TÀI LIỆU THAM KHẢO
5.2Chuẩn bi mẫu:
Khi chuẩn bị mẫu để thí nghiệm thì cần sử dụng: > Sàng có đường kính lỗ 0.5mm.
> Cân kỹ thuật.
> Lọ thủy tinh miệng rộng có nút mài, dung tích 150 - 200 cm3. > Máy nghiền thí nghiệm.
Lấy 50 ± o.lg chè từ mẫu chè trung bình cho vào máy nghiền nhỏ, nghiền đến mức chè có thể lọt qua lỗ sàng đường kính 0.5mm. Sau đó, nhanh chóng cho chè đã nghiền vào lọ khơ có nút kín.
5.3
Dung cu;
Bát sứ có thể tích lOOcm3.
Bình cầu đáy có thể tích 500cm3 có nắp sinh hàn ngược. Nồi cách thủy.
Pipet có dung tích 50cm3.
Tủ sây điều chỉnh nhiệt độ 103 ± 20°c. Bình định mức có dung tích 500cm . Cân phân tích.
5.4
Tiến hành thí nghiêm:
Xác định độ ẩm của nguyên liệu.
Cân 3.75g chè, cho vào bình cầu có dung tích lOOcm3 và hịa chúng vào nước cất sôi, đun trên bếp cách thủy trong 60 phút, khuấy đều nước trong bình để chè khơng dính vào thành bình. Sau khi chiết thì tiến hành làm nguội nhanh bình dưđi vịi nước.
Dịch chiết được chuyển định lượng vào bình định mức có dung tích lOOcm3 để thêm nước cất cho đến vạch định mức và lắc đều. Sau đó lọc qua phiễu lọc khô.
Lấy 10cm3 dung dịch vào bát sứ khô đã biết trọng lượng. Cho bay hơi trên nồi cách thủy, sau đó đặt chén có phần cặn vào tủ sấy ở nhiệt độ 103 ± 2°c. sấy trong 2h, làm nguội và cân. Nếu cần, thiết lập lại những động tác trên cho đến khi hiệu số của hai kết quả cân liên tiếp không lớn hơn 0.002g.
6. Xác định hàm lưựng đường khứ: bằng phương pháp quang phổ so màu
6.1
Nguyên tắc:
Phương pháp dựa trên cơ sở phản ứng tạo màu giữa đường khử với thuốc khử dinitrosalicylic (DNS). Phương trình phản ứng:
Cường độ màu của hỗn hợp phản ứng tỉ lệ thuận với nồng độ đường khử trong một phạm vi nhất định, được đo bằng máy quang phổ so màu. Dựa vào đồ thị đường chuẩn của glucose tinh khiết với thuốc khử, tính hàm lượng đường khử của mẫu nghiên cứu.
6.2
Hóa chất;
Hịa tan trong nước mẫu và định mức lên lOOml. Acethate chì 10%.
Na2HPƠ4 bão hịa.
6.3
Tiến hành:
Xử lý mẫu:
> Cân 5g chè. Cho vào côi sứ nghiền thật nhỏ với 30ml nước cất nóng 70 - 80°c. Trích li nhiều
lần bằng nước nóng. Chuyển lượng dịch vào bình định mức, bỏ phần bã đã trích hết đường. > Thêm nước cất tới vạch định mức lOOml, lọc qua giấy lọc vào cốc hay bình khơ. Nước qua lọc
dùng làm dung dịch mẫu phân tích đường khử. Dựng đường chuẩn glucose: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Dung dịch glucose chuẩn: glucose 0.1%. Chuẩn bị dãy ông nghiệm theo bảng 0-1
NO2+ 3 Cf,HnOf, + 4NaOH + 3 Cf,HnOf, + 4NaOH )H N O: P H Ụ L Ụ C
Báng 0-1; Cách lấy hóa chất trong phân tích đường khử STT ĐC 1 2 3 4 5 Mẫu Dung dịch chuẩn 0.2 0.4 0.6 0.8 1 Dung dịch mẫu 1 Nước cất 3 2.8 2.6 2.4 2.2 2 2 Thuốc thử DNS 1 1 1 1 1 1 1
Để các ống nghiệm vào nồi cách thủy đang sôi đúng 5 phút.
Lấy ra, làm lạnh đến nhiệt độ phòng rồi đem đi đo mật độ quang ở bước sóng 540nm với mẫu đơi chứng là nước cất. Ghi các kết quả.
6.4
Xử lý kết quá:
Từ các kết quả đo dung dịch chuẩn, xây dựng phương trình và dựng đường chuẩn Glucose y = f(x) vđi trục tung là mật độ quang, trục hoành là hàm lượng Glucsoe (ppm). Tính hệ số tương quan bình quan bình phương R2 của đường chuẩn. Dựa vào đường chuẩn tính nồng độ (mg/ml) glucose trong dung dịch mẫu (X). Hàm lượng đường khử tính theo glucose trong nguyên liệu được tính như sau:
XV./.W0
1000.W
Với X: nồng độ đường khử trong dung dịch mẫu tính theo glucose, mg/ml. V: thể tích định mức cho dung dịch thí nghiệm, ml.
f: hệ sơ" pha lỗng.
m: khơi lượng mẫu thí nghiệm, g.
G: hàm lượng đường khử có trong nguyên liệu chè tươi (%).
Hàm lượng đường khử tính theo glucose có trong ngun liệu (tính theo khơi lượng chất khơ): _ G * 100
~ 100- w
Trong đó: G’: hàm lượng đường khử tính theo glucose có trong ngun liệu (tính theo % chất khơ).
G: hàm lượng đường khử tính theo glucose có trong ngun liệu (tính theo % lá chètươi).
7.1 Thiết bi: Thiết bi: Hệ thông phân tích HPLC. 7.2 Chẽ"độ vận hành: Cột C18. Bước sóng 275nm. Lưu lượng dịng 1 ml/phút.
Thành phần pha động là: KH2PO4 50mM (pH = 2):acetonitrile:methanol (40:8:2).
7.3
Chuẩn bỉ mẫu:
Chất chuẩn: dùng dung dịch caffeine tinh khiết làm chất chuẩn
Pha loãng mẫu chuẩn theo kiểu bậc thang: cân X mg chât chuẩn, định mức lên 100ml, lắc đều. Lấy 10ml pha loãng tiếp lên 100ml. Cứ pha lỗng như vậy cho tới nồng độ thích hợp. Trong thí nghiệm pha các dung dịch chuẩn ở các nồng độ từ 10 - 70ppm.
Mẫu thử:
3.75g chè được nghiền cắt và trích ly bằng cách đun trong lOOml nưđc sôi ở nhiệt độ
100°c trong khoảng thời gian 20 phút. Dịch trích được lọc và định mức lên 100ml. Sau đó dịch
trích được pha lỗng đến một giá trị thích hợp (pha lỗng 40 lần) và được tiêm vào thiết bị phân tích HPLC.
7.4
Xử lý kết quá: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Xây dựng đường chuẩn và chọn khoảng tuyến tính
Từ các giá trị xác định được từ các mẫu chuẩn, ta biết các các giá trị về diện tích peak ở mỗi nồng độ khác nhau.
Phương trình đường hồi qui c = f(A) có dạng c = kA.
ỵc,A,
Với k = —-----------
n
±4
Xét hệ số tương quan bình phương:
ấ(c,-cy R 2 =1-^=1--------------- Ẻ(C,.- C)2 i=l P H Ụ L Ụ C
Với c là giá trị trung bình.
Nồng độ caffeine trong mẫu pha loãng được xác định dựa trên đường chuẩn. Từ đó xác định hàm lượng caffeine trong mẫu phân tích bằng cơng thức sau:
Trong đó:
CM: nồng độ caffeine trong dung dịch mẫu phân tích, (ppm).
C: hàm lượng caffeine trong nguyên liệu phân tích (tính theo lá chè tươi), (mg%).
V1: thể tích định mức dung dịch thu được sau khi trích ly, (ml). V2: hệ sơ" pha lỗng, m:
khôi lượng mẫu, (g).
8. Phân tích hàm lưựng polyphenol tổng trong nguyên liệu;
8.1 Hóa chất:
Acid gallic chuẩn dạng bột của Nhật. Dung dịch K3Fe(CN)6 0.016M.
Dung dịch FeCỈ3 0.02N (pha trong HC1 0.1N).
Chất ổn định: là hỗn hợp nước cất:H3PƠ4 85%:gum arabic (1:1:1).
8.2
Chuẩn bi mẫu:
Mẩu được trích ly theo phương pháp của Suematsu et al: 0.5g nguyên liệu chè được nghiền cắt và trích ly với 100ml dung dịch acetonitrile-nước (1:1 v/v) ở nhiệt độ phòng trong 40 phút với thiết bị khuấy từ. Dịch trích thu được được lọc và định mức lại 100ml. Dung dịch thu dược dược pha lỗng 4 lần và dem di phân tích.