Tuần tuổi Vaccine Phòng bệnh Nước pha Liều dùng Cách dùng 16 Nobilis Ma5+Clone 30 VPQTN+New Solvence 1 giọt/con Nhỏ mắt
19 Nobilis Cor4+IB+ND+ EDS
Sổ mũi truyền nhiễm+ VPQTN+New+Hội chứng giảm đẻ 0.5 ml/con Tiêm cơ
21 Nobilis Cor4+IB+ND+ EDS
Sổ mũi truyền nhiễm+ VPQTN+New+Hội chứng giảm đẻ 0.5 ml/con Tiêm cơ 23 Nobilis Cor4+IB+ND+ EDS
Sổ mũi truyền nhiễm+ VPQTN+New+Hội trứng giảm đẻ 0.5 ml/con Tiêm cơ 25
Tiêm virus cường độc vô hoạt cho gà ở lô TN I lần 1, Lô II không tiêm. Tiêm virus cường độc vô hoạt cho gà ở lô TN I lần 2, Lô II không tiêm. 27 Không tiêm vaccine hay virus. 29 Không tiêm vaccine hay virus
3.4.2. Phương pháp lấy và bảo quản huyết thanh
Phương pháp lấy máu gà
Vị trí: lấy máu ở tĩnh mạch cánh. Đây là phương pháp tốt và đơn giản nhất đối với gà, gà tây và với hầu hết các loại gia cầm khác nuôi trong điều kiện tự nhiên. Bộc lộ cánh, dùng cồn 70° để sát trùng chỗ lấy máu rồi tiến hành lấy máu.
Cách chắt huyết thanh
Máu gà sau khi lấy xong để ở tủ ấm 37°C 1 giờ rồi để ở 4°C , sau 1-2 giờ lấy ra chắt huyết thanh. Huyết thanh được chắt ly tâm ở 1500 vòng/phút trong 5 phút. Nếu huyết thanh sau khi chắt xong chưa làm ngay thì bảo quản huyết thanh ở tủ âm 20°C.
3.4.3. Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể và độ dài đáp ứng miễn dịch sau khi tiêm vaccine bằng phản ứng HI sau khi tiêm vaccine bằng phản ứng HI
Sử dụng phản ứng ngưng kết hồng cầu gà (HA) để xác định sự có mặt của virus và phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà (HI) để xác định hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh của gà.
3.4.3.1. Phản ứng HI (phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà) với huyết
thanh, lòng đỏ trứng và sản phẩm IgY
Nguyên lý của phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu-HI:
Đối với gà mắc bệnh Newcastle hoặc đã được tiêm phịng vaccine Newcastle thì trong huyết thanh gà có kháng thể đặc hiệu chống lại virus Newcastle, kháng thể trung hịa virus làm cho nó mất khả năng ngưng kết hồng cầu gà.
a. Nguyên liệu:
- Dung dịch PBS 1X - Hồng cầu gà 1% - Huyết thanh kiểm tra
- Đĩa ngưng kết 96 giếng đáy chữ V hoặc chữ U.
- Kháng nguyên chuẩn Newcastle (được cung cấp bởi Phịng thí nghiệm trọng điểm cơng nghệ sinh học Khoa Thú Y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam).
b. Cách pha và chuẩn bị các nguyên liệu
- Cách pha dung dịch PBS 1X từ dung dịch PBS 10X: pha theo tỷ lệ 1 PBS 10X : 9 nước cất.
Ví dụ: Lấy 900 ml nước cất cho vào bình thủy tinh sạch, sau đó cho 100 ml dung dịch PBS 10X rồi lắc đều.
- Cách chuẩn bị huyễn dịch hồng cầu gà 1%
Gà lấy máu là gà khỏe mạnh, âm tính với kháng thể Newcastle. Ni gà ở chuồng an tồn dịch bệnh, dùng để lấy máu thường xuyên.
Vị trí lấy máu: Lấy máu ở vị trí tĩnh mạch cánh, sát trùng vị trí lấy máu bằng bông cồn 70°.
Dùng xi lanh 5ml hút khoảng 0.2 ml dung dịch chống đông Natricitrat 5%, rồi dùng xi lanh lấy 3-4ml máu gà.
Rửa hồng cầu: Chuyển máu chống đông vào ống fancol 15 bổ sung thêm dung dịch PBS 1X đến vạch 10ml, lắc nhẹ. Ly tâm ở 1500 vòng trong 5 phút, loại bỏ huyễn dịch ở trên. Lặp lại như trên từ 2 đến 3 lần. Sau lần ly tâm cuối cùng, bỏ huyễn dịch phía trên thu hồng cầu phía dưới sử dụng để pha lỗng.
Pha hồng cầu thành huyễn dịch 1%. Ví dụ: 1ml hồng cầu đặc với 99 ml dung dịch PBS 1X. Bảo quản huyễn dịch hồng cầu ở nhiệt độ từ 4°C-8°C. Hồng cầu sau khi pha có thể dùng trong một tuần, nếu huyễn dịch hồng cầu bị dung huyết phải loại bỏ. Hồng cầu đã rửa nếu không dùng hết, cần cho nước muối sinh lý hoặc PBS 1X vào bảo quản, khi cần ly tâm lại để dùng.
c. Trình tự tiến hành phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI
Xác định lại hiệu giá của kháng nguyên chuẩn Newcastle bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu- HA ( Hemagglutination test)
Nguyên lý của phản ứng HA:
Trên bề mặt của virus Newcastle có kháng nguyên HN có khả năng gắn với thụ thể của hồng cầu gây ngưng kết hồng cầu, ta có thể quan sát được hiện tượng này bằng mắt thường.
-Nguyên liệu:
+ Hồng cầu gà 1%,
+ Kháng nguyên chuẩn Newcastle + Dung dịch PBS từ 7,0-7,4
+ Đĩa 96 giếng đáy chữ V hoặc chữ U + Bộ dụng cụ pipette, đầu tipe….