Nguyên liệu Giếng 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ĐC PBS (µl) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 Kháng nguyên (µl) 25
Trộn đều, chuyển 25 µl từ giếng thứ nhất đến giếng thứ 11
rồi hút bỏ 25 µl 0
Hồng cầu
gà (µl) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
Độ pha loãng KN
Dùng đĩa 96 giếng, đáy chữ V hoặc chữ U. Bổ sung 25 µl PBS từ giếng thứ nhất đến giếng thứ 12. Thêm 25 µl kháng nguyên vào giếng thứ nhất
Pha loãng kháng nguyên: Trộn đều kháng nguyên với PBS ở giếng thứ nhất, hút 25 µl chuyển sang giếng thứ hai rồi trộn đều bằng pipet, hút 25 µl chuyển sang giếng thứ 3 trộn đều, tiếp tục làm như vậy cho đến giếng thứ 11, hút bỏ 25 µl ở giếng thứ 11. Giếng 12 chỉ có PBS để làm đối chứng hồng cầu.
Nhỏ thêm 25 µl PBS vào tất cả các giếng.
Thêm hồng cầu: Cho vào mỗi giếng 25µl hồng cầu gà 1%, lắc nhẹ 1 phút. Để đĩa phản ứng ở nhiệt độ phòng. Sau 30 phút đọc kết quả, không nên đọc kết quả sau quá 30 phút.
- Đọc kết quả:
+ Phản ứng dương tính: Có hạt ngưng kết lấm chấm.
+ Phản ứng âm tính: Hồng cầu lắng xuống đáy tạo thành chấm tròn.
Hiệu giá ngưng kết HA được tính ở độ pha lỗng kháng ngun cao nhất còn xuất hiện ngưng kết hồn tồn. Ví dụ: giếng cuối cùng cịn có ngưng kết hoàn toàn, hiệu giá HA= 1/256 ( hay 8log2).
Cách pha và chuẩn độ kháng nguyên 4HA(thống nhất cách đánh dấu đầu mục cùng loại)
Ví dụ: Hiệu giá kháng nguyên trong phản ứng HA là 1/256 thì 4HA bằng 1/256×4=1/64.
- Pha 4HA gồm 1 phần kháng nuyên và 63 phần PBS 1x. Chuẩn độ kháng nguyên 4HA bằng phản ứng HA.
- Cách chuẩn độ kháng nguyên 4HA: