Các môi trường sử dụng nuôi cấy
Các chủng Micromonospora VTCC được nuôi cấy trong 3 môi trường
Bảng 2.2. Thành phần hóa học môi trường nuôi cấy Tên môi trường (g/l)
Tên hóa chất Gause - I ISP – 4 YS Tinh bột tan 20 10 10 K2HPO4 0,5 1 - MgSO4.7H20 0,5 1 - FeSO4 0,01 - - CaCO3 - 2 - KNO3 1 - - NaCl 0,5 1 - (NH4)2SO4 2 2 - Agar 20 18 15 Cao nấm men - - 2 Tổng thể tích pH 1000 ml nước cất 7÷ 7,2 1000 ml nước cất 7 ÷ 7,3 1000 ml nước cất 6,5 ÷ 7 Hấp khử trùng 1210C/30p 1210C/30p 1210C/30p
Các cơ chất bổ sung vào môi trường nuôi cấy
Sử dụng các nguyên liệu thực vật bổ sung vào môi trường nuôi cấy đều dưới dạng bã phế phẩm nông nghiệp và vẫn còn các thành phần hóa học nhất định bao gồm các acid amin, các chất khoáng (Ca, Mn, Zn, Fe) và vitamin.
- Bột cá: Từ nguyên liệu cá cơm khô mua tại chợ Vĩnh Hải-Nha Trang, được sấy khô, nghiền nhỏ có độ ẩm 21,8% và tro 27,3%.
- Bã rơm: Hàm lượng cellulose 34÷37%, có độ ẩm 12,3% và tro 22,7%. - Bã mía: Là phần thân còn lại của cây mía sau khi khai thác nước mía, chiếm khoảng 2/3 chất khô trong cây mía. Thành phần bã mía gồm chất xơ (cel) khoảng 40÷50%, khoáng, hàm lượng nước còn rất ít. Bã mía (độ ẩm 15%, tro 14,3%) và mật rỉ đường là phế liệu từ mía Mật của nhà máy cổ phần đường Ninh Hòa.
- CMC (CH2COOH): Dạng bột trắng, không mùi, là một trong những dẫn xuất quan trọng nhất của cel, được hình thành từ phản ứng este hóa và có thể tan trong nước nhờ các nhóm thế hóa học. Cellulase cắt liên kết β-1,4-glucoside một cách ngẫu nhiên, làm giảm mức độ polymer hóa, dẫn đến làm giảm độ nhớt của CMC nên CMC thường được sử dụng với vai trò vừa là chất cảm ứng sinh enzyme, vừa là cơ chất để xác định hoạt độ của enzyme này.
- Bột đậu tương: Sử dụng đậu tương nguyên vỏ, được mua ở chợ Vĩnh Hải-Nha Trang. Màu trắng, rang lên và xay mịn, có độ ẩm 12,1% và tro 17,2%.
- Mật rỉ đường: Là phế liệu chứa nhiều đường không kết tinh trong sản xuất đường từ mía mật. Thành phần chính là nước chiếm 15÷20%, đường chiếm 60% (35÷40% là saccharose, 20% là fructose và glucose). Ngoài ra còn các thành phần phi đường là hợp chất vô cơ và hữu cơ, các chất khoáng và các acid amin.
- Pepton: Vừa nguồn carbon và nitơ, thường được biết đến như là nguồn nitơ hữu cơ. Là chế phẩm thủy phân không triệt để của một nguồn protein nào đó, chúng khác nhau về lượng chứa các loại polypeptide và lượng amino acid tự do.
Bảng 2.3. Thiết bị được sử dụng trong thí nghiệm Tên thiết bị Thông số kỹ thuật
( Mã hiệu, Serial )
Hãng sản xuất (Quốc gia) Box cấy vi sinh vật Telstar AV 100 Tây Ban Nha
Cân phân tích AY220 Shimadzu/Nhật
Cân kỹ thuật BL3200 Shimadzu/Nhật
Lò vi sóng phá mẫu MS-194W LG, Hàn Quốc
Máy cất nước A4000D Bibby, Anh
Máy chuẩn pH tự động
Máy định lượng protein bằng quang phổ hấp thụ phân tử (UV/VIS)
Cary100 Bio Varian, Mỹ
Máy khuấy từ gia nhiệt RH Basic KTC IKA/Đức
Máy lắc vòng 3005 GFL, Đức
Máy li tâm lạnh Eppendorf Centrifuge 5417R Mỹ
Máy li tâm lạnh thể tích 50ml Mega 17R Labkorea, Hàn Quốc Máy trộn mẫu (Vortex) MS2 Minishaker IKA, Đức
Micropipet:
0 ÷ 100l, 100 ÷ 1000 l
Isolab Đức
Nồi hấp thanh trùng SA-300VF Sturdy, Đài Loan
Tủ ấm INE500 Memmert, Đức
Tủ lạnh 40C, -200C, -800C VR18E6 Daewoo
Tủ sấy ED 115 Binder, Đức
Tủ sấy hút chân không LVO2040 Labtech, Hàn Quốc Kính hiển vi mắt ngắm có
camera và máy tính