Phần 2 Tổng quan tài liệu
2.4.4.Tách chiêt IgY từ lòng đỏ trứng gà
2.4. Kháng thể IGY
2.4.4.Tách chiêt IgY từ lòng đỏ trứng gà
Sau khi đã chủng ngừa cho gà mái để sản xuất kháng thể IgY và thu thập trứng miễn dịch, bước tiếp theo là thanh lọc IgY khỏi lòng đỏ trứng. Không giống như huyết thanh, có chứa một số nhóm immunoglobulin-IgG, IgM, IgD, IgA và IgE, lòng đỏ chỉ chứa một loại kháng thể-IgY. Tuy nhiên, lòng đỏ trứng là một hỗn hợp phức tạp của nước (50%) lipit (32-35%) và protein (16%) 1 và trong hầu hết các mục đích thí nghiệm, ít nhất, nên tinh chế một phần protein IgY, bằng cách loại bỏ phần lớn lipit và lipoprotein. Protein cư trú trong lịng đỏ có 4 loại: lipovitellin, lipoprotein chứa phốt pho (40%), apovitellenin, chứa ít phốt pho hơn nhưng nhiều lipid hơn (37,3%), phosvitin, phosphoprotein (13,4%) trong đó IgY là part1. Loại bỏ lipit lịng đỏ và lipoprotein để lại một phần hòa tan trong nước, có chứa IgY cùng với các protein khác, có thể so sánh một cách thơ bạo với huyết thanh động vật, về khả năng sử dụng trong xét nghiệm miễn dịch. Một số phương pháp loại bỏ hầu hết các lipit/lipoprotein đã được mô tả.
Việc sản xuất IgY được thực hiện theo một quy trình kiểm sốt vơ cùng chặt chẽ từ khâu chọn giống gà mái, quy trình chăn ni gà tới tiêm kháng nguyên cho gà mái để tạo kháng thể, thu hoạch lòng đỏ trứng rồi tách chiết, tinh chế lấy kháng thể IgY (Ovalgen).
Việc chọn kháng nguyên dùng để gây miễn dịch là bước quan trọng nhất, quyết định tới hiệu quả phòng ngừa và điều trị bệnh của kháng thể IgY. Kháng nguyên phải đủ độ tinh khiết và được chế từ những tác nhân gây bệnh (vi khuẩn, virus, nấm… gây bệnh). Ví dụ, để tạo kháng thể IgY phịng ngừa5các nhà khoa học lựa chọn kháng nguyên là các chủng Cúm H1N1, H3N2, cúm B, để phòng ngừa Cúm gia cầm H5N1 thì lựa chọn kháng nguyên là Cúm H5N1. Sau đó những kháng nguyên này sẽ được dùng tiêm tối miễn dịch cho gà mái để tạo kháng thể đặc hiệu. Chọn giống gà phù hợp góp phần làm tăng hàm lượng IgY đặc hiệu trong trứng, do đó làm tăng sản lượng và chất lượng của sản phẩm thu được vì mỗi giống cho đáp ứng miễn dịch với từng loại kháng nguyên khác nhau. Ở Nhật luật pháp cấm dùng kháng sinh trong thức ăn gà đẻ nên đảm bảo các thành phẩm Ovalgen khơng có dư lượng kháng sinh.
Trứng gà thu được từ gà đẻ được đưa đến phòng nghiên cứu để tách lấy lịng đỏ. Lịng đỏ trứng được Pasteur hóa để diệt trùng sau đó đưa vào máy phun sấy chế thành bột. Nhiệt độ trong máy phun phải vừa đủ cao để tạo bột vừa giữ cho kháng thể IgY khơng bị mất hoạt tính. Sau đó bột lịng đỏ sẽ được tách mỡ,
tinh chế theo quy trình đã được bảo hộ sở hữu trí tuệ của Viện nghiên cứu miễn dịch Gifu để thu được kháng thể IgY tinh khiết (Ovalgen). https://igygate.vn- /cong-nghe-va-quy-trinh-san-xuat-igy-467/.
Hình 2.5. Quy trình cơng nghệ sản xuất chế phẩm kháng thể IgY tại Học viện Nông Nghiệp Viêt Nam (Thú Y)
PHẦN 3. ĐỐI TƯỢNG - NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU