Thành phần Hàm lƣợng K2O 3,9 Na2O 0,5 CaO 11,9 MgO 11,5 P2O5 40,5 SiO2 25,3 (Densikow, 1963) Ứng dụng hiện nay của bã malt tƣơi và khơ là để làm thức ăn gia súc, có khả năng kích thích tạo sữa và thịt khá tốt, do đó nó đƣợc dùng là thức ăn cho bò sữa, trâu bò lợn,…Trên thế giới, bã malt bia đƣợc sử dụng phổ biến làm thức ăn cho chim, dê, cá,.. Ngồi ra bã malt bia cịn đƣợc sử dụng làm phân hữu cơ, làm nguyên liệu để trồng nấm. Tại New Zealand nhà máy bia DB Export tuyên bố đã chế tạo thành công xăng sinh học mang tên "Brewtroleum" bằng cách tận dụng bã bia. Tại Việt Nam đã có những nghiên cứu ban đầu tận dụng bã bia để làm để làm nƣớc chấm lên men.
CHƢƠNG II. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Vật liệu 2.1. Vật liệu
2.1.1.Vật liệu, dụng cụ và thiết bị nghiên cứu 2.1.1.1 Mẫu đất, lá dùng cho phân lập 2.1.1.1 Mẫu đất, lá dùng cho phân lập
286 mẫu đất và 31 mẫu lá đƣợc sử dụng làm nguồn phân lập vi khuẩn B.
thuringiensis đƣợc thu thập từ các vùng Điện Biên, Hà Nội, Nghệ An, Nha Trang
(Khánh Hịa), Lâm Đồng, TP Hồ Chí Minh, Kiên Giang. Những khu vực lấy mẫu này chƣa đƣợc sử dụng bất kỳ một loại chế phẩm BT nào. Những mẫu đất, lá này nằm trong bộ sƣu tập của Trung tâm Giống và Bảo tồn nguồn gen Vi sinh vật, Viện Công nghệ Sinh học .
2.1.1.2. Bã malt bia
Bã malt bia đƣợc lấy từ nhà máy bia Sài Gòn- Hà Nội thuộc khu công nghiệp vừa và nhỏ quận Bắc Từ Liêm.
2.1.1.3. Côn trùng thử nghiệm
Ấu trùng ruồi nhà (Musca domestica) tuổi 2; ruồi đục quả (Tephritidae) đƣợc cung cấp từ bộ môn Côn trùng-Viện Bảo vệ thực vật.
Ấu trùng muỗi Anopheles minimus, Aedes aegypti, Culex quinquefasciatus
do Viện sốt rét ký sinh trùng Trung ƣơng cung cấp.
2.1.2. Chủng vi sinh vật
Chủng vi khuẩn E. coli DH5α dùng cho tách dòng gen và chủng vi khuẩn E.coli BL21 dùng để biểu hiện gen của hãng Invitrogen.
Chủng B.thuringiensis 4D4 có nguồn gốc từ Bộ sƣu tập Bacillus thuringiensis của đại học Colombus, bang Ohio, Hoa Kỳ
2.1.3. Cặp mồi khuếch đại gen cry2A và hệ vector
Trình tự cặp mồi khuếch đại gen cry2A
Cặp mồi khuếch đại gen cry2A đƣợc thiết kế dựa trên các đoạn trình tự bảo thủ của gen cry2A đã đƣợc công bố trên ngân hàng gen (GenBank).
Tên mồi Trình tự Vị trí nhận biết Kích thƣớc (bp)
Cry2AaF TAAGGATCCGATGAATAATGTATTGAATAGTGGAAGA BamHI 1902
Cry2AaR ATTCTCGAGATAAAGTGGTGGAAGATTAGTTGG XhoI
Hệ vector
Vector pET22b (+) của hãng Novagen, vector pGEM-T mạch thẳng có đầu T đƣợc đóng gói kèm trong bộ kit pGEM®-T Easy Vector Systems của hãng Promega, TA Cloning® Kit with pCR™2.1 vector (Thermosciencetific) do Trung tâm Giống và Bảo tồn nguồn gen Vi sinh vật, Viện Cơng nghệ Sinh học cung cấp.
2.1.4. Hóa chất
Hóa chất dùng cho phân lập và nuôi cấy: Cao thịt, Pepton, Trypton, cao men, agar
Hóa chất dùng nhuộm bào tử và tinh thể: fushin axit, fushin bazơ.
Hóa chất sử dụng trong điện di: agarose, SDS, Tris- base, TAE, loading dye 6x.
Hóa chất sử dụng trong phản ứng PCR: dNTPs, đệm, nƣớc khử ion, Taq
DNA polymerase, DNA khuôn.
2.1.5. Thiết bị
Các thiết bị sử dụng trong nghiên cứu thuộc phịng Di truyền Vi sinh vật và Phịng thí nghiệm Trọng điểm công nghệ gen Viện Công nghệ Sinh học, gồm có: máy chạy PCR (PTC-100,Mỹ), bộ điện di DNA (Thụy Điển), máy soi gel (Vilber Lourmat, Đức), máy chụp ảnh gen (Gen Doc pharmacia), máy li tâm, kính hiển vi đối pha (Nicon, Nhật Bản), máy Vortex (Olympus, Nhật), máy đông khô (Đức), tủ lạnh sâu -86 0C, Panasonic - Nhật, lò vi sóng, tủ ấm (Frigor, Đan Mạch), máy lắc ổn nhiệt (Shellab,NhậtBản), tủ ấm (Binder,NhậtBản), tủ sấy khô (Sellab–Mỹ), nồi khử trùng (SA-300VF,Mỹ), thiết bị lên men 15l (New Brunswick (Mỹ).
2.1.6. Môi trường nuôi cấy
Các môi trƣờng nuôi cấy vi sinh vật sử dụng cho các thí nghiệm đƣợc trình bày tại Bảng 2.1.