CHƯƠNG 2 : PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM
2.4. Khảo sát hoạt tính kháng cơn trùng
Ấu trùng Alphitobius diaperinus từ 10 - 20 ngày tuổi được cung cấp bởi trại
2.4.1. Xác định tính độc tiếp xúc
Phương pháp khảo sát tính độc tiếp xúc của các mẫu cao chiết được tiến hành dựa trên phương pháp của Supawan và cộng sự [82] với một số sự thay đổi cho phù hợp. Cao chiết được hoà tan trong hỗn hợp gồm 2 mL ethanol 96° và 5 mL dung dịch Tween 80 0,1%. 2 mL dung dịch thử được cho vào chai phun sương. 20 cá thể ấu trùng được cho vào đĩa petri và giữ ở nhiệt độ 30 ± 1 °C, và tiến hành phun mẫu thử lên cá thể. Ở mỗi lần thao tác, tiến hành xịt 2 - 3 lần và mỗi thao tác cách nhau 15 - 20 phút nhằm đảm bảo lượng dung dịch trong đĩa petri không thể làm cá thể tử vong do ngạt nước. Dung môi pha mẫu được sử dụng làm đối chứng âm và số lượng ấu trùng tử vong được xác định sau 24 giờ.
Độ hiệu quả (hay tỉ lệ tử vong) của mẫu thử được xác định theo công thức Abbott: (%) C T .100 H C (1) Trong đó: H: độ hiệu quả
C: số lượng cá thể sống trước khi phun T: Số lượng cá thể sống sau khi phun
2.4.2. Xác định khả năng kháng ăn
Khả năng kháng ăn của các mẫu cao chiết được tiến hành dựa trên phương pháp của Maqsood và cộng sự [83] với một số sự thay đổi phù hợp. Mẫu cao chiết được hòa tan trong ethanol 96° ở nồng độ gây chết toàn bộ cá thể khi thử nghiệm tính độc tiếp xúc. Mẫu lá được cắt thành hình vng có kích thước 4 cm x 4 cm và được nhúng ngập trong mẫu thử, để khơ ngồi khơng khí và được đặt vào giữa đĩa petri. 20 cá thể ấu trùng được đặt lên đĩa và quan sát kết quả sau 24 giờ.
2.4.3. Khảo sát tính hiệp đồng của các cao chiết
Mục đích của việc kết hợp hai hay nhiều chất với nhau giúp làm tăng hiệu lực trừ sâu, nhờ tác động này sẽ giảm được số lần phun thuốc, giảm chi phí phun và diệt đồng thời nhiều lồi dịch hại cùng lúc. Từ kết quả khảo sát tính độc tiếp xúc và khả năng kháng ăn, các cao chiết có tiềm năng sẽ được lựa chọn để tiến hành đánh giá khả năng tương tác giữa các loại cao chiết với nhau. Các thí nghiệm khảo sát tính tương tác được thực hiện tại nồng độ LC50 của từng cao chiết và được pha thành hỗn hợp ở các tỉ lệ 1 501: 502
2LC LC , 501:1 502
2
LC LC , LC LC501 : 502, 2LC LC501: 502, LC501:2LC502. Khả năng tương tác giữa các mẫu thử được đánh giá theo 2 mơ hình cơ bản:
a) Mơ hình tác động đồng thời lên cùng vị trí (mơ hình 1)
Giả thuyết được đặt ra ở mơ hình 1 chính là 2 cao chiết tác động đồng thời lên cùng 1 vị trí receptor, qua đó làm tăng hoặc giảm độc tính của hỗn hợp sau phối trộn lên đối tượng thí nghiệm [16]. Giá trị kết quả kỳ vọng của mơ hình 1 được theo công thức: 1 1 i n i x mix i x p EC EC (2)
Trong đó: ECx mix: tổng nồng độ của hỗn hợp gây x% tử vong (mg/mL)
i
p: phần khối lượng của cấu tử thứ i trong hỗn hợp
i
x
EC : nồng độ gây tử vong x% của cấu tử thứ i n: số cấu tử trong hỗn hợp
b) Mơ hình tác động lên hai vị trí riêng biệt (mơ hình 2)
Mơ hình đưa ra giả thuyết các cao chiết tác động lên các vị trí khác nhau trên 1 cá thể, qua đó làm thay đổi độc tính của hỗn hợp. Có thể nói rằng, mơ hình 2 chỉ là
cách giải quyết vấn đề dựa trên xác xuất [16]. Giá trị kết quả kỳ vọng của mơ hình 2 được tính theo cơng thức:
1 ( mix) 1 n (1 ( ))i i E c E c (3)
Trong đó: E c( )mix : xác suất tử vong của hỗn hợp (%)
( )i
E c : xác xuất tử vong của cấu tử thứ i theo nồng độ riêng trong
hỗn hợp (%)
n: số cấu tử trong hỗn hợp
Sự chênh lệch giữa giá trị thực tế và giá trị kỳ vọng được thể hiện qua hệ số MDR (model deviation ratio). MDR được tính theo cơng thức sau:
+ Mơ hình 1:
MDR = Giá trị kỳ vọng/Giá trị thực nghiệm + Mơ hình 2:
MDR = Giá trị thực nghiệm/Giá trị kỳ vọng
Khả năng tương tác giữa các cao chiết được đánh giá thông qua hệ số MDR với: - MDR > 2: các cao chiết thể hiện tính hiệp đồng
- 0.5 < MDR < 2: các cao chiết cộng tính với nhau - MDR < 0.5: các cao chiết thể hiện tính đối kháng