đi rất nhiều ở 2 nhúm uống sữa bổ sung synbiotic, trong khi lại tăng lờn ở nhúm chứng và nhúm uống sữa bổ sung prebiotic. Cũng tương tự như đối với vi khuẩn
bacteroide, tỷ lệ E. coli trờn tổng số vi khuẩn trong phõn sau can thiệp đó được
giảm đi tuy khụng nhiều ở 2 nhúm uống sữa bổ sung synbiotic, trong khi lại tăng lờn rất cao ở nhúm chứng và nhúm uống sữa bổ sung prebiotic. (Bảng 3.24 và biểu đồ 3.14 & 3.15& 3.16 & 3.17). Kết quả này của chỳng tụi cũng giống như
kết quả của một nghiờn cứu khỏc việc bổ sung BB12 làm giảm vi khuẩn cú hại trong phõn của trẻ [98]
Cũng tương tự như kết quả nghiờn cứu của chỳng tụi, một số nghiờn cứu của cỏc tỏc giả khỏc cũng cho thấy, việc bổ sung GOS và FOS sẽ kớch thớch sự phỏt triển của cỏc vi khuẩn cú lợi trong đường ruột của trẻ như Bifidobacteria [99], [116]. Kết quả nghiờn cứu của Rigo cho thấy kết hợp GOS / FOS (0,4 g/100 ml) ở trẻ sơ sinh đủ thỏng cú tỏc dụng lờn bifidobacteria và tỷ lệ bifidobacteria trờn tổng số vi khuẩn trong phõn tăng từ 21% ở ba ngày tuổi lờn khoảng 50% ở 25 ngày tuổi [123]. Kết quả nghiờn cứu của Schmelzle cũng cho kết quả tương tự khi kết hợp GOS / FOS (0,8 g/100 ml) [141]. Nghiờn cứu của Costalos cho thấy clostridia trong phõn thấp hơn, số lần đại tiện nhiều hơn, phõn mềm hơn ở trẻ sơ sinh đủ thỏng được cho bổ sung 0,4 g GOS / FOS (tỷ lệ 9:1) so với nhúm chứng [59]. Một trong cỏc nghiờn cứu lõm sàng đầu tiờn của B. lactis BB12 ở trẻ em được tiộn hành tại Nhật Bản với sự tham gia của 7 trẻ em khỏe mạnh từ 15 đến 31 thỏng tuổi. Trẻ được bổ sung probiotic B. Lactis BB12 với liều lượng 1 x 109/ngày trong 21 ngày. Trong thời gian can thiệp, BB12 được tỡm thấy trong cỏc mẫu phõn của trẻ cũng như IgA ở một số mẫu phõn cao hơn đỏng kể ở một số thời điểm can thiệp. Một tuần sau khi ngừng can thiệp, BB12 đó khụng cũn phỏt hiện trong cỏc mẫu phõn và IgA trong phõn cũng khụng cao [74]. Sự xuất hiện cú chọn lọc của BB12 trong cỏc mẫu phõn của trẻ em được bổ sung probiotic cũng đó được ghi nhận trong cỏc bỏo cỏo khỏc được Haschke và cộng sự tổng hợp [87]. Một nghiờn cứu khỏc cho thấy việc bổ sung BB12 cú ảnh hưởng lờn hệ vi khuẩn đường ruột của trẻ đẻ non; số lượng B. Lactis BB12 tăng lờn ở trong phõn, trong khi đú Enterobacteria và clostridia thỡ giảm khoảng 10-15% [113]. Một nghiờn cứu khỏc tại Hà Lan trờn trẻ từ 1,6 đến 4 thỏng tuổi bị dị ứng sữa bũ với
việc cho uống sữa bổ sung BB12 và CRL341, kết quả xột nghiệm cho thấy BB12 và CRL 341 cũng được tỡm thấy trong phõn [90].
Một nghiờn cứu được tiến hành trờn 30 người tỡnh nguyện nhằm tỡm hiểu ảnh hưởng của GOS đơn lẻ hoặc GOS kết hợp với probiotic B.Lactis BB12 cho thấy
khụng cú sự khỏc biệt về tỷ lệ và số lượng Bifidobacterium lactis BB12 giữa cỏc nhúm nghiờn cứu, kết quả này cho thấy GOS khụng phải là yếu tố làm tăng khả năng sống cũn hoặc bền bỉ của B. lactis BB12 [25]. Nghiờn cứu của chỳng tụi
khụng chứng minh được điều này do khụng cú nhúm probiotic riờng lẻ.
Một nghiờn cứu khỏc được tiến hành trờn 105 trẻ khỏe mạnh tuổi từ 0-2 thỏng, trẻ được chia thành 2 nhúm: nhúm can thiệp (51 trẻ) được uống sữa cú bổ sung LGG
và nhúm chứng (44 trẻ) được uống sữa cụng thức khụng bổ sung cho đến khi trẻ được 6 thỏng tuổi nhằm đỏnh giỏ ảnh hưởng của sữa cụng thức được bổ sung
Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) lờn tăng trưởng và vi khuẩn trong phõn
trong 6 thỏng đầu đời của trẻ. Kết quả nghiờn cứu cho thấy nhúm can thiệp cú số lần đại tiện cao hơn một cỏch cú ý nghĩa so với nhúm chứng 9,1 ± 2,06 so với 8,0 ± 2,8 (p<0,05). Chủng Lactobacilli được tỡm thấy nhiều hơn một cỏch cú ý nghĩa ở nhúm can thiệp so với nhúm chứng ( 91% so với 76% (P<0,05) [157]. Trong nghiờn cứu của chỳng tụi khi bổ sung CRL-341 và BB12 thỡ trong 3 thỏng đầu số lượng Bifidobacteria và Lactobacilli cú tăng lờn, tuy nhiờn xu hướng này khụng được duy trỡ sau 6 thỏng can thiệp.
Một số nghiờn cứu khỏc cũn cho thấy việc kết hợp prebiotic và probiotic cải thiện độ đặc lỏng của phõn [36], [67], [122], [158] và ảnh hưởng tớch cực lờn vi khuẩn đường tiờu húa thụng qua việc kớch thớch sự phỏt triển của Bifidobacteria [122] . Nghiờn cứu của Bakker-Zierikzee trờn 3 nhúm trẻ sơ sinh được tiến hành ngay sau khi trẻ sinh ra, trẻ được ngẫu nhiờn chia thành 3 nhúm: nhúm1 (n=19) được uống sữa bổ sung prebiotic (GOS/FOS) với 6 g/l, Nhúm prebiotic (n = 9) được
uống sữa cú bổ sung BB12 với liều lượng 6,0 x1010/L và nhúm chứng (n =19), được uống sữa cụng thức khụng bổ sung trong vũng 16 tuần. Mẫu phõn được lấy xột nghiệm vào ngày thứ 5 và 10 sau khi trẻ sinh và vào tuần thứ 4, 8, 12 và tuần 16. Kết quả nghiờn cứu cho thấy tỷ lệ bifidobacteria cú cao hơn ở cỏc nhúm can thiệp ở tuần thứ 16, tuy nhiờn sự khỏc biệt này khụng cú ý nghĩa thống kờ (tương ứng là 59,2%, 52,7% và 51,8% ở nhúm GOS/FOS, nhúm BB12 và nhúm chứng [30]. Kết quả này cũng tương tự như trong nghiờn cứu của chỳng tụi, ở thỏng thứ 3 tỷ lệ bifidobacteria ở cỏc nhúm bổ sung prebiotic và synbiotic 1 cũng cú xu hướng cao hơn so với nhúm chứng (22,9%, 24,4% so với 20,4%), tuy nhiờn xu thế này khụng duy trỡ ở thỏng thứ 6.
Một nghiờn cứu khỏc trờn 30 trẻ đẻ non được chia làm 2 nhúm: nhúm can thiệp được bổ sung GOS/FOS 10g/L với tỷ lệ như trong sữa mẹ (9:1) và nhúm chứng được bổ sung sữa cụng thức, bờn cạnh đú nhúm trẻ được nuụi bằng sữa mẹ với n =12 được sử dụng như nhúm tham khảo. Mẫu phõn của trẻ được thu thập vào ngày 1, 7, 14, và 28 ngày, và cỏc đặc tớnh của phõn, tăng trưởng, biến chứng cũng được thu thập và ghi lại. Kết quả nghiờn cứu cho thấy số lượng bifidobacteria ở nhúm bổ sung GOS/FOS cao hơn một cỏch cú ý nghĩa so với nhúm chứng (p=0,0008), trong thời gian can thiệp phõn của nhúm chứng trở nờn cứng hơn trong khi đú phõn ở cỏc nhúm khỏc thỡ ổn định [75]. Kết quả này cũng giống như kết quả nghiờn cứu của chỳng tụi trẻ ở nhúm synbiotic 1 cú số ngày phõn cứng ớt hơn rừ rệt (p<0,01). Một nghiờn cứu được tiến hành trờn 20 người trưởng thành tuổi từ 40 - 65, trong đú nhúm can thiệp được bổ sung 3 lần/ ngày 100 ml sữa lờn men bổ sung109CFU L. casei Shirota/ml và nhúm chứng được uống sữa khụng lờn men trong vũng 8 tuần. Kết quả cho thấy so với nhúm chứng thỡ nhúm can thiệp cú số lượng Lactobacillus trong phõn tăng lờn một cỏch rừ rệt, trong đú L.
casei Shirota là chủ yếu với số lượng 107 CFU/g phõn tươi và số lượng
cứu trờn người trưởng thành cho thấy việc bổ sung 250 ml sữa với cỏc liều khỏc nhau của Bifidobacterium lactis HN019 (DR10TM) [5 x 109 CFU/ngày (cao), 1,0 x 109 CFU/ngày (trung bỡnh) và 6,5 x 107 CFU/ngày (thấp)] trong vũng 4 tuần cho thấy sau can thiệp số lượng bifidobacteria, lactobacilli và enterococci trong phõn tăng lờn rừ rệt sau 4 tuần với số lượng trung bỡnh bifidobacteria ở nhúm chứng là 9,31 ± 0,01 log CFU/g phõn, ở nhúm liều cao, trung bỡnh và liều thấp, số lượng bifidobacteria cao hơn hẳn so với nhúm chứng (9,88 ± 0,1, 9,75 ± 0,14 và 9,74 ± 0,11 log CFU/g phõn, tương ứng) (p<0,006), kết quả cho thấy thậm chớ với liều thấp (6,5 x 107 CFU/ngày) cũng làm thay đổi số lượng bifidobacteria, lactobacilli, enterococci [24]. Một nghiờn cứu khỏc cho thấy việc bổ sung sớm B. breve cho trẻ cú cõn nặng sơ sinh thấp là cú ớch trong việc hỗ trợ hỡnh thành hệ vi
khuẩn chớ đường ruột và Bifidobacteria [104].
Trong một nghiờn cứu trờn 232 bà mẹ mang thai cú tiền sử bị dị ứng với việc bổ sung 1 x 10 CFU L reuteri (ATCC) 55730 hằng ngày trong vũng 4 tuần cuối trước khi sinh và con của họ được bổ sung như mẹ cho đến khi được 12 thỏng tuổi. Kết quả nghiờn cứu cho thấy Lactobacillus reuteri được tỡm thấy trong sữa mẹ và trong phõn của hầu hết trẻ tham gia nghiờn cứu [22].
Như vậy, nghiờn cứu của chỳng tụi cho thấy, đối với hệ vi khuẩn chớ đường ruột thỡ cỏc nhúm synbiotic cú tỏc dụng tớch cực lờn thành phần và tỷ lệ cỏc vi khuẩn cú lợi và hại của cơ thể, tuy nhiờn tỏc dụng này chưa thực sự ổn định. Nghiờn cứu cũng cho thấy BB12 cú thể sống và phỏt triển ổn định trong 6 thỏng can thiệp. Phần lớn cỏc nghiờn cứu đều cho thấy probiotic cú thể sống và tăng trưởng trong đường ruột của trẻ, tuy nhiờn tỏc dụng của probiotic khi bổ sung trong thời gian dài cần phải được nghiờn cứu thờm. Phần lớn cỏc nghiờn cứu can thiệp trong thời gian ngắn hoặc trong giai đoạn ban đầu thỡ tỏc dụng của probiotic tương đối rừ rệt hơn so với cỏc giai đoạn sau.
Tỏc dụng của synbiotic cú thể là do prebiotic và probiotic làm thay đổi hệ vi khuẩn trong đường ruột và do vậy làm tăng sức đề khỏng đối với cỏc bệnh nhiễm khuẩn thụng qua cạnh tranh và ức chế sự phỏt triển của cỏc vi khuẩn cú hại hoặc (tuyến bảo vệ đầu tiờn) và thụng qua việc thay đổi chức năng miễn dịch (tuyến bảo vệ thứ hai).
Một nghiờn cứu đó chỉ ra rằng việc bổ sung B. lactis BB12 và L. casei CRL431
kết hợp với 0,25 g galacto-oligosaccharides trong 100 ml sữa cụng thức là an toàn và khụng cú cỏc tỏc dụng cú hại lờn sự tăng trưởng và hành vi ở trẻ nhỏ ở Hà Lan [158]. Mặc dự khụng phải là mục tiờu nhưng nghiờn cứu của chỳng tụi cũng cho thấy việc bổ sung B. lactis BB12 và L. casei CRL431 cho trẻ em Việt nam là an toàn và dung nạp tốt khi kết hợp với GOS/FOS (9:1) trong sữa cụng thức (tỏc động tớch cực lờn tăng trưởng cõn nặng/chiều cao của trẻ, khụng tỏc dụng cú hại lờn tỡnh trạng nhiễm khuẩn của trẻ, tớnh chất phõn của trẻ phần nào được cải thiện, số lần đại tiện của trẻ cú xu hướng tăng ở cỏc nhúm synbiotic). Nghiờn cứu chỉ ra rằng cỏc nhúm trẻ được bổ sung prebiotic hoặc synbiotic cú ưu thế về tăng trưởng cõn nặng và chiều cao hơn so với nhúm chứng và ưu thế này được xỏc định ngay từ thỏng đầu tiờn và duy trỡ trong suốt thời gian nghiờn cứu, nhất là trẻ ở nhúm synbiotic 1. Tỏc dụng lờn tăng trưởng cho đến nay vẫn chưa được nghiờn cứu đầy đủ và phụ thuộc vào nhiều yếu tố như chủng probiotic, liều lượng, thời gian bổ sung và tỡnh hỡnh bệnh tật của trẻ.
Trong nghiờn cứu của chỳng tụi thỡ cỏc triệu chứng nhiễm khuẩn ớt bị tỏc động của việc bổ sung prebiotic và synbiotic, cú thể do liều bổ sung trong nghiờn cứu của chỳng tụi là thấp hơn so với cỏc nghiờn cứu khỏc [52], [76]. Bờn cạnh đú, trong nghiờn cứu của chỳng tụi, phần lớn trẻ vẫn tiếp tục bỳ mẹ bờn cạnh việc bổ sung prebiotic và synbiotic. Như chỳng ta đó biết sữa mẹ là tiờu chuẩn vàng cho sữa cụng thức, sữa mẹ giỳp trẻ phũng chống bệnh nhiễm khuẩn, kớch thớch sự phỏt triển của vi khuẩn cú ớch và làm phõn của trẻ mềm hơn. Trẻ bỳ sữa mẹ ớt bị
nhiễm khuẩn đường tiờu húa hơn so với trẻ uống sữa cụng thức [33], [47], [63], [86]. Điều này là do trong sữa mẹ cú cỏc yếu tố bảo vệ như khỏng thể IgA giỳp chống lại cỏc vi khuẩn gõy nhiễm khuẩn hụ hấp và viờm đường ruột cú trong mụi trường xung quanh người mẹ và trẻ, lactoferrin trong sữa mẹ cú thể tiờu diệt cỏc vi khuẩn gõy bệnh và ngăn ngừa chỳng bỏm vào màng nhày [86], sữa mẹ cũn chứa cỏc chất kớch thớch miễn dịch và chất chống viờm như leukocytes, cytokines, chemokines, húc mụn, cỏc acid bộo, muối khoỏng, vitamin và nucleotid. Cỏc chất này cũng cú thể ảnh hưởng lờn hệ miễn dịch [51], [90]. Cú thể trong nghiờn cứu của chỳng tụi tỏc dụng của việc bổ sung thờm prebiotic và synbiotic khụng được rừ ràng do trẻ đó cú cỏc yếu tố bảo vệ tốt từ sữa mẹ. Trong nghiờn cứu này của chỳng tụi, phần lớn cỏc trường hợp lượng sữa bổ sung cho trẻ