Để tinh sạch sơ bộ cellulase, C-DC sau khi nuôi cấy theo quy trình được tiến hành kết tủa với các loại dung môi là ethanol 960, aceton 99,5% và ammonium
sulfate ở nồng độ 70%, giữ ở 40C trong thời gian 30 phút. Sau đó ly tâm ở chế độ 12000v/phút ở 40C, loại bỏ dịch trong, thu được kết tủa nhão là CPE. Hòa tan CPE trong nước cất rồi dẫn đến cùng một thể tích như nhau và xác định hoạt độ cellulase. So sánh hiệu suất thu nhận chế phẩm của 3 loại dung môi và đường kính thủy phân cơ chất CMC 0,5% của dịch tủa. Kết quả nghiên cứu được thể hiện trung bình của 3 lần thí nghiệm của mỗi tác nhân kết tủa ở bảng 3.8 và hình 3-23.
Bảng 3.8. Ảnh hưởng của tác nhân tủa khác nhau đên C-CPE cellulase
Micromonospora VTCC-A-1787
Dung môi hữu cơ
Khối lượng kết tủa trung bình (g)
Hiệu suất thu nhận (%)
Hoạtđộ CPE (UI/g)
Aceton 99,5% 1,61 ± 0,035 4,03 152,7 ± 0,023
Ethanol 960 2,57 ± 0,047 6,43 181,1 ± 0,01
Ammonium sulfate Không có hiện tượng kết tủa
Hình 3-23. Kết quả đường kính thủy phân trước và sau khi kết tủa Từ kết quả bảng 3.8 và hình 3-23 cho thấy phương pháp tủa sử dụng dung môi hữu cơ chỉ có aceton và ethanol là có hiện tượng kết tủa và không có hiện tượng kết tủa khi sử dụng ammonium sulfate bão hòa. Khi kết tủa enzyme cellulase bằng ethanol 960 ở nồng độ 70% thì thu được lượng CPE và có hoạt độ cellulase cao hơn khi sử dụng aceton ở cùng nồng độ. Loại dung dịch dùng để kết tủa có ảnh hưởng khác nhau đến hoạt tính cellulase của dịch chiết và hiệu suất chiết rút protein
– enzyme đặc hiệu. Cụ thể, hoạt tính cellulase khi kết tủa bằng ethanol là 182,1UI/g, H = 32mm, hoạt tính giảm so với dịch thô ban đầu, trong khi đó sử dụng aceton hoạt tính còn 152,7UI/g, H = 28mm giảm so với dịch thô ban đầu.
Do vậy, ethanol được chọn là tác nhân kết tủa để thu C-CPE.